Access免疫分析系统对运动员血清睾酮的快速检测

Access免疫分析系统对运动员血清睾酮的快速检测 Access免疫分析系统对运动员血清睾酮的 快速检测 2o04年3月 第25卷第2期(总第147期) 体育与科学 JournalofSportsandScience March2O04 Vo1.25No.2(TotalNo.147) Access免疫分析系统对运动员血清睾酮的快速检测 RapidDeterminationofTestosteroneinAthleticSerumWiththeAccessIm. munoassaySystem 季师敏戴秀霞武露凌 JIShiminDAIXiuxiaWuLuling 摘要:目的:寻找一种快速,准确,灵敏,环保检测运动员血清睾酮的.方法:应用Access全 自动微粒子化学发光免疫分析系统(Access免疫分析系统)及配套试刺测定运动员血清睾酮 (Testosterone,T),并与放射免疫分析(RIA)方法比较.结果:Access免疫分析系统性能良好;重 复性:批内平均CV%:2.35,批间平均CV%=4.04;基本无交叉污染.与RIA方法比较.睾酮r =0.9902(P<0.001).结论:Access免疫分析系统具有快速,准确,灵敏,测定范围宽,且无污染, 能够及时为运动员训练监控提供依据. 关键词:血清睾酮;放射免疫分析;415学发光免疫分析 中图分类号:G804.21文献标识码:A文章编号:1004—4590(2004)02—0069—02 Abstract:Objective—— Developarapid,accurate.sensitiveandenvironmentalistmethodfordetermi— nationoftestosteroneinathleticserum.Method—一 Testathleticserumtestosteroneofathleticwith theAccessImmunoassaySystem.Results—G[x)dperformanceoftheAccesshrlmunoassaySystem thin—runaverageCV%=2.35andbetween—runaverageCV%=4.04.ComparedwithRIA methodr=0.9902(P<0.001).Conclusion—TheAccessImmunoassaySystemcanprovideUSthe foundationformonitoringtheathletetraining.Thesystemhasthecharacteristicsofrapidity,a ccura— cy,sensitivity,andbroadlinearity. Keywords:testosterone;radloimmunoassay;chemicalluminescenceirnmunoassay 1959年Berson和Yalow创建放射免疫分析(RIA)测定人 血清胰岛素,开创了体外微量物质检测技术的新纪元.在随后 的三十年里,体外放射分析(RIA,IRMA,RRA等)取得了快速 的发展.随着计算机和自动化技术的飞速发展,为了满足辐射 安全的环保要求,从80年代发展起来的化学发光免疫分析 (CLIA),在90年代终于实现了高灵敏,稳定,可靠和环保的全 自动化. 本实验室在引进Access全自动微粒子化学发光免疫分析 系统后,对运动员血清睾酮进行了测定.血清睾酮对运动员运 动训练的身体形态,机能改造,尤其对运动成绩都有影响.定 期测定运动员血清睾酮,可以监控运动员的机能状态.目前对 运动员血清睾酮的检测,大多采用放射免疫法,由于其自动化 程度低,不适用于快速检测,又有放射污染,相比之下,Accms免 疫分析系统无需对样本进行测前处理,简便的自动化操作.全 程仅需15--20rain即可发,现将测试方法介绍如下 收稿日期:2o04—01—07 作者单位:1.江苏省体育科学研究所,南京210014. 1材料和方法 1.1仪器与试剂 Access免疫分析系统及配套的T试剂盒,冲洗缓冲液,碱 性液,酸性液,定标液,基质液(Substrste),反应杯(RV管)由 Beckman—Coulter公司提供.GC一911型放免7计数器由合肥 中国科大生产,T试剂盒,天津德普公司提供. 1.2.'~tCCeSS免疫分析系统基本原理 在RV管中加入包被单克隆抗体的磁性微粒,血清样品,碱 性磷酸酶(ALP)标记的抗原,经37?孵育后,形成竞争法抗原 抗体结合成的复合物,在电磁场中进行3次洗涤,将未结合的 多余抗原洗去.再加入底物II)DD(一种金刚基二螺[4,4]二 氧乙烷的磷酸脂)发光剂.AMPDD经ALP水解,生成一种不 稳定的阴离子,该阴离子分解时持续发光,光强稳定,可达数小 ? 69? 