心肺复苏中血单核细胞核因子-κB动态变化与临床意义探讨

心肺复苏中血单核细胞核因子-κB动态变化与临床意义探讨 心肺复苏中血单核细胞核因子-κB动态变 化与临床意义探讨 ? 246? 心肺 ChinJCritCareMed,Apr.2006,Vol26,No.4 复苏中血单核细胞核因子一KB动态变化与临床意义探讨 王金高,杨兰,马莉,李培杰,李自力,董晨明 [摘要]目的探讨外周血单核细胞中核因子一JcB的水平与心肺复苏病人预后的关系.方法6O例心脏骤停后心 肺复苏病人,依据复苏效果分为A组(29例):心肺复苏30min无效死亡;B组(21例):复苏成功,自主循环建立?2h,但最终 死亡;C组(1O例):复苏成功,存活出院.选择2O例健康成年体检者作为对照组(D组).于心肺复苏即刻(0h),1h,3h,6h, 12h留取静脉血,分离出单核细胞,采用免疫荧光抗体染色,流式细胞仪计数法检测核因子一KB水平,比较各组病人该指标的 动态变化.结果在心肺复苏初期,A,B,C三组核因子一JcB无明显激活,与D组比较差异无显着性(P>O.05);B组于心肺 复苏3h激活程度与C组接近,于心肺复苏6h显着激活,较C组明显升高,差异有显着性(P<O.05),并持续至12h;C组于 心肺复苏3h激活达峰值,12h降至较低水平.结论心肺复苏过程中,核因子一JcB的激活可能参与了全身缺血/再灌注损 伤的发生发展过程.心肺复苏早期核因子一JcB的激活可能是机体的一种保护性反应,而核因子一JcB正反馈的大量达可能 是心肺复苏病人高死亡率的主要原因之一.. [关键词]心脏骤停;心肺复苏;核因子一JcB [中图分类号]R605.97[文献标识码]A[文章编号]1O02—1949(2006}04--0246--04 ObservationandclinicalsignificantofNF— lcBactivityinperipheralbloodmononuclearduringcardiopulmonaryresuscitation WANGJin--gao,YANG--Lan,MALi,eta1.TheSecondHospitalofLanzhouUniversity.Lanzhou730030.China ~Abstract]ObjectiveToexploretherelationbetweenthelevelofNF— JcBinperipheralbloodlymphocyteandprognosis ofcardiopulmonaryresuscitation(CPR).Methods60patientswithsuddencardiacarrestreceivedCPR.Patientsweredivided into3groups.ThepatientswhodidfftregainheartbeatsweregroupA.those21whokeptbloodcirculationforover2hours butfinallydiedweregroupB-andtheremaining10whosurvivedweregroupC.Controlgroupwasmadeupof20peoplewith nodisease.NF—JcBwasstudiedbyflowcytometry(FCM)techniqueusingimmuno— fluorescentstaining.Theexpressionof NF— JcBactivationinperipheralbloodlymphocytewasdeterminedatthetimeof0,1,3,6,12hafterCPRinallpatients.Re- suitsTheexpressionofNF— JcBactivationwasnosignificantdifferenceatthebeginningofCPRinallgroups.IngroupC.it begantoincreaseat1hpointtime-andifspeakwasat6h-thendecreasedandwasneartothenormallevelafter12}LNosig— nificantdifferencewasfoundbefore3hingroupBandC.Afterthat,theNF— JcBactivitysignificantlyincreasedin6h.with apeakduring6,12h.ConclusionsTheexpressionofNF— JcBactivationparticipateintheonsetanddevelopmentofwhole