刺五加口服液中刺五加总皂苷的含量测定

黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL24No．12011 ·25· 刺五加口服液中刺五加总皂苷的含量测定 金焱，姚会敏 哈药集团三精制药股份有限公司 摘要 目的：建立刺五加口服液中刺五加总皂苷含量测定的UV法。方法：采用AB一8型大孔吸附树脂分离 刺五加总皂苷⋯，利用此类化合物的分子结构皆为三萜皂苷，在齐墩果烷型配基上连有单糖链或双糖链，与香草醛浓 硫酸加热反应生成物在540nm处显最大吸收H’的特性，选用齐墩果酸为对照品，用UV法测定刺五加总皂苷的含量。 结果：该方法在20．96lag一125．76雌浓度范围内具有良好的线性关系，R=0．9999；平均回收率为99，64％，RsD= 0．56％。结论：该方法准确，可靠，重复性好，可作为刺五加口服液质量控制的方法。 关键词：刺五加口服液；刺五加总皂苷；大孔吸附树脂；UV法 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1006—2882(2011)01—025—02 DeterminationoftheContentoftheTotalsaponinsofAcanthopanaxSenticosus 励lYan．etal SanjingPharmaceuticalCo．，Ltd．，HarbinPharm．Group Abstract：0bjective：ToestablishUVmethodfordeterminationofthecontentofthetotalsaponinsofAcanthopanaxsenti— COSK廿．Methods：Inthisarticle，thetotalsaponinsofAcanthopanaxsenticosuswereseparatedbyAB一8macroporousadsorption resin．Molecularstructuresofthesecompoundswerealltriterpenoidsaponim，whoseoleananetypeligandswereequippedwith monodesmosidieorbidesmosidie．TheresultantsoftheirheatedreactionswithvaniUinsulfuricacidhadmaximumadsorptionat 540nm．Comidefingthosecharacteristics．oleanolicacidWaftchosen躺thereferencesubstancetodeterminethetotalsaponins ofAcanthopanaxsenticosusbyUVmethod．Results：nestandardeul'vewaftingoodlinearityovertherangeof20．96p,g一 125．761xg，R=0．9999fordeterminationofitsrelatedsubstances．11leaveragerecoveryratewas99．64％，RSD=0．56％ ．Conclusion：Themethodisaccurate，reliableandreproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofAcanthopanaxsenti· eosll5oralliqllid． Keywords：Acanthopanaxsenticosusoralliquid；thetotalsaponinsofAcanthopanaxsenticosus；macroporousadsorption resin；UVmethod 我们对刺五加口服液中的刺五加总皂苷进行了质量研 究，并确定了检验方法，具体内容如下。 1仪器和试药 瓦里安CARYl00紫外一可见分光光度计；齐墩果酸对 照品(中检所购买)；空白样品(自制，批号：090812)；实验样 品(自制，批号：090814)；其它试剂为纯。 2检测波长的确定 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品5．24rag， 置5ml量瓶巾加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。 供试品溶液的制备精密量取样品1ml，置已处理好的 树脂柱(内径1．5era，填充高度16cm，AB一8型大孔吸附树 脂，乙醇装柱，用水洗尽乙醇)。按3ml／min流速，以水70ml 洗脱；继用70％乙醇洗脱，弃去初流出液5ml，收集洗脱液 50ml，置水浴上蒸干。残渣以甲醇溶解，定量移入5ml量瓶 中，以甲醇稀释至刻度，摇匀即得。 精密量取对照品溶液、供试品溶液各60出，分另1置于试 管中，挥干，精密加人8％香草醛乙醇溶液0．5ml，72％硫酸 5ml，摇匀。