1～7日龄小鼠仔鼠海马神经元突触超微结构研究

1～7日龄小鼠仔鼠海马神经元突触超微结构研究 1,7日龄小鼠仔鼠海马神经元突触超微结 构研究 主国医堂剑堑生—第7鲞勇臣3MedicalInnovationofChinaLNovember.2010,Vo1.7No.33.3. 1,7日龄小鼠仔鼠海马神经元突触超微 结构研究 贾丽棉陈素华王玲张丹丹肖娟凌霞珍 ? 论着? 【摘要】目的观察1,7日龄小鼠仔鼠海马神经元突触结构超微变化.方法选择性成熟期BALB/C小鼠, 雌雄同笼受孕,于自然分娩后1,7d每日处死7只仔鼠,无菌剥离海马组织,电镜观察海马神经元突触超微结构变 化.结果随日龄增加,海马神经元数目无明显变化,但海马神经元细胞器(线粒体,内质网等)数量逐渐增多,体积 逐渐增大;突触界面曲率及突触后膜致密物厚度逐日迅速增加(P<0.05);突触间隙逐日增大,其中3,7日龄增大 非常迅速(P<0.05).结论海马神经元细胞器以及突触超微结构的变化,可能是出生早期仔鼠学习记忆能力快速 发展的基础. 【关键词】仔鼠;海马;突触;超微结构 Theresearchmentofhippocampussynapsesultra—structuralof1to7daysoffspringofmiceJIALi—mian,CHEN Su—hua,WANG,ZHANGDan—dan,XIAOJuan,LINGXia—zhen.TheFirstPeople'sHo@italofShangqiuCityin ItenanPr~ince,Shangqiu476000,China 【Abstract】ObjectiveToobservetheultra— structuralchangesofmousehippocampussynapsesfrombirthtoseven days.MethodsThesexuallymaturemicewerese~edasthesubjects,andthenputthemalesandfemalesinthesamecages. Whenthemalesdeliverednaturally,weexecutedsevenoffspringdailyfrompostnatal1dto7d,thensterilestrippinghippoeam— pusoftheoffspring,routinefixed,chipped,observedtheultra— structurechangeofhippocampusneuronssynapseswiththee— lectronmicroscope.ResultsWiththeincreaseofage,thenumberofneuronsofthehippocampushasnoobviouschange,but thenumberandvolumeoforganellesinthehippocampuscells(mitochondria,ER,etc.)havegraduallyincreased.Thecur- vatureofsynapticinterfaceandpost— synapticdensityayerapidlyincreasingdaybyday(allP<0.05);synapticcleftgradu allyincreased,from3to7daysincreasedveryrapidly(allP<0.05).ConclusionThechangesofhippocampusneurons andsynapsesultra— structuremaybethefoundationofrapidlydevelopoflearningandmemo~abilityinearlybornmice. 【Keywords】Offspring;Hippocampus;Synapses;Ultra,structura1 人类海马位于侧脑室下角底兼内侧壁,全长5cm.1957 年,米尔纳,潘菲尔德和斯科特维尔发现双侧海马损伤患者 出现记忆丧失.目前认为,海马是信息整合,储存和传递过 程中的重要结构,是学习,记忆等高级神经活动的重要 部位?-5]. 海马主要由神经元构成,海马神经元之间的信息传递由 突触完成,因此,海马神经元及其突触结构和功能完整是维 持学习记忆的前提.突触可分为化学突触和电突触,高等哺 乳动物以化学突触为主.化学突触由突触前成分,突触后成 分和突触间隙构成.突触前成分的主要结构有突触小泡,突 触前膜和突触前栅栏结构.突触后成分主要含有增厚的突 触后膜致密结构(post—synapticdensity,PSD),它含有多种 蛋白质和酶(微管蛋白,肌动蛋白,神经丝蛋白,环核苷酸二 作者单位:476000河南省商丘市第一人民医院(贾丽棉);华中 科技大学同济医学院附属同济医院(陈素华,王玲,张丹丹,肖娟,凌 霞珍) 通讯作者:陈素华 酯酶以及蛋白激酶等),并与一些离子通道相连,例如,谷氨 酸能突触后膜上有密集的NMDA型Glu受体..