bodyischemia--reperfusionofCPR.IntheearlystageofCPR.NF— JcBmayhasprotectiveeffectstothebody.Butthemas— siveexpressionofNF—JcBactivationisassociatedwithhighmortalityofpatientswithCPR. [Keywords']Cardiacarrest;Cardiopulmonaryresuscitation(CPR);NF—JcB 心肺复苏(CPR)后的全身缺血/再灌注损伤可能 触发多种核转录因子的激活,调控多种炎性基因的表 达,从而形成复杂的正负反馈通路,引起一系列病理 生理的变化.近年来,炎症机制受到人们的关注,关 于核因子一vJ3(nuclearfactorkappaB,NF一出)在 CPR后表达的研究,目前已有动物实验在这方面的探 讨[13,但I临床方面的研究尚未见报道.本实验通过对 CPR病人外周血单核细胞中NF一出动态变化的研 [基金项目]兰州大学硕士研究生课题(No.2003217) [作者单位]兰州大学第二医院急诊内科,甘肃兰州730030 [作者简介]王金高(1974.3--),男,硕士研究生,医师,主要从事危 重病研究.E—Hl:wig03@163.coFn. 究,探讨NF一出在全身缺血/再灌注损伤循环系统 中的作用. 1资料与方法 1.1病例选择2o04—10~2005—10救治的心脏 骤停病人6O例,男35例,女25例,平均年龄52.77 ?14.O4岁.纳入标准:发生心脏骤停年龄?18岁, 需要进行CPR的病人.剔除标准:恶性肿瘤,严重 肝肾疾病,感染,脑疝形成,活动性大出血,妊娠,处 于疾病终末期引起心脏骤停的患者. 1.2判断标准及抢救心脏骤停判断标准:意 识丧失,大动脉搏动消失,具备这二条即可做出诊 断.此外,心音消失,瞳孔散大固定,皮肤发绀或苍 白,心电图或心电监护示室颤,室扑,心脏电机械分 医学2006年4月第26卷第4 离,心室停搏等可作为辅助诊断标准.自主循环恢 复(recoveryofspontaneouscirculation,ROSC)标 准:出现窦性,房性,交界性,加速的室性自搏等 的自主心律,触及大动脉搏动,闻及心音且血压? 90/60mmHg,并维持30min以上.存活标准:自 主心律,自主呼吸和意识恢复到心跳停止前水平,存 活出院.终止复苏标准:经CPR30min后仍无自 主循环恢复,则终止复苏. 抢救措施:具体CPR措施依据《2000年国际 CPR和心血管急救指南》进行,包括基本生命支持 (basiclifesupport,BIs)和高级心脏生命支持(ad— vancedcardiaclifesupport,ACLS).心脏骤停一 经诊断,行胸外心脏按压,气管插管并给予有效人工 通气支持,心电监护示室颤者立即予以电击除颤,同 时建立静脉通道,应用复苏药物. 1.3试验分组将上述病人根据复苏最终结果分 :CPR30min无效死亡,或虽复苏成功 为三组,A组 但ROSCG2h.B组:CPR成功,ROSC?2h,但 最终死亡,脑死亡或持续植物状态.C组:CPR成 功,康复出院.D组:对照组,为20例健康体检者. 1.4材料淋巴细胞分离液,RPMI--1640培养基 购自Sigma公司;胎牛血清(fetalbovineserum, FBS)购自兰州民海生物公司;FIX&PERM试剂盒 购自杭州联科生物公司;小鼠抗人NF一.cB试剂盒 购自SantaCruz公司;Elite—ESP流式细胞仪为美 国Coulter公司产品. 1.5方法 1.5.1静脉血的抽取于CPR即刻(0h),1h,3 h,6h,12h分别抽取外周静脉血5mL,对照组早晨 空腹抽取外周血5mL,均放进加入肝素抗凝剂的试 管内,2h内送检. 1.5.2单核细胞的分离[1]采血后2h内通过淋 巴细胞分离液单次密度梯度离心分离法分离出外周 血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell, PBMC),黏附法分离出单核细胞:用含10FBS的 PBS4mI离心洗涤PBMC2次.以含209/6FBS的 RPMI一1640悬浮PBMC,于培养瓶中置37.0?, 5C(孵育箱中温育2h,所得贴壁细胞即为单核 细胞.分离后用于实验的单核细胞经2苔盼蓝染 色证实活细胞>95,Giemsa染色证实其纯度> 90. 1.5.3免疫荧光抗体染色,流式细胞仪(flowcy一 ? 