【doc】分娩后小鼠腹腔巨噬细胞的形态学观察及溶菌酶测定

【doc】分娩后小鼠腹腔巨噬细胞的形态学观察及溶菌酶测定 分娩后小鼠腹腔巨噬细胞的形态学观察及 溶菌酶测定 Chayvialle等人报导的人胚版腺D尬的分布似,此;蛳岛尚采形成,D细胞常位于小导管附近并散在 分布而新生期已有很小胰岛可见,这时D细胞也明显分布在胰岛厢边与成鼠臻岛D细胞分布位置极为相 似,但仍靠近导管(耍3).从胎栩小鼠胰缘D细胞靠近小导管她的现象来看,可能提示内分泌部与外分泌 部之间在发生学上有很密切的关系.1987年,Teitelma~[提到小氯胰内外分珏部都来自AADC(Aromatte L-aminoaciddecarboxyIase)}勺前身细胞,但关子获岛内分泌细胞的发生米源尚有争论. 圈版说明{日见封3下) 1.哺乳期小鼠胃戡门P细胞,PAP×dO09.95)id,鼠i=描D细胞,PAI'×400.0.哺乳掘小鼠胰岛 D缅胞,PAPx490.4.成热匀小鼠日臼r丁幻胞,PAP~490 参考文献 [13Lar~sonL1:Ontoge:DafPepltidc—producingnerves pancreaticregion.Histochemistry5;133,1977 [23LehyTIQ11ant]taUonofgas/rioandsomatostatia rat.CellTissueRes198I325,1979 ,ndendocrineceilsofthegastr.一du0de?o? cellpop:;latio~intheantral:rlltlel2,$aofthe [3]KataokaKIO~togeayofgastriacellsinthepylorlc,~ntrumandduodenumofthemou 钟.Cell TissueRes239:-531.1919 [胡壬庆堂等大鼠胃幽l1D纽臆内生长扦素柏组织化学观察.辩剖学杂志 10(3):190,1987 [5]冈邑t断奶瓠起的鼠日,柱丘下部硬脑垂柞曲胃泌素,生长抑素的政立.日卒内分 泌学杂盎5?(舢t605, 1.83 [63ChayvJalIeIA:0ntogeuyofsomatostatJ~cellsiatheh~mangastfo— intestinaltract.endocrine paacrea?andhypotha1amns.ActaE~docrinol94:1,1980 [73TeiteImaaGIExpressionofcelltype— specificmarkersduringpancreaticderelopmentinthe I:13Ollseimplicationfofpancreat{ccolIl;neages.CellTissueRes250(2)I435,1981 oNToGENYoFSOMATOSTAT1NCELLINGAS0一DU0DEN0一 PANCREATICREGIoNoFTHEMOUSE. MuShcnghungetal (Depar~mcniolHistology&EmSryolopy,Tongji5fedicalUniversity) Usingimmllnohistochemiea!method(PAP),wehaveobservedtheDcellshgastro— duodeno? pancreaticregionofmousefetuses,youngandadultmouses.Theresultshowsthatthenumber and distriblltionoftheDcellsaredifferentintheseregion~ofdifferentperiods.Wefoundthatoccu rrence ofDcellsinpam:reasandduodenum'ofm0u5efetuses,batnotpylozicantrum.Dceilso~euran d increasegraduallyinpylozlct?t邶,hatdeeTe&Seliltlenduodenum自 stimegoSngafterbirth. 