【doc】大蒜提取液及食醋抑菌作用的研究

【doc】大蒜提取液及食醋抑菌作用的研究 大蒜提取液及食醋抑菌作用的研究 ※基础研究食品科学2008,Vo1.29,No.0169 大蒜提取液及食醋抑菌作用的研究 杨转琴,魏红,曹雯,赵艳君,王威 (天津师范大学生物系,天津300074) 摘要:通过滤纸片法和液体培养比浊法对食醋,蒜醋提取液,蒜水提取液的抑菌作 用进行研究,结果表明: 食醋对细菌具有较强的抑制作用,对真菌的抑制作用较弱,低浓度(3.2×10I4)食醋 无抑菌作用.蒜水提取液和蒜 醋提取液对细菌,真菌都有较强的抑制作用,但蒜醋提取液抑菌活性略逊于蒜水提 取液. 关键词:食醋;蒜醋提取液;蒜水提取液;抑菌作用 AntimicrobialActivityofVinegarandGarlicExtracts YANGZhuan—qin,WEIHong,CAOWen,ZHAOYan-jun,WANGWei (DepartmentofBiology,TianjinNormalUniversity,Tianjin300074,China) Abstract:Theantimicrobialactivitiesofvinegar,vinegarpickledgarlicextractandwatergarlicextractwerestudiedwithfilter paperandnephelometerymethod.Theresultsshowedthattheantimicrobialeffectofvinegarisstrongonbacteriabutweakon fungi.Atalowconcentration(3.2×10一 1,thevinegarsolutionhadnoantimicrobialeffectonfungi.Bothwatergarlicextractand vinegarpickledgarlicextracthadstrongantimicrobialactivityagainstbothbacteriaandfungi,andtheantimicrobialeffectsofthe vinegarpickledgarlicextractwasweakerthanthatofthewatergarlicextract. Keywords:vinegar;vinegarpickledgarlicextract;watergarlicextract;antimicrobialeffect r{1图分类号:TS255.5;R151.3文献标识码:A文章编号:1002.6630(2008)01— 0069.05 大蒜(Allium)百合科葱类植物,可作为调味品且有 健胃助消化,降低血脂,胆固醇,甘油脂,有预防 心肌梗塞,血管硬化,抗衰老等功能【1];大蒜中含有 的大蒜素和含硫化合物对多种微生物有很强的抑制或杀 灭作用,临床已试用于治疗隐球菌脑膜炎,肺部及消 化道霉菌感染.食醋是家庭生活中常用的调味品,也 是具有医疗作用的保健佳品.醋的主要成分为醋酸, 还含有少量的葡萄糖酸,柠檬酸,苹果酸,乳酸等, 传统中医常用醋与其他药材配伍,用于防治消化,呼 吸等系统的疾病.在肠道疾病流行的夏季,食醋可起 到抗菌,杀菌的作用.我国传统食品醋渍大蒜去除了 人蒜的辛辣味,也很受人们欢迎,民间有许多醋蒜治 病的良方,对其活性的理论研究也有报道,但对蒜醋 溶液抑菌活性的研究报道很少.为此本实验对蒜醋提 取液,蒜水提取液和食醋对不同菌生长的影响进行比 较研究,以期为它们在药理和医疗方面的合理利用提 供依据. 1材料与方法 1.1材料,试剂与仪器 1.1.1原料 食醋(总酸?3.5g/100ml醋酸)市售. 大蒜(Allium)为市售山东紫皮蒜. 1.1.2试剂 NaNO~,K2HPO4,KC1,MgSO4,FeSO4,NaC1, 蔗糖,蛋白胨,酵母膏,琼脂均为市售. 