247? tometry,FCM)计数法检测[3]收集单核细胞,用4 mLPBS洗涤细胞2次,按FIX&PERM试剂盒说 明以FixationMediumA固定,Permeabilization MediumB破膜.按NF,KB试剂盒说明依次加入 2小鼠抗人NF—KBPI抗,1FITC标记的羊 抗小鼠?抗,并置4?避光45min,3mLPBS洗涤 2次.所有样品分别用400L含1多聚甲醛的 PBS混匀,4?避光保存,1周内用FCM检测. 1.6统计学用SPSS10.0统计软件分析, 计量资料以?s表示,组间数据采用单因素方差分 析,组内比较采用重复测量设计的方差分析;性别, 疾病构成等计数资料采用卡方检验.PGO.05为差 异有显着性. 2结果 2.1一般资料三组病人在平均年龄,性别分布方 面,与对照组比较,差异无显着性(P>0.05).礼 心脏停搏时间,基础疾病构成方面,三组病人之间柑} 互比较,差异无显着性(P>0.05).C组自主循 恢复时间较B组短,但差异无显着性(P>0.05) 见表1,2. 表1一般资料(?S) 组别年龄(岁)—兰一心脏停搏时自主循环恢复 表2实验组病人的疾病种类构成(n) 组别心脏疾病脑血管意外 A56 B54 C41 电击伤创伤 54 42 31 急性中毒其他 18 24 1O 2.2外周静脉血单核细胞中NF一.cB测定情况 CPR即刻,A,B,C三组病人NF—KB水平较低,与 D组比较,差异无显着性(P>0.05).CPR1h时, B,C两组NF—KB激活上升(均PG0.05),与D组 比较,差异有显着性(PG0.05).CPR3h时,B,C 两组NF一.cB表达持续上升,c组达峰值,两组比较 差异无显着性(P>0.05).CPR6h时,B组进一 步上升而C组下降,两组比较差异有显着性(P< 0.05).CPR12h时,B组NF—KB呈小幅上升,C 组继续下降,两组差异进一步增大(PG0.05).见 表3. ?248?ChinJCritCareMed,Apr.2006,Vol26,No.4 表3实验组CPR不同时间静脉血单核细胞中NF--xB水平的变化(?,%) 组间比较:?P<O.05(与D组比较),*P<O.05(与C组比较) 组内比较:-A-P<O.05(NCPR即刻比较),?P<O.05(与CPR1h比较),?P<O.05(NCPR3h比较),?P<O.o5(NCPR6h比较) 3讨论复苏后综合征的主要原因之一.若这种诱因未得到 NF—B是一种多向性核转录调节蛋白,具有及时纠正,则CPR病人的病情加重,死亡率增加. 与某些启动子的固定核苷酸序列结合,从而启动基C组NF—B于CPR1h激活,3h达峰值之后逐渐 因转录的功能,在调控多种炎性细胞因子的表达中下降,12h降至较低水平.这可能是CPR时,由于 起着重要的作用.NF—B激活后引起许多因子的全身缺血/再灌注,胞浆内NF—B快速向核内移 转录,包括细胞因子,趋化因子,黏附分子,急性期反位,故3hNF—B激活达峰值;此后,自主循环渐 应蛋白,生长因子,转录因子,IB—a等.其中有些趋稳定,循环动力学逐渐恢复正常,诱因消除,从而 因子影响着CPR病人的预后,如E一选择素[4].使NF—xB激活的负反馈机制占据主导地位,故 CPR时,出现全身缺血/再灌注和一系列应激过程CPR3h后NF一的激活呈下降趋势,12h基本 的产生,各类炎性细胞因子表达增加[5J,这些是NF恢复正常,病人渐趋康复. 一 B激活的始动因素.已有动物实验证实,CPR由于NF—B具有双向调节作用,既可诱导炎 时脑神经元中NF—xB表达增加LI].关于临床症反应基因,凋亡基因的表达,又可 诱导抗凋亡基 CPR时循环系统是否存在着NF—B的激活及其因,多种应激蛋白,抗氧化酶类的表达,对于细胞生 表达规律,作者尚未见报道.存起着双重调节作用,这在肝脏移植研究中已得到 NF—B的调节主要是细胞内调节,包括正负证实[.CPR早期时,NF—B的激活可能是机体 反馈两个方面[6]:肿瘤坏死因子,a(TNF—a)和白应激反应的一部分,如果用药物过早地抑制了NF 细胞介素一1p(IL一1p)等不但是NF--xB活化的激一B的活性,则对机体有益和有害的基因均被抑 活剂,而且,其基因的启动子又含有B位点,可形制,在急性缺血损伤时,抑制炎症反应基因的同时过 成正反馈;IxB是NF一B活化的抑制剂,编码IxB早地抑制了细胞保护基因的表达,反而对预后不利, 一 a的基因启动子有B位点,从而形成负反馈;正因为炎症可能对于损伤后期的恢复有益,这在神经 负反馈机制往往是互相伴随的,NF—B表达的趋细胞生存的研究中已得到证实【8].正反馈机制的持 势取决于哪种机制占主导地位.