血浆凝固酶试验影响因素研究

中国热带医学 2005年第 5卷第 1期 CHINA TROPICAL MEDICINE Vo1．5No．1 February2005 103 [临床诊治] 血浆凝固酶试验影响因素研究 Study on the factors a~ecflng plasmacoagulase assay．ZHANG Xiao．mei ，BAI Shu．jing~．(Laboratory De． partment of Affiliated Hospital of Beihua University Medical College，Jilin 1 32000，Jilin，P．R．China) 张晓梅 ，白淑 晶 摘要 ：目的 探讨不同因素对玻片法和试管法检测血浆凝固酶的影响。 方 法 比较 、观察不同种类血浆、抗凝 剂、培养时间、茵液浓度、血浆灭活、纤维蛋白原等各种因素对血浆凝固酶试验的影响。 结果 柠檬酸钠和 ElYrA- Na2抗凝的兔血浆和人血浆检测葡萄球茵凝 固酶均能得 到正确结果；兔血浆更适合 于检测游 离凝固酶 ；玻 片法和试管 法所需的茵株一定要新鲜 ；反应时间取决于血浆种类和茵液浓度。 结论 血浆凝固酶试验受 多因素影响。 关奠词 ：凝 固酶试验 ；葡萄球茵；鉴定 中圉分类号：R446．112 文献标识码：B 文章编号：1009—9r727(2oo5)0l一103—02 血浆凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验 ，分 为玻片法 和试管法 ，目的是测定细菌凝 固血浆 的能 力。尽管方法简单 ，但受影响因素颇多，一般实验室 及临床只是按操作规程做玻片法，并未了解更多可能 影响结果的因素。我们针对这一情况 ，系统地研究 了 多种影响血浆凝固酶试验的因素，主要为不 同种类 的 血浆、抗凝剂、培养时间、菌液浓度、血浆灭活、纤维蛋 白等。通过做大量的试验，得到一些可靠的数据 ，从 而观察到上述因素可能对结果产生的影响，以及对传 统理论的一些不同看法，目的是为了更加准确地鉴定 葡萄球菌。 1 和方法 1．1 材料 菌株 ：共 57种葡萄球菌，来 自于临床分离 菌株，菌株为 ATCC25923。兔血浆 ：生理实验兔分 别用 EDTA．Na2、EDTA．K2和柠檬酸钠抗凝。人血浆 取自健康体检者 ，分别用 EDTA—Na2、EDTA．K2和柠檬 酸钠抗凝 。法国梅里埃公司鉴定阳性球菌板块 ，电脑 打印结果。 1．2 方法 1．2．1 鉴定方法 G 球菌 ，直径 0．5～1．5ttm，成单 、 双不规则葡萄状 ，无动力 ，无芽胞 ，兼性厌氧，呼吸兼 发酵代谢 ，发酵甘油产酸，触酶阳性，氧化酶阴性。通 常在 10％NaC1培养基生长，最适温度 30～37℃，符合 这些条件 ，可鉴定为葡萄球菌属，种的鉴定应用法国 梅里埃公司鉴定板。 1．2．2 玻片凝固酶试验 (聚集因子试验 ) 按标准方 法l1．2]进行 ，将 1滴均匀浓菌悬液滴于洁净玻片上 ，加 1滴蒸馏水 ，混均无 自凝 ，然后加 1滴血浆，不要过分 摆动 ，10s内观察结果 。 1．2．3 试管凝固酶试验 将数个葡萄球菌菌落置于 0．5ml血浆中，制成菌悬液，35～37℃孵育 ，4h观察结 果，若无凝块，继续孵育 ，24h后观察，阳性结果出现凝 块；无凝块 ，倾斜试管，血浆非常流动 ，可判定为阴性。 开始孵育时，每 30rain观察 1次结果[ 。 2 结果 2．1 使用不同抗凝剂和血浆 ，玻片法结果见 1。 表 1 57株葡萄球菌玻片法凝固酶阳性结果 2．2 使用不同抗凝剂和血浆 ，试管法结果见表 2。 表 2 57株葡萄球菌试管法凝固酶阳性结果 2．3 新鲜菌株(18～24h培养)和陈旧菌株(室温放置 作者单位：1．北华大学医学院附属医院，吉林 吉林 132000； 2．吉林省临床检验中心．吉林 吉林 132000 维普资讯 http://www.cqvip.com 104 CHINA TROPICAL MEDICINE~o1．5No．1 Fe~mry2005 中国热带医学 2OO5年第 5卷第 1期 3d)比较，使用柠檬酸钠兔血浆，l7株金黄色葡萄球菌 和 ATCC25923对照，见表 3。 表 3 新鲜菌株和陈旧菌株试管法和玻片法凝固酶阳性结果 2．4 菌液浓度对试管法结果的影响 将 ATCC25923 配制成 0．5麦氏浓度、1．0麦氏浓度、2．0麦 氏浓度菌 液均取0．5ml菌液，再加入 0．5ml柠檬酸钠兔血浆，记 录形成凝块时间分别为 6h、4h、lh。 