置60℃恒温水浴加热10min，取出试管置冰水浴 中冷却15min，以溶剂60出同法操作制备空白，于500nm一 600nm波长范嗣内扫描。对照品溶液和供试品溶液在 540rim波长处均有最大吸收，故选540nm为检测波长。 3专属性试验 精密菌取空白样品l“，依照“检测波长的确定”中供试 品溶液的制备方法进行制备。精密量取60出，置于试管中， 同法操作，于540nm处测定吸收度。结果在540nm处无吸 收，表明空白无干扰。 4线性关系考察 精密称取齐墩果酸对照品5．24mg，置5ml量瓶l{1DⅡ甲 醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取20、40、60、80、100、 1201．d，分别置于试管中，同法操作，于540nm处测定吸收 万方数据 ·26· 黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalV01．24No．12011 度。以含量(最后显色的试管中含有齐墩果酸的质量，弘g) 为横坐标，吸收度为纵坐标，进行线性回归，结果见表1： 表1线性关系测定结果 回归方程为：Abs=0．0047m+0．0093R=0．9999 结果表明，齐墩果酸在20．96斗g一125．761乩g浓度范围 内，线性关系良好。 5精密度试验 精密称取齐墩果酸对照品5．24mg，置5ml量瓶中加甲 醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取60止，置于试管中， 同法操作，于540rim处测定吸收度。重复测定6次，考察其 吸收度，结果见表2： 表2精密度测定结果 结果表明，相对偏差小于1％，精密度良好。 6重复性试验 精密量取样品1“，取样6次，依照“检测波长的确定” 中供试品溶液的制备方法进行制备。分别精密量取60心， 置于试管中，同法操作，于540nm处测定吸收废。考察其吸 收度，结果见表3： 表3重复性测定结果 结果表明，栩对标准偏差小于l％，重复性良好。 7回收率试验 根据重复性试验测定结果，按外标法由“线性关系考 察”下的标准曲线测得样品浓度为5．139mg／ml。 精密称取齐墩果酸对照品51．12mg，置10ml量瓶中加 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得对照品贮备液。 精密量取对照品贮备液0．4ml、0。5ml、0．6ml(分别相当 于齐墩果酸2．0448mg、2．5560mg、3．0672mg)各3份置已处 理好的树脂柱，再分别精密量取样品0．5ml置相应的树脂柱 中，依照“检测波长的确定”中供试品溶液的制备方法进行 制备。分别精密量取60砧，置于试管中，同法操作，于 540hm处测定吸收度。按外标法由“线性关系考察”下的标 准曲线测定浓度，计算回收率。 表4回收率测定结果 结果表明。齐墩果酸的回收率均在98％一102％之间， 该方法准确可靠，误差在允许的范嗣内。 8讨论 8．1刺五加总皂苷系从刺五加中提取分离的含16种活性 成分的总皂苷，这16种化合物的分子结构皆为三萜皂苷， 在齐墩果烷型配基上连有单糖链或双糖链，此类化合物与 香草醛浓硫酸加热反应生成物在540nm处显最大吸收，此 特性为本方法建立的基础。 8．2大孔树脂技术是近年来发展起来的分离纯化技术，在 医药领域中广为应用。通过对多种常用大孔吸附树脂的研 究，最终发现AB一8型大孔吸附树脂综合性能最好，适用于 刺五加总皂苷的分离。 9结论 通过方法学验证，结果表明该方法精密度、准确度高， 线性关系良好，能满足含量测定的要求。因此确定刺五加 口服液中刺五加总皂苷的检验方法如下： 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品适量，加 甲醇制成每lml约含lmg的溶液，摇匀即得。 供试品溶液的制备精密量取本品lml，置已处理好的 树脂桂(内径z．5cm，填充高度16cm，AB一8型大孔吸附树 脂，乙醇装柱，用水洗尽乙醇)，按3ml／min流速，以水70ml 洗脱；继用70％乙醇洗脱，弃去初流出液5ml，收集洗脱液 50ml，置水浴上蒸干。残渣以甲醇溶解，定量移入5ml量瓶 中，以甲醇稀释至刻度，摇匀即得。 含量测定的步骤精密量取对照品溶液20、40、60、80、 100一及供试品溶液60一，分别置于试管巾，挥干，精密加入 8％香草醛乙醇溶液0．5ml，72％硫酸5m]，摇匀。置60℃恒 温水浴加热lOmin，取出试管置冰水浴中冷却15min，以溶剂 60山同法操作制备空白，在波长540nm处测定吸收度，建立 标准逝线，计算即得。 参考文献 [1]梁少玲。蔡宇等．大孔树脂吸附在黄酮圾皂苷类成分分离纯 化中的应用[J]．时珍圜医国药。2006。17(2)． 【2]孟勤，赵俊艳等．蒯五加盱总皂甙合荆质量标准探讨【J】．吉 林中医药，199'7，(4)． 收稿日期：2010—09～28 万方数据