续主导地位使NF—B大量激活,可能预示着CPR 本实验采用流式细胞仪方法检测了CPR病人外病人的病情恶化,应引起医护人员的足够重视.恰 周静脉血单核细胞中NF一出的激活情况,结果显当使用NF—B抑制剂,干预这种NF—B的恶性 示,各组病人在CPR即刻NF一出无明显激活表达激活,阻止炎性介质的恶性表达和释放,可能给防止 (P>0.05).B组于CPR1h开始激活表达,CPR3心脏骤停病人CPR后的病情进一步恶化,预防 h时NF一明显表达,其表达程度与C组接近;之SIRS,MODS,复苏后综合征及免疫 调节功能紊乱 后仍呈快速上升趋势,于CPR6h显着激活,较C组的发生提供新的治疗途径...,从而提高CPR病人的 明显升高(P<0.05);并持续至12h,未出现下降趋复苏成功率.而NF--B激活后的负反馈机制既诱 势.这可能是CPR时全身缺血/再灌注,细胞受到刺导机体表达了抗凋亡基因,细胞保护基因等对机体 激后NF一出激活,激活的NF一出和有关基因的启有益的基因,又避免了炎症反应基因,凋亡基因等对 动子结合,启动有关因子的转录,故CPR3h时NF一机体有害基因的大量表达,故NF一B一定程度的 出明显激活表达;当NF一出激活水平超过一定的阈激活后,怎样使其表达的负反馈机制占主导地位,可 值,可通过"扳机样作用"触发炎性因子表达的"瀑布能成为今后研究的热点之一. 样效应",各类炎性细胞因子大量表达,反过来又刺激参老献 了NF—r.J3的激活,从而使NF一出激活的正反馈机1潘曙明,杨兴易'林兆奋,等.全脑缺血一再灌注后大鼠脑神经元 制占据主导地位,故CPR3h后NF--r.J3呈快速上升中NF一B的表达[J]. 中华急诊医学杂志,2003,12(11):742 趋势,并持续至12h.这可能是导致CPR病人出现一744. 中国急救医学2006年4月第26卷第4期?249? 脓毒症患者CD14+单核细胞人类白细胞抗原一DR表达的观察 吴艳春,郑霞,方强 [摘要]目的通过研究脓毒症患者静脉血CDl单核细胞人类白细胞抗原一DR(HLA—DR)表达百分率的变化,评 价患者的免疫状态及与疾病的严重程度和预后的关系.方法在患者被诊断为脓毒症后的第1,4,7,14,28天或出ICU及死 亡前最后一次抽取静脉血,用流式细胞仪测定CD单核细胞HLA—DR表达百分率 及当天的APACHE?评分和SOFA评 分,至脓毒症消失.结果18例患者存活,26例死亡.从第4天开始,存活组CDl4单核 细胞HLA—DR表达均高于死亡组 (P<O.001).第1天,第4天(=Dl单核细胞HLA—DR表达>30者生存率均明显 高于表达<30者.CDl4单核细胞HIA — DR表达与APACH叨评分,SOFA评分均存在负相关.结论脓毒症患者CI:h单核细 胞HLA—DR表达持续低下可提示患 者处于免疫抑制状态.检测CI:h单核细胞HIA—DR表达可用于判断脓毒症患者 病情的严重程度和评估预后. [关键词]脓毒症;代偿性抗炎症反应综合征;CI:h单核细胞人类白细胞抗原一DR; 预后 [中图分类号]R631[文献标识码]A[文章编号]1OO2—1949(2006)O4一O249一O3 ObservationoftheexpressionofCD14+monocylehumanleukocyteantigenDRinsepticpatientsWUYah一ll行,ZHENGXia, FANGQiang.TheFirstAffiliatedHospitalofMedicalCollege.ZhejiangUniversity.Hangzhou310003.China [Abstract]ObjectiveTomonitorthechangesoftheexpressionofCDl4monocytehumanleukocyteantigenDR【HLA — DR)insepticpatientsandevaluatetheirimmunologicalcondition,relationshipbetweenseverityofillness.prognosisand CDl4'卜monocyteHLA— DRMethodsAfterthediagnosisofsepsiswasmade,patients'APACHE ?.scores.SOFAscoresand CDl4+monocyteHLA— DRweredeterminedinthe1st,4th,7th,14thand28thdaysorthelasttimeinICU.ResultsTbta卜 ly,44patientswereenrolledinthisstudy.Amongthem18survivedand26died.Fromthe4thday,theexpressionofCDl4+ monocyteHLA—DRinthesurvivorsweresignificantlyhigherthanthatinthedead(P<O.001).Survivalrate wasgreatly higherwhenCDl4'卜monocyteHLA—DRwas>3Ointhe1stand4thdaies.TherewasanegativecorrelationbetweenCI:h'卜 monocyteHLA—DRandAPACHElIscores.SOFAscores.ConclusionsPersistentlowleveloftheexpressiono fCD14+ monocyteHLA—DRinsepticpatientsshowthepatientswereinthestatesofimmunosuppression.Detectionthe expressionof CDl4monocyteHLA—DRcanbeusedtoevaluatetheseverityofdiseaseandpredictprognosisinsepsis. [Keywords]Sepsis;Compensatoryanti—inflammatoryresponsesyndrome{CARS);CI:h4monocytehumanleuko— cyteantigenDR;Prognosis 脓毒症(sepsis)是指由感染引发的全身炎症反 应综合征(SIRS).近年来研究证实,免疫功能紊乱 [作者单位] [作者简介] [通讯作者] 浙江大学医学院第一附属医院,浙江杭州310003 吴艳春(1975.11一),女,硕士研究生,现在浙江省中医 院工作,主治医师.E—mail:carret1998@sina.eom. 方强,男,ICU主任,研究生导师. 在脓毒症发生发展过程中具有重要作用[1].目前, 国内关于脓毒症患者CD+单核细胞人类白细胞抗 原一DR(HLA—DR)表达的文献为数甚少,本实验 通过观察脓毒症患者CD+单核细胞HLA—DR 的表达及急性生理和慢性健康状况评分(APACHE ?评分)和脓毒症相关性器官功能衰竭评分(sepsis-- 2KasaiH,HeLM,KawamuraM,eta1.IL一12ProductionIn— dueedbyAgari~ushlazeiFractionH(ABH)InvolvesTolllikeRe— eeptor(TLR)EJ].eCAM,2004,1(3):259—267. 3IchiyamaT,UenoY,HasegawaM.eta1.Intravenousimmuno— globulininhibitsNF—KBactivationandaffectsFcyreceptorex- pressioninmonocytes/macrophages[-J].Naunyn--Schmiedeberg 433. sArchPharmaool,2004,369(4):428— 4李培杰,董晨明,张立平,等.心肺复苏后血浆可溶性选择素及基 质金属蛋白酶一9水平与全身炎症反应综合征的关系EJ].中华 急诊医学杂志,2004,13(9):612—615. 5ChristopheA,MinouAC,IvanL,eta1.SuccessfulCardiopul— monaryResuscitationAherCardiacArrestasa"sepsis——Like" Syndrome[,J].Circulation,2002,106(5):562--568. 6马莉,杨兰,陈天铎,等.核因子一KB与心力衰竭的关系EJ].中国 循环杂志,2002,17(4):315—316. 7GuXP,JiangY,XuFT,eta1.Effectofcold—ischemiatimeon nuclearfactor--~Bactivationandinflammatoryresponseingraft afterorthotopiclivertransplantationinrats[D].WorldJGastro— enterol,2004,10(7):1OOO一1004. 8AnttiN,PerttuJL,MiliaK,eta1.NuclearFactor—KBCon— tributestoInfarctionAfterPermanentFocalIschemia[J]. 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