人参蛋白抗辐射性能实验研究

　　 人参蛋白抗辐射性能实验研究 本文作者：职称论文360期刊网 网址：http://www.360qikan.com/ 摘要：目的研究人参蛋白的抗辐射损伤作用。方法以60Co-γ射线一次性照射小鼠全身，观察人参蛋白对照射小鼠外周血白细胞数，骨髓细胞微核数，红细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性，肝脏丙二醛（MDA）含量以及胸腺、脾脏指数的影响。结果人参蛋白能增加辐射后小鼠外周血白细胞数，减少骨髓细胞微核数，增加红细胞SOD活性，抑制肝脏MDA含量升高，提高胸腺及脾脏脏体指数。结论人参蛋白对γ射线所致小鼠辐射损伤有较好的保护作用。 　　关键词： 人参蛋白； 小鼠； 辐射损伤 　　辐射对生物体的危害较大，可以直接作用于DNA、蛋白质及酶类，使分子变性、细胞结构破坏；也可以作用于机体内水分子，使其产生大量的具有强氧化性能的自由基，致使机体代谢紊乱，引起免疫、神经和内分泌系统的调节功能障碍等一系列病变［7］。外周血白细胞数减少、骨髓细胞微核数增高、血或组织中SOD活性降低等均为一次性全身γ射线照射引起辐射损伤的主要表现。白细胞又称白血球，作为免疫系统的一部分帮助身体抵抗传染病以及外来的东西，白细胞急剧减少可引起血液病等多种免疫性疾病。微核是在细胞有丝分裂后期没有进入细胞核而留在细胞质中的染色体或片段，它在末期以后，单独形成一个或几个的次核，由于比核小得多故称微核。微核的多少直接反映染色体的损伤程度，也间接代表机体受辐射损伤的状况。 　　另外，正常组织受到辐射后，会产生大量自由基，后者作用于生物膜引起脂质过氧化，造成生物膜功能和代谢的改变。SOD作为机体组织主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可间接反映机体清除自由基的能力；MDA是脂质过氧化的主要产物，其含量高低反映机体的自由基水平和氧化应激水平［8］。 　　人参为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Meyer的干燥根。大量研究显示，人参单味药及复方药均具有明显的抗辐射作用［1］，但目前研究大多针对人参皂苷及多糖类，认为皂苷与多糖是人参抗辐射作用的主要成分［2～6］，对于蛋白类成分抗辐射研究未见报道。本实验通过观察人参蛋白对辐射小鼠损伤的保护作用，为进一步研究人参蛋白的抗辐射作用奠定基础。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药物5年生人参购自吉林靖宇县，为五加科植物人参（Panax giseng C.A. Mey.的干燥根。人参蛋白样品为本实验室制备，经Bradford蛋白含量试剂盒法测定蛋白含量为80%。 　　1.2 动物 　　由吉林大学实验动物中心提供的ICR小鼠，雄性，体质量18～22 g。动物质量合格证号：10-1023。 　　1.3 仪器与试剂 　　贝克曼-库尔特5分类血球计数仪，Backman公司；XS-212-201双目光学显微镜，Jnoec公司；UV mini-1240型紫外可见分光光度计，Shimadzu公司；SOD试剂盒、MDA试剂盒，南京建成生物研究所。 　　2 方法 　　2.1 动物分组 　　取40只小鼠，随机分为4组，即正常对照组，辐射对照组，人参蛋白高剂量组（1 mg/g）及人参蛋白低剂量组（0.5 mg/g）。各组均为灌胃给药，1 ml/次，对照组灌服等体积蒸馏水。连续给药7 d后，除正常对照组外，其余3组均实施一次性60Co-γ射线全身照射，照射剂量为2 Gy。 　　