分娩后小鼠腹腔巨噬细胞的形态学观察及溶菌酶测定 高玉民尹听朱秀雄 (白求恩医褥大学组甥胚胎教研室) 提要小鼠脚腔臣噬细胞(M十)于虹振j刊川持螳J自如-尤妊娠唑婀羽1分娩后增 加最为显着.用普通光显 微镜,扫描电镜要透射电铺观察,讣婉后小鼠脾腔M竹形志具有明显的不同,呈理出功能许跃的形态学特 征.分娩后小鼠腹腔M+的褥噬能力倍曲M+——自体胸腺细胞藏环的凿力都高于对照纽,分娩后小鼠血清 蒂酶活性亦研显增高a试验培幂裘叽丹娩嚣小鼠腹腔M+她于极其活跃时机船牧卷.[关键词]腹腔巨嘴细胞, ?157? 稿隹瞎,M{——自体胸腺细胞花 环.[Keywords]peritonealmacrophage~lysozym.,macrophag thymocyti~autorosette. 巨噬细胞(M?)分布广泛,具有多方面的功能.随着生殖免疫研究的深八,关于妊娠期间及分娩后母 体M的功能特性,探讨此间M?在免疫过程中作用的研究受到重视『】】. 本实验是在对妊娠期及分娩后小鼠腹腔M?计数及其吞噬功能研究的基础上_1'I],对分娩后小鼠腹腔 M的形态及其与自体胸腺细胞形成花环的能力,以及血清溶菌酶活性进行了研究,旨在进一步揭示分娩 后小鼠腹腔M?的某些形态与功能特征. 材料和方法 1.小鼠腹腔M?的收集:昆明种雌性小白鼠l00只,体重25g左右.试验组小鼠50只,于分娩当日向小 鼠腹腔内注射0.85生理盐水2m】,3日后用含1小牛血清的Hanks液冼出腹腔M对用组选未妊娠小鼠, 50只,收采腹腔M?方法同上.2.普通光镜及扫描电镜标本制备t将小氟馒腔洗出藏移八放有盖玻片的培 养瓶内,37"G温育3O分钟.部分盖玻片甲醇同定,Giemsa染色,普通光磕下观察部分盖玻片经扫描电 镜样品常规翩备,ms一650型扫描电镜观察.3.透射电镜标本制备t将小鼠腹腔液移八离心管,1500rpm离心 2O分钟,拨出沉淀物,o.5戊二醛及o.5多檗甲醛固定.沉淀物切成Imm小块,0.IMPBS反复冲洗,1% 镰酸后固定,EPo~8]2包埋,LKIt超薄切片,枸椽酸铅和醋酸铀双重染色,JEM7型透射电镜观察.4.血清 溶菌酶涮定;实验组小鼠于分娩当日取血,取未妊娠鼠血为对照.以微球菌为底物,制成含菌的琼脂板. 在板上打孔,孔径2.5如n.用微量注射器在孔中分别加^溶菌酶或血清样品25L,37?保温12小 时.铷定溶菌环直径,比较实验组醍对照组溶菌环直径.5.M年一自体胸隙细胞花环彤成试验?实验过 程按其它作者描述的方法进行1.镜下每个M周国粘附3个以上胸腺细胞为阳性花环,每个M?平 均粘附的胸腺细胞致为成花能力,分别计数成花百分率和成花能力. 结果 一 ,形态学所见光镜观察可见分娩后小鼠腹腔M车大小不等,形态不一(图1).可将M?分为三类. 第1类细胞体积较小,细胞质少?桉乡为小圆形或马蹄形,第1类细胞体积略大,细胞质较丰富,棱多为 椭圆形,第1类细胞体积最大,细胞质丰富,核多呈圆形或不规则形分娩后小鼠腹腔M以第1类为主. 而对照组M?则以第1类为主.通过双因素方差证明两组小鼠各类腹腔M?之间存在着显着差异,P< .0l(丧1).扫描电镜观察分娩后小鼠腹腔M?的形巷亦有髓显不同部分数量较少胞体较小的M?,表面 囊1小?童睦M形态分类?SD) 布满较细的截绒毛,部分数量较多胞体稍大的M?,表面极不规则,布满囊状突起, 还有少量M?的体积较 大,表面布满较粗的擞绒毛及皱褶(圉2,3).对照组巨噬细胞多数胞体较大,形态比较规觅lj|表面布满较 粗的微绒毛和鹱褶.