3 讨论 血浆凝固酶试验测定方法分为玻片法和试管法， 但应明确玻片法测定结合凝固酶，也称聚集因子；试 管法测定游离凝固酶El,3】。金黄色葡萄球菌(黄金亚 种)、中间葡萄球菌、路邓葡萄球菌聚集因子阳性，而 游离凝固酶阳性的有金黄色葡萄球菌(包括厌氧亚种 和黄金亚种)、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌。这充分表 明有的葡萄球菌只产生聚集因子，而不产生游离凝固 酶。 有文献指出，试管法测定凝固酶，兔血浆优于人 血浆L4J。也有文献指出，兔血浆和人血浆都可以使 用L5J。本文证实，试管法抗凝剂不能使用 EDTA．K2，以 往的研究没有发现这一现象，认为血浆和抗凝剂没有 关系。 玻片法测聚集因子时，应用蒸馏水代替盐水稀释 血浆，一是葡萄球菌对盐敏感，特别是不能使用高盐 培养基，血浆不能过多，否则产生假阳性；二是一些菌 株产生过多的 A蛋白，A蛋 白和血浆内的免疫球蛋 白 G反应呈现颗粒状，使用蒸馏水稀释会减弱这种反 应 。 试管法测凝固酶时，前 4h内每30rain观察 1次， 这是由于葡萄球菌如果产生大量的葡萄球菌链激酶， 可以溶解纤维蛋白凝块，产生假阴性。 不论做试管法，还是 玻片法，菌株一定 要新 鲜。 一 般培养 18 24h，可以获得好结果。 菌液浓度对试管法结果影响较大，为了尽快得到 结果 ，菌液越浓，形成凝块 时间越短。本文结果和文 献 】的结论一致 ，即菌液的浓度影响着血浆凝固的速 度。 有文献指出，人血浆对于路邓葡萄球菌检测聚集 因子更有效，但玻片法观察结果要注意出现大的白色 凝块，为阳性结果，而不是细小凝集颗粒 ，这是因为血 浆内含有抗体，导致凝集颗粒形成，或者由于菌株产 生 A蛋白和 7球蛋白⋯。 参考文献： [1]Henry D．Isenbe~，Clineal Microbiology Procedure~ [M]．wIsh． ington，USA：Amerrlcan SocietyforMierobiohgy。1992。205—207． 【2]C_~ Graves B。Williams R，Hal"per G J，et a1．Slide-trot for 0呻目da。e- podfive staphylococci[J]．Lancet。1943，1：736． [3J Murray P R，Baron E J，Pfatler M A，et-1．Manual 0f Clinical Mi~ lcgy [M]．Sixth Edition，Washington USA：American Society for Microbiology， 1995，288—289． [43 Chapman G H．The comparative value of human I∞ and human lde blood for te~fing the coagulating power 0f staphylococci[J]．J．1hcterid。 1944，47：211． [5]Sneath H A。Mair N M，Shrp~ M E．Bergey’8 Manual of sy啦|m c Bacteriology Bnlfimore[M]．USA：Williams。W'dkim，1986。1018． 【6]Harper E M。Conway N S．Clomng 0f human eittat~l plasma by m 葛-ti m茜 ms[J]．J．Patho1．Bacteriol。1948，60：247． 收藕 日期 ：2O04一o9—20 (上接第 108页) 反应最频繁，占45．60％(207／454)，其余依次为喹诺酮 类 16．30％(74／454)，中药制剂 10．57％(48／454)，生物 制剂 5．73％(26／454)，见表 4。 表4 ADR病饲的药物分类 3 讨论 患者在治疗疾病时，出现药品不 良反应是比较普 遍的。359例 ADR病例报告就涉及到 l5大类原患疾 病，且这些不 良反应现象种类繁多，可影响到皮肤、呼 吸、消化、神经、循环等多个系统 ，其中以过敏样反应、 胃肠道反应较为常见。从药品种类来看，引起 A．DR的 药品种类也很多，其 中抗生素、喹诺酮类抗菌药所 占 的比率超过 6o％。从剂型看，以注射剂为主，所占比 率高达 78％以上，而大多数都是通过静脉滴注给药， 其它剂型相对较少。提示临床上应合理使用抗菌药 物，对注射剂静脉给药所产生的不良反应予以高度重 视。 收藕 日期 ：2OO4—08—23 维普资讯 http://www.cqvip.com