1.1.3菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),大肠杆 菌(Escherichiacoli),黄曲霉(Aspergillusflavus),黑 曲霉(Aspergillusniger),以菌种由本系微生物实验室 提供. 1.2仪器与设备 紫外一可见分光光度计(uv一1240rnini型)日本岛津 公司;离心沉淀机(LXJ—II型)海医用仪器厂;高速 组织捣碎机(DS200型)金坛市金伟实验仪器厂;电子天 平(JA3003犁)I:海精料仪器有限公司;自动蒸汽灭菌 锅(D一1型)北京发恩科贸有限公司;培养箱(PX—DHS一 收稿日期:2006—11—30 基金项目:天津市自然科学基金资助项日(033610911) 作者简介:杨转琴(1985一),女,本科生,主要从事天然产物研究.E—mail:zhuanqin一 0624@163.com {通讯作者:王威(1947一),男,教授,主要从事天然产物研究.E—mail:ww一 0928@163.com 702008,VoL29,No.01艮晶科学※基础 35420.60型)上海医疗器械厂. 1.3方法 1.3.1蒜提取液的制备 1.3.1.1蒜水提取液 大蒜瓣剥皮,捣碎,准确称取100.00g,按固液 比1:2(W/V),加入200ml无菌水,搅拌均匀,4000r/min, 离心20min,倾出上清液,即为蒜水提取原液. 1.3.1.2蒜醋提取液 大蒜瓣剥皮,捣碎,准确称取650.00g,按固液 比1:2(w/v),加入1300ml食醋,浸泡20d,每天搅拌一 次,4000r/min,离心20min,倾出上清液,即为蒜 醋提取原液. 1.3.2菌悬液的制备 将上述四种待试菌用斜面活化后,用接种环分别挑 取两环菌体,以lOml无菌生理盐水稀释,振荡几分钟, 调整浓度为10',l0sCFu/ml. 1_3_3滤纸片扩散法测定抑菌作用[4] 1.3.3.1食醋及蒜的两种提取原液对细菌作用的测定 细菌培养采用LB培养基:蛋白胨5g,酵母膏 2.5g,NaC15g,琼脂8g,蒸馏水500ml,灭菌前调 pH为7.0左右,分装,121?灭菌20min. 分别取0.1ml两种细菌菌悬液加于LB固体培养基表 面,用玻璃涂棒涂抹均匀,制成含菌平板.取直径6mm 的无菌滤纸片分别放入无菌水,食醋,蒜水提取原液, 蒜醋提取原液中浸泡5rain,用无菌镊子取出浸泡过的滤 纸片贴在含菌平板上,每皿贴3片,每菌做3次重复, 然后置37?培养箱培养24h,测定滤纸片的抑菌圈大 小,比较抑菌效果. 1.3.3.2食醋及蒜的两种提取原液对真菌作用的测定 真菌培养采用察氏培养基:NaNO31g,K2HPO4 0.5g,KC10.25g,MgSO40.25g,FeSO40.005g,蔗 糖15g,琼脂8g,蒸馏水500ml,自然pH,分装, 121?灭菌20min. 的无菌滤纸片分别放入无菌水,食醋,蒜水提取原液, 蒜醋提取原液中浸泡5min,用无菌镊子取出浸泡过的滤 纸片贴在含菌平板上,每皿贴3片,每菌做3次重复, 然后置28?培养箱培养48h,比较抑菌效果. 1.3.4比浊法测定抑菌作用【7j 1.3.4.1食醋及蒜的两种提取液对细菌作用的测定 将蒜水提取原液依次用无菌水稀释5倍,分别制成 2×10—1,4×10—2,8×10—,1.6×10—,3.2× 105个浓度的稀释液,分别编号为A,B,C,D, E.取盛有2mlLB液体培养基的12支灭菌试管.实验 管6支,加样量见表1;对照管6支,加样量见表2. 食醋,蒜醋提取液处理方法同上述蒜水提取液处理 方法.大肠杆菌,金黄色葡萄球菌各做3组重复.然 后置37?培养箱培养24h后,以对照管为空白,光程 lcm,在600nm处测定各管吸光度,取3组重复的平均 值,计算抑菌率. 