透射电镜观察,实验蛆巨噬细胞大多形态不规则,核多呈圆形或马蹄彤,胞质内充满 大小不等的电子密度较饯的液泡,胞质内的其它结构较少(图4)对照组巨噬细胞形态比较规则,核多呈' 圆形或椭圆形,细胞质内溶酶体较多,偶见少量液泡(图5). 二M?一自体胸腺细胞花环小鼠腹腔M?与自体胸腺细胞共同孵育后,部份M审的与胸腺细胞形 成花环.大多数为不完整花环,即M表面没有贴满胸腺细胞}只有少数M的周目贴满胸腺细胞,形 成完整花环.极少数M帚由多层胸腺细胞围绕,彤成巨大花环从表2可见分娩后小鼠跋腔M?一自体胸 腺细胞花环形成百分率及成花能力均高于对照组. 三,血清溶菌酶岳陛实验结果显示随着标准溶苗酶浓度增大,溶菌板上的溶菌环直径增大,二者 呈直线关系,实验组与对照组血清样品在溶菌扳上测得的溶菌环直径见表3,分娩后小鼠血请中溶菌酶梧性 ?168? 明显高于对照组. 襄2,J,?睫睦M巾一自体胸隙细胞花环(x?SD)襞5小鼠血清溶菌酶活性?SD) 小鼠(只)成花百舟率成北能力 对照组10 实验组1O P值 32.7?4.92 41.2?4.50 3.01?0.20 4.53=O.40 讨论 妊娠及分娩后,母体单核爵噬细胞增多1等噬功能增强的蒙已为许多学者昕证实…川一般认为单 核细胞游出血管后,胞体运渐增大,吞毽能增强,溶酶体含量及溶菌酶活性增加,呈典型的巨噬细胞 特征.本试验从光镜及扫描电镜观察到分娩后小裂腹腔巨诺细胞大小不等,表面形态不一这前现象说明 参. }_纛蘩 姆 一圈版说明? 1.抒蝇后小鼠腹腔巨噬细胞I,巨噬细胞帕胞体鞋小,桂为马蹄形,I,巨噬细胞舳胞悻较大,棱为椭匾形, I,巨噬绑胞的臆悻犬,棱呈圆形,Giemsa染色,普通光能,x2102.舟婉后小鼠腹睦巨噬纽胞I,巨嚏纽 胞表面布i胄密集,内做绒毛,I,巨噬坷胞表面布满囊牧突起扫擂电镜×2g100o0.分娩后小鼠腹腔巨啦细胞I, 巨噬组盹体积较小,表面布精密集徽缄毛,I巨啦细咆体积和太,表面布满囊状突起,I,巨噬细胞{奉蕃【较 大,表面布满微绒毛和蛾褶扫描电镜×2,933,对照组小鼠腹腔巨噬细胞,表面形态不规则,胞质中完满大 小不等的镀泡,遗射电镜×7,lO0.5.对j!cI组小咀腹腔巨噬纽胞,膻体比较规则透射电镜x7,9000o ?】59? 母体在分娩后某些囡素曲作用下,血牢大量单核细胞进入膜脏进行分化.光镜下所看到的第1类细胞可髓 主要是刚进八腹腔的单核细胞或域幼稚的巨噬细胞,第1类细胞可能是比较成熟的巨噬细胞,第1类细胞 可能是更成熟或衰老的巨噬细胞Burchan[】明察分娩后腹腔巨噬细胞的形态,也看到了与此相似的现象. 本试验从电镜标本上所看到的巨噬细胞袁面的囊状安起及细胞质内的随泡状结构,均可能是分娩后小鼠腹 腔巨噬细胞积极摄取腹腔液或其它物质所呈现出的形态学特征,这可能与此时巨噬细胞本身具有的机能特 征或所处的分化状态有关. 巨疃细胞与自体胸腺细胞结台形成花环动能活跃的巨噬细胞形成花环的能力增强.5】.分娩后小 鼠腹腔巨噬细胞形成花环的能力明显高于对照坦,三羔也提示分娩后小腹鉴巨噬细胞处于活跃的机能状 态. 一 般认为功能活跃的臣噬细胞分泌溶菌酶增多,杀菌功能明显增强吞噬作用和溶菌酶常做为反映巨 噬细胞功能状态的指耘中性粒细胞也能台成溶菌酶,但主要存在于细胞内,只有在细胞脱颗粒或解体时 才释放到细胞外,故血清溶菌酶的来谅主要是巨噬细胞….分娩詹,},鼠血请溶菌酶活性明显高于对照组?. 证明分娩后小翻l单核吞噬细胞合成及分泌溶菌酶能力增强 分娩后小鼠腹腔巨噬细胞数量增加,呈现出活跃的形态学特征,腹腔巨噬细胞的吞噬能力,与自体胸 腺纽胞形成花环的能力都高于对照组J分娩后小鼠血清溶菌酶活性也显着增高.这些结果均证明分娩后小 鼠腹腔臣噬纽胞处于梧跃的机能状态和积极的分化过翟.这些变化可能与母体的免疫调节机制,激素影响 有关.其详细机制有待深八探讨. 