HPLC法测定阿归养血颗粒中阿魏酸的含量

科技交流 HPLC法测定阿归养血颗粒中阿魏酸的含量 张颖 蒋俊春 陈艳梅 (商丘市食品药品检验所 河南商丘476000) 摘 要 目的：建立 HPLC法测定阿归养血颗粒中阿魏酸含量的。方法：采用HYPERSIL OSD2 Cl8色谱柱(150mm×4．6 mm，5Ixm)，乙腈一1％冰醋酸(30：70)为流动相；流速 1．0ml·min～；检测波长 320nm。结果：阿魏酸在 2．2～15．4lxg·rain 范围 内线性关系良好(r=0．999 9)，平均回收率为99．7％，RSD=0．9％(n=5)。结论：方法简便，专属性强，结果准确，可用于阿归 养血颗粒的质量控制。 关键词 阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定；阿归养血颗粒 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2009)01-0130-02 阿归养血颗粒是由当归、阿胶、党参、白芍等药材加工制 成的颗粒剂，具有补养气血之功效，用于面色萎黄，头晕乏 力，月经量少色淡⋯。现行质量标准中未收载含量测定项 目，不能有效的控制药品质量。当归为方 中主药 ，阿魏酸是 当归的主要有效成分之一 ，本文以阿魏酸为指标成分，建 立了阿归养血颗粒中阿魏酸的 HPLC 测定法，为该制剂的 质量控制提供了客观的含量评价方法。 1 仪器与试药 1．1 仪 器 Watersl515型高效液相色谱仪 ，Waters2487紫外检测器 AUW一220D电子分析天平，5210DT超声处理器(功率 250W， 频率 33kHz) 1．2 试 药 阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所 ，批号 ：0773— 9809；乙睛为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。 阿归养血颗 粒 (市 售：河南 辅仁 制药 有 限公 司，批 号： 20070502 20071201 20060106，平均袋重：10．0012g)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱：HYPERSIL OSD2 Cj8色谱柱(150mm×4．6mm， 5I,zm)，流动相：乙腈一1％冰醋酸(30：70)；柱温：30％，流速 1．0 ml·rain～；检测波长320nm，进样量20txl。 ··●·⋯ ··●··． _· ·●·· ．． ·- ●·f．．I_●·． ． ．- - ●·⋯ ．·●-tt．·_●·· ． ．· · ●·． ．_ ．· ●·_．‘．·●·．．． -．●·．⋯ ·●t|．‘_-●··-． ·_．·．．__·●· ⋯ ·●·⋯ ．· 表 2 样品测定结果(n=4) 3 讨论 3．1 HPLC法测定齐墩果酸的含量，采用紫外检测器时，需 正确选择检测波长。通过对齐墩果酸紫外吸收的测定并通 过多次试验，以选取 210nm作为检测波长测定效果最佳。 3．2 有报道选用 甲醇一水一冰醋酸一三乙胺 (47：53：0．04： 2．2 线性关系考察 精密称定阿魏酸对照品约 10．995mg，置 50ml棕色量瓶 中，加甲醇适量，使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀。精密量 取 1、2、3、5、6、7ml，分别置 10Oral棕色量瓶中加甲醇稀释至 刻度，摇匀。按照“2．1”项色谱条件，分别进样201xl，记录阿 魏酸峰面积值，以峰面积积分值(Y)对对照品浓度(x)进行 线性 回归，回归方程：Y=9．42×10 +5．18×10 ，r= 0．999 9。结果表明，阿魏酸对照品浓度在 2．2～15．4txg· rain 范围内与峰面积呈 良好的线性关系。 2．3 对照品溶液 的制备 精密称定阿魏酸对照品 10．995mg，置 50ml棕色量瓶 中，加甲醇适量，超声处理使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀， 作为对照品贮备液。精密量取贮备液3 ml置100 ml棕色量 瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 2．4 供试品溶液的制备 取本品细粉约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加5％0 碳酸钠溶液20ml，超声处理30min，提取液移至离心管中，离 心(3 000r·rnin )10min，取上清液，置分液漏斗中，沉淀用 5％碳酸钠溶液洗涤3次，每次20ml，洗液并人同一分液漏斗 中，用2％氯化钠饱和的乙醚液洗涤3次，每次 20ml，弃去乙 醚液，水溶液用盐酸调 pH为 1—2，再用2％氯化钠饱和的乙 醚液振摇提取4次(25，25，2O，20m1)，合并乙醚液，回收乙醚 至干，残渣加甲醇 10ml溶解，定量转移至25ml棕色量瓶中， - ．