抑菌率(%)=(1一——)×100 Ao 式中,A为1,5号试验管培养24h后测定的吸光 度;Ao为0号试验管培养24h后测定的吸光度. 1.3.4.2食醋及蒜的两种提取液对真菌作用的测定 黄曲霉,黑曲霉试验方法同上述细菌的实验方法. 取盛有2ml察氏液体培养基的12支灭菌试管.实验管6 支,加样量见表1;对照管6支,加样量见表2.每 菌各做三组重复,然后置28?培养箱培养48h后,以 对照管为空白,光程1cm,在600nm处测定各管吸光 度,取3组重复的平均值,计算抑菌率. A 抑菌率(%)=(1一——_)×100 Ao 式中,A为1,5号试验管培养48h后测定的吸光 度;Ao为0号试验管培养48h后测定的吸光度. 分别取0.1ml两种真菌菌悬液加于察氏固体培养基表2结果与分析 面,用玻璃涂棒涂抹均匀,制成含菌平板.取直径6mm 表1试验管加样表 Table1Dosagesoftesttubes ※基础研究食品科学2008,Vo1.29,No.0171 2.1滤纸片法测定抑菌作用的结果与分析 2.1.1食醋和蒜提取原液对细菌生长的影响 以无菌水作对照,食醋,蒜醋提取原液,蒜提取 原液对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌的作用分别见图1, 2及表3. 蒜水提取液食醋 图2食醋和蒜提取原液对金黄色葡萄球菌的作用 Fig.2AntimicrobialeffectsonStaphylococcusaureusof vinegarandoriginalgarlicextracts 食醋,蒜醋提取原液,蒜提取原液对大肠杆蔚, 金黄色葡萄球菌的生长都有抑制作用,且抑制作用依次 增强,食醋对两种细菌的抑制作用最强,而蒜醋提取 液原液最弱. 表3食醋和蒜提取原液对两种细菌作用的比较 Table3Antimicrobialeffectsofvinegarandoriginalgarlic extractsonbacteriaoftwospecies 2.1.2食醋和蒜提取原液对真荫生长的影响 以无菌水作对照,食醋,蒜醋提取液原液,蒜提 取液原液对黑曲霉,黄曲霉生长的影响分别见图3,4. 蒜醋提取液 图4食醋和蒜提取原液对黄曲霉的作用 Fig.4AntimicrobialeffectonAspergfllusflavusofvinegarand originalgarlicextracts 食醋,蒜醋提取原液,蒜水提取原液对黑曲霉, 72200&Vo1.29,No.O1食品科学※ 黄曲霉的生长都有抑制作用,且抑制作用依次增强.蒜 水提取原液对两种真菌的抑制作用很强,几乎达到 1O0ok,而食醋对黑曲霉几乎失去抑制作用. 2.2比浊法测定抑菌作用的结果与分析 2.2.1不同浓度的各种稀释液对细菌的作用 食醋,蒜醋提取液,蒜水提取液不同浓度稀释液 对大肠杆菌的抑制作用见图5. 冰 槲 罨 浓度 图5不同浓度稀释液对大肠杆菌的抑制作用 Fig.5AntimicrobialeffectsofdifferentextractsonEscherichia 三种稀释液对大肠杆菌都有抑制作用,其抑菌作用 均与其浓度成正比,且变化幅度很大.在高浓度(2× 10—1)时食醋和蒜水提取液对大肠杆菌的抑制作用很强, 抑制率达到90%以上.而蒜醋提取液的抑制作用相对较 弱,抑制率只有73%.食醋,蒜醋提取液,蒜提取 液不同浓度稀释液对金黄色葡萄球菌的抑制作用见图6. 褂 罨 / ,,, 液 液 浓度 图6不同浓度稀释液对金黄色葡萄球菌的抑制作用 Fig.6Antimicrobialeffectsofdifferentextractson Staphylococcusaureus 三种稀释液对金黄色葡萄球菌都有抑制作用,其 抑制作用均随其浓度的升高而增强,其中食醋和蒜醋提 取液在高浓度(2×10一)时抑制作用较强,与蒜水提取 液相当,都在90%以上,随浓度的降低其抑菌作用迅 速下降,而蒜水提取液对金黄色葡萄球菌的抑制作用较 稳定. 2.2.2不同浓度的各种稀释液对真菌的作用 食醋,蒜醋提取液,蒜提取液不同浓度稀释液对 黄曲霉生长的影响见图7. 