突触间隙是 突触前膜与突触后膜之间的间隔区域,是相邻神经元信息沟 通的部位,含有粘多糖,碱性蛋白及多聚阴离子物质.突触 界面指突触前膜与突触后膜隔着突触间隙相对应的部位,突 触界面曲率指突触界面的弯曲度. 目前,小鼠海马突触超微结构变化与学习记忆能力的相 关性已有研究报道,但出生早期仔鼠海马超微结构的发 育研究未见报道,而出生早期是神经系统快速发育,学习记 忆能力快速发展的关键阶段.因此,笔者选择1—7日龄仔 鼠,应用透射电镜逐日分析其海马神经元突触结构的变化规 律,从而探讨海马学习记忆功能逐渐完善的机制,报道如下. 1资料与方法 1.1一般资料SPF级BALB/C小鼠(H一2d),(12?1)W 龄,雌鼠体重(21?1)g,雄鼠体重(234-1)g,购于武汉大学 医学院动物中心.小鼠被毛白,短,洁净,密实,毛色光滑,举 动敏捷,活泼,两眼明亮,发育良好,外生殖器无异常.验收 后在同济医院实验动物中心层流架内饲养.雌雄小鼠2:1 ?? 7卷第33期MedicalInnovationofChina.November.2010,Vo1.7No.33医 同笼受孕,每日观察雌鼠阴道精栓情况,发现精栓当天视为 受孕第0日.每日观察记录孕鼠体重增长情况直至足月 分娩. 1.2仔鼠海马超微结构观察方法标本采集:随机选择足 月分娩的1,7日龄仔鼠,每日7只,断头处死,无菌快速完整 剥离海马组织进行超微病理学检查.具体步骤如下. 1.2.1取仔鼠海马组织固定于2.5%戊二醛溶液中2h; 1.2.20.1M磷酸缓冲液清洗2×20min; 1.2.31%锇酸固定1h; 1.2.40.1M磷酸缓冲液清洗5rain; 1.2.550%,70%,9o%乙醇梯度脱水,90%乙醇丙酮,90% 丙酮,100%丙酮浸透组织,各5min; 1.2.6丙酮与环氧树脂1:1混合半浸透2h; 1.2.7纯环氧树脂包埋剂浸透2h; 1.2.8包埋一聚合(80?恒温箱内10h); 1.2.9超薄切片,片厚70nm; 1.2.10染色,醋酸双氧铀,醋酸铅双重染色各10min; 1.2.11透射电子显微镜观察突触结构,采用图像分析系统 对突触界面曲率,PSD厚度和突触间隙进行定量测量,每组 测定40个突触的电镜照片,并拍照,记录. 1.3统计学处理应用SPSS12.0软件进行统计分析,数据 进行q检验,以P<0.05表示差异有统计学意义. 2结果 2.1仔鼠海马神经元细胞器变化随着日龄的增加,海马 神经元数目没有明显的变化,但海马神经元细胞器(线粒体, 内质网等)数量逐渐增多,体积逐渐增大.见图1,图2. 图14日龄仔鼠海马神经元 2.2仔鼠海马神经元突触结构参数变化逐日比较发现, 突触间隙逐渐增大,其中1—2日龄之间差异无显着性意义 (P>0.05),3—7日龄差异均有显着性意义(P<0.05);突触 界面曲率逐日增大,PSD逐日增厚,差异均具有显着性意义 (均P<0.05),详见表1. 3讨论 哺乳动物的海马结构在学习记忆,情绪,精神活动方面 起着重要作用.海马由神经元构成,突触是神经元之间结构 和功能的接触点,其结构和功能的完整对于保证神经元获得 信息并进行传递,加工,储存是非常重要的. 图26日龄仔鼠海马神经元 (为线粒体,?为内质网) 7日龄仔鼠突触界面曲率,突触间隙和 表11— PSD厚度(?) 本实验中,1—7日龄仔鼠海马神经元PSD和突触界面曲 率均具有迅速增加的特点.目前认为,PSD是位于突触后膜 深面与胞浆相连的一层致密物质,其主要成分有细胞骨架蛋 白,神经纤丝蛋白,糖原酵解的酶类,热休克蛋白,小泡运输 蛋白以及一些高分子蛋白质等',并与离子通道相连,这 些蛋白质构象和数量的变化可导致PSD超微结构及海马神 经细胞兴奋性的改变.突触界面曲率增加,扩大突触接触 面,使突触前膜释放的神经递质更有效地作用于突触后膜靶 位点,减少神经递质向周围间隙扩散,从而提高突触的传递 效应.因此,1,7日龄仔鼠海马神经元PSD和突触界面曲率 迅速增加,提示PSD各蛋白成分及离子通道快速增加,且突 触之间传递效能快速提高,这些改变是出生早期仔鼠海马神 经细胞兴奋性迅速提高,学习记忆能力快速发展的重要物质 基础. 本研究发现,1,7日龄仔鼠海马神经元突触问隙逐日增 大,且3,7日龄增加速度极其显着,可能与海马组织适应脑 组织不断增大而发生的变化. 本研究还发现,随着日龄的增加,海马神经元细胞器(线 粒体,内质网等)数量逐渐增多,体积逐渐增大.其中,线粒 体可以提供细胞能量,并与神经递质的合成,分解密切相关, 被称为细胞内的"动力站",其不断增殖是突触区机能活动旺 盛的表现. 综上所述,1,7日龄仔鼠具有海马神经元突触结构以及 细胞器的快速变化,这些变化可能是出生早期仔鼠海马神经 元功能迅速完善,学习记忆能力迅速发展的重要物质基础. 