●●●ft．-．●●-．． ··●··．．1·●··．．· -●●·-． ·- ●’●． ，●●●●-．-_●●●_．．_●●-·． ．- _●· ● ．_·●··_ _·-I·t-．-．●·．_'_1●·-．I_·●·-．．．·●·．．_'·●_．．．．·●·．．．．·●·．．_I_●··．__．●·-．．．·●·-⋯ ·●·-．．．·●·-． 0．02)作为流动相，采用 HPLC法测定中药材中齐墩果酸的 含量 ，笔者采用此法对二至丸进行了测定，显示对照品及 样品的齐墩果酸峰与相临峰不能有效分离，因此，该流动相 对测定二至丸中齐墩果酸含量不能取得满意效果。 3．3 样品制备时可采用回流提取法与超声提取法 ，经过 试验，回流提取法回收率较高，因此采用回流提取法。 参 考 文 献 1 中国药典[s]．2005年版．一部．43 (2008-06-03收稿 2008-07．15修回) 中国药师 2009年第12卷第1期 china Pha册acjst 2009，Vo1．12 No．1 加甲醇至刻度，摇匀。 2．5 精密度试验 取同一对照品溶液，重复进样5次 ，每次201xl，记录峰面 积 ，RSD=0．9％(n=5)，表明精密度 良好。 2．6 稳定性试验 取同一样品溶液分别在 0、1、2、3、4、5、6h进样 20p,1测 定峰面积，RSD：0．9％(n=7)，供试品溶液在6h内稳定。 2．7 重复性试验 取同一样品6份，按“2．4”项下方法制备供试品溶液， 进样20 l测定含量，结果RSD=0．9％(n=6)，表明本方法 的重复性良好。 2．8 加样回收率试验 分别精密称取 已知含量 为 0．096mg／g的样 品 (批号 20060106)5份 ，另取对照品 13mg，置 50ml量瓶中，加甲醇 稀释至刻度 ，分别精密量取 1ml加入每份样品中，按供试品 制备方法制备，分别精密量取3ml，置 10ml量瓶中，按照“2． 1”项色谱条件，分别测定，结果见表 1。 表 1 加样回收率试验结果 2．9 样品测定 取 3批样品，按 “2．4”项 下方 法制备 供试液 ，各进样 20tzl，按外标法(峰面积)计算阿魏酸的含量，结果见表 2及 图 1。 表2 样品阿魏酸的含量 样品批号 样品含量(mg／袋) 2o07o502 20o71201 20o601O6 1．O 1．1 0．96 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10t／min A B C A．对照品 B．样品 C．阴性样品 1．阿魏酸 图1 HPLC色谱图 3 讨论 本制剂处方中成分复杂，为了将阿魏酸与其他成分较好 的分离 ，我们采用了不同的流动相，试验结果表明乙腈一1％ 冰醋酸(30：70)为流动相，效果最佳。阿魏 酸对光稳定性 差，操作需避光。本方法操作简便 ，具有较强的专属性 ，回收 率好，能够更有效的控制该制剂的质量。 参 考 文 献 1 卫生部药品标准中药成方制剂[s]．第十二册．79 2 袁丽霞，王红．HPLC法测定当归苦参丸中阿魏酸的含量[J]．中国药事， 2008，22(1)：61-62 3 中国药典[s]．2005年版．一部．89 (200806-03收稿 20084)9—12修回) 高效液相色谱法测定妙打狼颗粒中黄芩苷的含量 孙延萍 (哈尔滨医科大学附属第一医院 哈尔滨150001) 摘 要 目的：建立测定妙打狼颗粒中黄芩苷含量方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：Diamonsil C (150mm×4．6 mm，5 m)；流动相：甲醇一水一冰醋酸(50：50：1)；流速：1．0ml·min～；检测波长：278nm。结果：妙打狼颗粒中黄芩苷与其他组 分分离良好。线性范围为 0．17～1．701xg，r=0．999 9，平均回收率 99．72％，RSD为 0．70％。结论 ：本方法操作简便、灵敏度 高、结果准确，可用于妙打狼颗粒中黄芩苷的测定。 关键词 妙打狼颗粒；黄芩苷 ；高效液相色谱法 中图分类号：R927．2 文献标识码 ：A 文章编号：1008-049X(2009)01-0131-02 妙打狼颗粒是自主研制的国家级六类新药，纯中药制 剂，由黄芩、水牛角、大青叶、赤芍、白芷等十多味中药组成， 具有清热解毒、凉血化瘀之功效，临床用于治疗系统性红斑 狼疮，热毒炽盛之证，症见发病急，高热不退，面部蝶形红斑 或手足或全身皮肤红色斑疹，或伴口腔溃疡，咽痛，烦躁，舌 质红，苔黄腻，脉滑数或浮数。本颗粒疗效显著，无毒副作 用，为广大狼疮患者解除病痛，受到广大患者的一致好评。 黄芩为处方中君药，收载于《中国药典)2oo5年版一部，含有 多种有效成分，其中黄芩苷为主要有效成分，测定其含量可 作为控制该品内在质量的指标。本研究建立了HPLC法测 定妙打狼颗粒中黄芩苷的含量 J，能有效地控制该药的质 量。 1 仪器与试药 Agilent l100 Series高效液相色谱仪(美国安捷伦公