汉族人低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂,脂蛋白和载脂蛋？…

汉族人低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂,脂蛋白和载脂蛋？… 汉族人低密度脂蛋白受体基因多态性对血 脂,脂蛋白和载脂蛋,… ?138 ,f晓铘翰翱胼腑 中华医学遗传学杂志2000年4月第17卷第2期ChinJMedGenet,April.8000,Vot.17.No.2 /;一t;)『?论着摘要? 汉族人低密度脂蛋白受体基因多态性对血脂, 脂蛋白和载脂蛋白水平的影响 研究明,低密度脂蛋白受体(1owdensitylipoprotein receptor,LDL—R)基因多态性影响血脂水平,已有报道LDL—R 基因PvuI,StuI位点多态性影响正常人血脂水平】,HinI位 点多态性影响糖尿病患者脂代谢-.最近Ahn等0发现LDL— R基因外显子18Neol位点多态性与总胆固醇(TC),低密度 脂蛋白胆固醇(LDL~C)水平有关.我们应用聚合酶反应?限制 性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术,研究了NcoI位点多态 性对汉旗人血脂,脂蛋白和载脂蛋白水平的影响. I研究对象和方法 I.I研究对象正常血脂组81名,随机选自体硷健康者,男 44名.女37名,年龄50士l6岁,TC<5.20mmol/L,甘油三酯 (TG)<l_70mmol/L,LDL.C<3.12mmol/L,高密度脂蛋白 胆固醇(HI)L~C)>I.04mmol/L,脂蛋白(a)[Lp(a)]<100 mg/dl.高脂血症组5l倒,男23倒,女28倒,年龄56~18岁. TC>5.72retool/L,TG>1.7Ommo|/L,乙DL—C>3.64mmo|/ L,Lp(a)>100mg/dl.以上均为无血缘关系的湖北地区汉族 人,排除肝,肾,内分泌等影响脂质代谢的疾病. 1.2试剂和主要仪器限制性内切酶NcoI,TaqP1usI DNA聚合酶(MBI公司).4种dNTP,kDNA/EcoRI十Hindl Markers(华美公司).DNA扩增仪(PE2400型),岛津CL一7200 全自动生化分析仪. 1.3方法 1.3.1引物设计与合成参照文献[3]设计,序列为:P1:5'? TCCGCTGTTTACCATTAGTTGGCAG?3;P2:5.GTTGC? ACACAGTCCAGTACGTGCAA?3. 1.3.2攘板DNA的提取用改良NaI法. 1.3.3PCR?RFLP反应总体系5Ol,lO×buffer5+dNTP 200~mo]/L.P1,P2各0.3/~mol/L,0.5Fg基因组DNA,Taq PluslDNA聚合酶2U.将反应物置95"(2预变性5mln,取出 加入TaqPluslDNA聚合酶2U.按95"(2变性1men(或95c 变性30s或9s?变性15s).70?延伸3rain.循环30次.末次 循环后延伸5mln取1OPCR扩增产物,加入l0u限制性 内切酶NcoI.10×buffer2l,无菌双蒸水7l,37lc消化过 夜.酶切产物用1的琼脂糖凝胶电泳进行鉴定. I.3.4血脂及载脂蛋白的测定酶法测定TC和TG;选择遮 蔽直接测定法测定HDL—C;直接测定法测定LDL—C,双波长免 疫透射比浊法测定ApoAI,ApoB及Lp(a). I.4统计学处理研究对象与Hardy—Welnberg平衡符合的 程度,组问基因型及等位基因频率比较采用检验;组问血脂 水平比较采用F检验. 2结果 2.I限制性片段长度多态性分析LDL-R基因外显子l8扩 增片段为2490bp,酶切后片置有3种,为2490bp,1570bp和 920bp.若有NcoI酶切位点,可见1570bp和920bp的带[等 位基因NcoI(+)];若无NeoI酶切位点.