2.2 外周血白细胞计数 　　照射后24 h尾静脉采血20 μl，加入到0.38 ml 2%HAc溶液中，充分混匀，加入血球计数板中，在显微镜下读取白细胞（WBC）个数。 　　2.3 骨髓细胞微核计数 　　照射后24 h小鼠颈椎脱臼处死，取胸骨，用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，常规涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定5～10 min。将固定好的涂片放入Giemsa应用液中，染色10～15 min。立即用蒸馏水冲洗，晾干，镜检。选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，在油镜下观察。以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。 　　2.4 红细胞SOD活性及肝脏MDA含量测定 　　小鼠颈椎脱臼处死后，立即眼球取血并剥取肝脏。全血经生理盐水冲洗，冷双蒸水混合、95％乙醇振荡、三氯甲烷抽提制备SOD抽提液，按照试剂盒说明书测定SOD活力。肝组织经生理盐水冲洗，磷酸盐缓冲液匀浆制成5％组织匀浆液，取上清按照试剂盒说明测定MDA含量。 　　2.5 脏体指数计算照射24 h后，分别对各受试小鼠进行称重。小鼠处死后分别取出胸腺和脾脏称量，计算胸腺、脾脏的脏体指数比。 　　2.6 数据处理与数据以±s表示，组间差异按Poisson分布进行t检验。 　　3 结果 　　3.1 人参蛋白对辐射小鼠血液白细胞数及骨髓细胞微核数的影响 　　显微镜下读取计数板中白细胞个数，计算计数池中4个大方格中白细胞总数：白细胞数（109/L）=4个大方格中白细胞总数/4 ×稀释倍数×107；每只动物计数1 000个嗜多染红细胞，计算骨髓细胞微核率，以千分率表示。 　　由表1可见，辐射对照组与正常对照组比较，WBC数明显降低，微核率明显升高，说明造模成功。人参蛋白组较辐射对照组小鼠WBC数明显增多，微核率明显降低，说明人参蛋白可对抗辐射所致白细胞数降低及微核数升高。 　　3.2 人参蛋白对辐射小鼠SOD活性及MDA含量的影响 按照试剂盒方法分别测定红细胞SOD活性及肝脏MDA含量，并按照试剂盒所示公式进行计算。结果见表2。由表2可见，辐射对照组与正常对照组比较，SOD活性明显降低、MDA含量明显升高，说明造模成功。人参蛋白组与辐射对照组比较，SOD活性明显升高，且成一定量效关系，说明人参蛋白可对抗辐射所致SOD活性降低；MDA含量虽无明显变化但有降低趋势，且成一定量效关系，说明人参蛋白可能具有抑制小鼠MDA含量升高的作用。 　　3.3 人参蛋白对辐射小鼠胸腺及脾脏指数的影响 　　小鼠处死后称取胸腺、脾脏重量，并与处死前当天小鼠体质量进行比较，计算脏体系数比。结果见表3。　由表3可见，辐射对照组与正常对照组比较，胸腺及脾脏指数明显降低，说明造模成功。人参蛋白组与辐射对照组比较，胸腺指数及高剂量脾脏指数明显升高，说明人参蛋白可对抗辐射所致胸腺及脾脏指数降低，且成一定量效关系。给予人参蛋白能有效预防γ射线照射引起的小鼠白细胞数减少、骨髓微核数增加、红细胞SOD活性降低及胸腺、脾脏指数降低，对MDA含量升高虽无明显抑制作用，但有一定抑制趋势。 　　本实验中人参蛋白能明显抑制受照小鼠的白细胞数减少、微核数增多、SOD活性降低、MDA含量增加，说明人参蛋白对辐射损伤小鼠具有很好的保护作用。同时，人参蛋白提高使受照小鼠的胸腺、脾脏指数增加，反映了人参蛋白有提高免疫力的作用。综上，我们认为，人参蛋白具有有效防治辐射对机体损伤的作用，且认为人参蛋白的抗辐射作用可能与其增强免疫力，清除自由基作用密切相关。对于人参蛋白的其他作用机理，我们正在进一步研究中。