体育与科学第2期 时之久,且与ALP量成正比,通过测定相对发光单位(relative lightunit,RLU)定量检测血清中物质的浓度. 1.3方法 采运动员清晨静脉血2ml,分离血清后进行检测. 1.3.1精密度以批内变异表示.取高,中,低三份血清样 品,分别测定T含量,同一样品重复测定2O次,计算CV% 1.3.2重复性以批间变异表示.取高,中,低三份血清样 品,置一2O冰箱保存,每天复溶2份随样本各测定T含量1次, 共测定1O天,计算CV%. 1.3.3曲线分别取0,1.7,5.2,13.9,27.8,55.5nmol/I T标准液,在Access免疫分析系统中执行自动定标程序.以两 次测定结果的均值,进行数学逻辑处理,绘制标准曲线.再用 靶值与实测值计算直线回归相关系数 1.3.4回收率在三份lml的血清样品中分别加入含T1.7, 27_8,55.5nmol/L的定值血清0.1ml,测定T含量,每管重复测 试3次,取其均值.计算回收率百分比. 1.3.5交叉污染率取1份高值(H)和1份低值(L)血清样 品,先测定高值样品3次,在测定低值样品3次,按下列计 IT—T.I 算交叉污染率:}_{×100%Ia3一L3 1.3.5方法比较随机取运动员血清样品46份,同时用Ac— cess免疫分析系统与RIA法测定T含量,测定范围0.35,2O. 40nmol/L,比较结果,做t检验,相关分析及相关系数t检验 1.3.6参考范围用Access免疫分析系统测定江苏省队运动 员血清睾酮188份,年龄?16岁,其中男子运动员100份,女子 运动员88份,结果经统计学处理,以95%确定参考范围? 2结果 2.1精密度:批内CV%为1.80%,3.38%;重复性:批间 CV%为1.9596,6.09%.见表1. 表1三份血清样品20次所测T含量(nmol/L) 2.2标准曲线 血清睾酮浓度测定范围为O,55.5nmol/L,相关系数r=0 9999,符合临床诊断的要求. 2.3回收率{结果见表2) 表2T回收试验(nmol/I) 2.4交叉污染率 3次交叉测定高值和低值血清样品T值,测定结果见表3. 表3交叉污染率测定(nmol/L) ? 70? 2.5方法比较 Access免疫分析系统与RIA法测定T的相关系数r=0. 9902(P<0001),回归方程为Y=07098XRIA+08779,结果 见表4. 表4两种方法测定T值(nmol/L】 注:tl,P1为Acces~免疫分析系统和RIA法比较的t检验,t2,P2为 相关系数显着性比较 2.6参考范围 江苏省队男子运动员为611,2147nmol/L,女子运动员 为O15,2.59nmol/I,年龄均?16岁. 3讨论 通过对运动员血清T的测定来看,Access免疫分析系统批 内平均CV%=2.35,批间平均CV%=4.04,CV%值较小,说明 仪器重复性较好,测定结果稳定.测定范围宽,T的测定浓度范 围在0,55.5nmol/L之间,能够满足运动员正常测试的需要. 由表3结果可见,3种浓度的回收均稳定在100%左右,说明仪 器的准确性较好.仪器基本无交叉污染.由于其采用的超声 波清洗技术,对主探针进行清洗,避免了加样过程中的交叉污 染,及探针阻塞现相.从表4中可以看出Access免疫分析系统 所测定的T值低于RIA法,相关系数t检验显示两种方法高度 相关,所以两种方法可以相互参考.因此,实现了自动化的一 cess免疫分析系统,既具有化学发光检测的高灵敏度.又具有免 疫分析的高特异性,准确性,稳定性,及操作简便快速,人为因 素小等优点,能够快速及时的为运动员训练监控提供可靠的依 据.由于它是用化学试剂来标记抗原或抗体,避免了因使用放 射性核素而带来的对人体和环境的危害,将会得到越来越广泛 地应用: 但在测试中还应注意:(1J睾酮的分泌受多种因素影响,最 好在固定时间抽血,以便于纵向观察同时,为避免在吸取血 清样品时吸人纤维蛋白,需充分离心.?2 样品杯存在一定量死体积,样品量应为样品杯死体积加样 品吸液量.(3J样品放人样品杯时,不能有气泡.气泡会引起探 针对液面的探测错误,而导致吸液量不足.(4)不要使用EDTA 抗凝血浆,因为EDTA有改变ALP活性的作用,会影响测试结 果.为提高测试结果的准确性,建议尽量使用血清样品.(5』需 严格按人机对话提示进行正确操作与维护. 认真作好日,周,月保养及质量控制工作,只有这样我们的 测试结果才会真实可靠. 参考文献: [1]黄君美,余振东.ACS一180全自动化学发光免疫分析仪 性能[J].中华医学杂志,2003,27(1):23. 『2]李熙建.Access全自动微粒子化学发光免疫分析仪在甲状 腺疾病中的应用评价[J].重庆医学,2003.32(6):765. [3]肖华龙,殷政芳,盛寿祥,等.化学发光免疫分析实验及其 临床评价[J].苏州医学院.2000;20(6)1536. [4]徐可为.化学发光免疫分析及影响因素浅析[J].现代医药 卫生2001,17(2):150.