匡堂剑堑Q生!旦笙!鲞箜!ica1InnovationofChina,Novemb..2010.V.1.7No.33 参考文献 [1]RibarCE,NitschR,SeressL.Projectionofparalbuminpositivebasket CellintheGABAefigcinnervationofpyramidalandgranulecellsof therathippoeamplaformation.JCompNeurol,1990,330(5): 449—461 [2]韩太真,吴馥梅.学习与记忆的神经生物学.北京:北京医科学大 学中国协和医科大学联合出版社,1998:162—176. 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(收稿日期:2010—08—23) (本文编辑:梅宏伟) FOLFOX4联合中药治疗晚期胃肠 肿瘤的临床观察 韩洪冰 【摘要】目的探讨FOLFOX4方案联合中药治疗晚期胃肠肿瘤的临床疗效.方法 顾性分析笔者所在医 院收治的46例晚期胃肠肿瘤患者的病例资料,所有患者均使用FOLFOX4方案联 合中药进行治疗,并对治疗后的疗 效进行评价.结果所有患者经治疗后,完全缓解5例(10.9%),部分缓解20例(43.5%), 稳定21例(45.7%),进 展0例,总有效率为54.4%.所有患者均进行2年以上随访,死亡14例,2年生存率为 69.6%.结论FOIFOX4方 案联合中药治疗胃肠肿瘤疗效肯定,中药可降低化疗的毒副作用,提高患者的免疫 力,值得临床推广. 【关键词】FOLFOX4方案;中药;胃肠肿瘤 ClinicalobservationoftheFOLFOX4programcombinedwithtraditionalChinesemedicine treatmentofterminal gastrointestinaltumorHANHong— biag.OncologistsofLinyiTumorHospitalinShandongpr~ince,Linyi276001.China 【Abstract】 ObjectiveToinvestigatetheclinicalefficacyofFOLFOX4projectcombinedwithtraditionalChinese medicineintreatingpatientafflictedwithterminalgastrointestinaltumor.MethodsRetrospectivelyanalyzethedataofthe46 casespatientswhohadgastrointestinaltumortreatedinourhospita1. allpatientswereconductedbythecombinationofFOL— FOX4projectandtraditionalChinesemedicine,thentoevaluatecurativeeffectafterthetreatment.ResultsAfterthetreat— ment,conlpleteremissedfor5cases(10.9%),partialremissedfor20cases(43.5%),21caseswerestable(45.7%),pro— gressin0cases,thetotaleffectiveratewas54.4%.Allpatientswerefollowedupformorethan2years, 14patientsdied.2一 yearsurvivalratewas69.6%.ConclusionTreatmentofFOLFOX4combinedwithtraditionalChinesemedicineiseffctive intreatinggastrointestinalcancer,andtheChinesemedicinecaureducethesideeffectsofchemotherapy, improveDatient'sim— munesystem,itisworthyofpromotion 【Keywords】 FOLFOX4program;TroditionalChinesemedicine:Gastr0intestina1tum0rs 胃肠道恶性肿瘤是我国常见的恶性肿瘤,常规治疗是以 手术切除为主,但术后2年约有50%,60%患者复发或转 作者单位:276001山东省临沂市肿瘤医院 通讯作者:韩洪冰 移.因此,对不可手术及术后复发转移的晚期胃肠道肿瘤患 者,化疗是其主要的治疗手段.胃肠道肿瘤是化疗相对敏感 的肿瘤,传统的化疗方案疗效存20%,40%;LINc].2006 年3月,2008年】月笔者所在医院收治46例晚期胃肠肿瘤