冰 褂 提取液 提取液 浓度 图7不同浓度稀释液对黄曲霉的抑制作用 Fig.7AntimicrobialeffectsofdifferentextractsonAspergillus 三种稀释液对黄曲霉都有抑制作用,且与浓度成正 比,增强趋势均比较平缓.在高浓度(2×10_1)时蒜醋 提取液和蒜水提取液对黄曲霉的抑制作用均很强,90% 以上,而食醋的抑制作用较弱,在低浓度(3.2×10-4) 时对黄曲霉已无抑制作用. 食醋,蒜醋提取液,蒜提取液不同浓度稀释液对 黑曲霉生长的影响见图8. 冰 船液 液 浓度 图8不同浓度稀释液对黑曲霉的抑制作用 Fig.8AntimicrobialeffectsofdifferentextractsonAspergiflus niger 三种稀释液对黑曲霉都有抑制作用,抑制作用均随 其浓度的增大而增强,且变化趋势缓和.蒜醋提取液 和蒜水提取液对黑曲霉的抑制作用均很强,即使在很低 ?如胁?如加如加m0 ?如舳?加如m0 ?如胁?如加如m0 ?如胁加?如?加m0 , , , , 一 , — ※基础研究食品科学2008,Vo1.29,No.0173 浓度(3.2×10-4),其抑芮率均在50%以.而食醋对 黑曲霉抑制作用很弱,在高浓度(2×10)时抑蔚率也 在30%以下,低浓度(3.2×10一)时尢抑制作用. 一 步说明了大蒜的醋浸液较强的杀菌作用. 食醋对对真菌的抑制作用很小,而对细菌有较强的 抑制作用,与市售食醋中添加防腐剂有关. 3讨论参考文献 食醋,蒜醋捉取液,蒜水捉取液埘实验菌都有一 定的抑菌作用,}{J抑菌作用与浓度成比,蒜水提取 液和食醋对细菌的抑制作用较强,蒜水提取液和蒜醋提 取液对真菌的抑制作用强,可见大蒜对各种芮都有比较 强的抑制作用,小仪足一个优良的保健食品,而且是 一 种天然的广谱杀茼剂. 蒜醋提取液埘真菌的抑制作用略逊于蒜水提取液. 由于蒜在浸泡过程中,水溶性的抑菌成分被浸出,主 要存在于中,这与文献报道结果一致.由于醋浸液稳 定性好,具有较强的杀芮作刖,而经浸泡过的大蒜没 仃辣味,【1人J此"腊八蒜"和"腊八醋"作为种 人们普遍喜爱的调味品已有悠久历史. 灰指甲足一种发生在人甲【:的传染性疾病医学上称 为甲真菌病,它是由真菌感染引起的,民间早已流传 使用"腊八醋"治疗狄指甲,具有非常好的疗效,进 BRENNERH,AMDTV.STIIMERT.Individualandjointcontribu- tionoffamilyhistoryandHelicobacterpyloriinfectiontotheriskof gastricancer[J].AmJCancer,2000,88(2):274. 赵晓丹,傅达奇,陈计峦,等.醋蒜提取物抑菌作用研究[J】_中国调 味品,2004.10(10):13-16. 陈雄,乔听,林向东,等.大蒜油抗菌作用的初步研究[J】_中国调味 品,2002,10(10):14—16. 吴传茂,吴周和,李丽萍,等.迷迭香提取物的抑菌作用研究[J】_广 州食品T业科技,2000(3):5. 韩涛,姚磊,李丽萍,等.桑叶提取物抑菌作用的研究fJ].生物学杂 志,2005,22(6):21.24. 宫霞,姚淑敏,卢元芳.银杏叶提取物抑菌作用的研究[J1_食科学, 1999,20(9):54-56. 林捷,吴锦铸,朱新贵.柚皮提取物的抑菌作片j研究[J】l华南农业人 学,1999,20(3):59.62. 沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验[M].3版.北京:高等教育出版 社,2004:111. 口隅