参考文献 E1]PlumJ.etaI:Distributionmono~uclearceilsduriagpregnancy.ClinExpImmune181 19 [2]BurchanGS.etal}Theinfluenceofparturitiononperipheralbloodmo~aoclearphagocyte subpo— pulatiozi?pregnant"gro~len.JLeukoeyteBioI87}281,1985 [3]商玉民等l妊摄小鼠掌精血自绑扈和虞篮巨t细胞酊敷t变化.解剖学杂志 ii(4)224.1988 [高玉民等'分持后小一鏖腔巨噬钿臆的眷噬功蕾.解剖学杂志12(2)112,1989 [5]霄窖华'巨啦钿胞赣活后其一腺细臆花环形成,眷噬作用及彤态学研究.山东医 学豌46,1983 [6]Ha'wesCS.etaI}Enhancedmoaoeytemigrationduringhuma=pregnancy.JReproducIm mu? 2I37?198O C73LipskyE,etal}Macrop/xage-mphoeyteinteraction.JExpMed198}900.i97a 8]GarrouseF.etalINonsI~clfiebindi~gbym~cropflages.Reiicnloe?d0? heISee81415,3982 [.]张宣t等'关于单接一巨噬鲴膻熏境的眷噬作用和其蒋菌酶水平在抗感染中的 意舅的研究.巾华做生物学和 免疫学杂志4船).,1984 M0RPHOLOGICALIN,rEnGATIONSONMACROPHAGESFROMPOST— PARTURIENTMOUSEPERITONEALEXLr~ATEANDMEASLrRINGONLYSOZYME 6?yumln.ylnXIn. (Department0,HistologyandEmbryoIogy. ZhuXluxlong Bethun~UniversityMedlca~Seinccsl Therewaspersistentinc~oasointhe?umberof 【Iheperitonealmaerophagesthrougboutmollso pregnancy.There百 asasignliicagtincreaseiathenumberoftheperitonea1macrophagesduflagthe th#rdtrimester$oIpregnancyandpost— partllrt~rieat.LightmicroscopeJseanl~;ngelectroamicroscope tn'吼 iSSionalleetroamItro$copeereusedtoinfestigatethemorpao1oEyofmacrophagesfrommo~$e perlto~eaIexadateinpost— parturlentmouse.Themacrophagesfrommolls~peritonea1exndateexhibit obviouslydiffer*neeandactivatedmorphologlcaIcharacter.Theactivityofs~rumIysozymesadthe abilityelirommgmacrophage— thymocyteautoro~ettesinperitoneaImacropbagesfrompost.parinr!en? mou$8wereoh~.1OUslyhigherthannor~.Imo~sp.These以sll1tsshow? hattheperitoaeaImacropbages trampost.partarieatm0"seexhibittbeobvj0usIyact]ratedf1】net;舢 a1andraorphologicalchanges. ?160?