研究三仙壮骨胶囊提取工艺

研究三仙壮骨胶囊提取工艺 摘要： 目的 优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺。 采用高效液相色谱法测定川续断皂苷VI的含量，并以川续断皂苷VI的含量作为指标，采用正交试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为:加10倍量的水煎煮2次，每次1 h。结论 该提取方法合理、可行，为生产提供了实验依据。 关键词： 三仙壮骨胶囊；提取工艺；高效液相色谱法；川续断皂苷VI 三仙壮骨胶囊是由续断、淫羊藿、独一味、当归等几味中药组成，本品为研制者常年行医的经验方，临床用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、瘀积肿痛。方中续断、淫羊藿、独一味主要含有皂苷类成分及黄酮苷类成分，在水中溶解性较好，故此三味药材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交设计法，以川续断皂苷VI为指标，用高效液相色谱法测定其含量［1-4］，以优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳工艺。 1 材料与试剂 Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996 PDA检测器, Empowers色谱工作站， Diamonsil C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm，迪马公司）。KQ?100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。 　　川续断皂苷VI对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111685?200401）；乙腈为色谱纯；水为屈臣氏蒸馏水；其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 正交试验设计 　　按处方称取续断、淫羊藿、独一味药材，加水进行煎煮，在煎煮过程中，采用L9( 34 )安排正交试验，以续断中川续断皂苷Ⅵ的含量为指标，对提取效果影响较大的加水量、煎煮次数及煎煮时间3个因素进行考察，各因素水平见表1。表1 因素水平表 2.2 川续断皂苷VI含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈?水（体积比30∶70）；检测波长为210 nm；柱温为25 ℃；流速为1 mL/min；进样量为10 μL。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取川续断皂苷VI对照品3.09 mg，置2 mL容量瓶中，用甲醇溶解配制成质量浓度为1.545 mg/mL的对照品溶液。 2.2.3 供试品液的制备 取水提取液适量（相当于续断药材0.75 g），置圆底烧瓶中，减压浓缩至干，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，依次注入高效液相色谱仪，各重复3次，记录峰面积。以川续断皂苷VI峰面积均值（A）对进样质量浓度（ρ）进行线性回归，得回归方程为A=191595.75ρ?97704.96，r=0.999 8（n=6）。表明川续断皂苷VI在3.09～30.9 μg/mL之间与峰面积具有良好线性关系。 2.2.5 样品含量测定 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下条件进行测定，测得的川续断皂苷Ⅵ对照品和样品色谱图见图1。 2.2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，连续测定6次，结果RSD值为0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。 2.2.7 重复性试验 分别取同一批号样品6份，按“2.2.3”项方法制备溶液，依法测定川续断皂苷Ⅵ的含量，结果测得含量的RSD值为0.92%(n=6),表明本法重复性良好。 　　2.2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，间隔不同时间进行测定，结果RSD值为0.50%(n=5)，表明供试品溶液在4 h内测定基本稳定。 2.2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品，分别加入一定量的对照品，置圆底烧瓶中，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液并在上述条件下测定，其平均回收率为100.30%，RSD为2.84%(n=6)。 2. 3 正交实验结果 　结果见表2、表3。表2 正交试验结果表3 方差分析表从表2、表3中可见，因素A、因素C对实验结果有显著影响，因素B对实验结果影响较小。综合正交实验结果及节约生产成本的角度考虑，确定最佳工艺为A3B2C2，即加10倍量水煎煮2次，每次1 h。按最佳工艺对3批样品进行验证实验，结果3批样品的平均含量分别为11.57、12.19和12.02 mg/粒，可见该工艺稳定可行。