只见1条2490bp 的带[等位基因Nco】(一)].则基因型有3种:NcoI(一/一), NcoI(+/一)和NcoI(+/+)型(圈1). 249o- l570— 92O一 321Mbp 图1LDLR基困外显子1gNcoIRFLP分折MtLDNA/EcoRI+ Hind1MarkeTsI1,4:分别为PCR扩增物,NcoI(一/一)纯合于,Nco I(+,一)杂合于,N?I(+,+)纯舍于 2.2LDL?R基因型多态型分析比较血脂正常者和高脂血 症患者基因型和等位基因额率(表1),结果无显着性差异(P> 0.05).' 2.3LDL—R基因NcoI多态性与血清脂质水平的关系正常 血脂组,TC,LDL—C,TG,ApoB在NcoI(一/一),NcoI(+/ 一 ),NeoI(+/+)基因型个体中有渐升趋势,且有显着性差异 (表2).高脂血症组.TC,LDL?C也有渐升莳势,但无显着性整 异(表3). 衰1正常人与高脂血症患者LDL?R基因NcoI基因型分布及等位基因频率的比较 Weinberg遗传平衡(正常^口0.76.P>0.05.高脂血注:研究对象群体符合Hardy— 症患者=0.20,P>0.05) 基金项目:湖北省科拄攻关重点课资助项目(961P2002) 作者单位:430071武汉,湖北医科大学附属第二医院控验科 中华医学遗传学杂志2000年4月第l7卷第2期ChinJMedGe~et,April.2000-Vo1.17-No.2 衰2正常人LDL?R基因型与血清脂质的关系(;士) tImmol/L~/XCg/I???:r,d1 3讨论 我们的研究发现,LDL?R基因Nco1酵切多态性对正常人 群TC,TG,LDL.C,ApoB水平有显着影响,TC,LDL—C相对 NcoI基因型由"一/一","+/一响"+/+"型变化呈递增的趋 势.此趋势在正常血脂组中有统计学意义,在高脂血症组中无 统计学意义,可能是样本倒数不够大的原因.但却表明LDL—R 基因的多态性会影响正常人群的血脂水平. 参考文献 1范乐明.蔡海江.姜传仓,苷.低密度脂蛋白基因多态性丑其与血清 胆固醇承平的关系.中华医学杂志-1993-73(4)t242—244. 2吴梧华.王延庆.孙多奇.等.I型糖尿病意者低密度膳蛋白受体醇 切多卷性的观察.中华医学杂志-1993.73(1)10—13. 3AhaYI.K砌bob1]ya=M.ABuonCE.at.Role叩衄口n geneticpo]ynmrph~smsintheLDLreceptorgeneinarkct_哪plasr~ cholesterollevdsinthegeneralpopulation,Arter~osderThromb- 1995.4(5)t633—637 (收稿日期:1999—04—05) (本文编辑张谦) t(1,8)平衡易位一例 许平龠信忠曾艳雷谢东 其妻第1胎足月顺产一男要?面部畸形, 患者男,27岁. 无鼻孔.第2胎孕3个月时自然流产.非近亲结婚.身体健康. 双方无化学药物及放射线接触史,表型和智力均正常,双方家 族中无异常孕产史. 细胞遗传学检查:外局血淋巴细胞培养.G显带分析,患者 染色体核型为:46.XY,t(1{8)(1qter~lp36::8pll一8pter? 8qter~8pl1::lp36~lpter),妻子棱型正常. 讨论平衡易位携带者生殖细胞在减数分裂中,可以形成 作者单位:312000浙江省绍兴市扫蚶保健院遗传室 ? 临床细胞遗传学? 18种配子.其中仅一种正常.一种为平衡易位携带者,其余均为 不平衡的配子.这些配子与正常配子结合后可造成流产,死胎, 畸形儿和染色体异常患儿出生.因表型正常的平衡易位携带 者,产生染色体异常后代的风险很大.因此,患者妻子若再次妊 娠,有必要进行产前诊断.以防止染色体病患儿出生. 志谢本桉型承蒙中国医学遗传学国家重点实验室夏隶辉,藏和 平老师鉴定,特此致谢 (收稿日期{1999—06—07) (本文编辑张丽玲)