奇异变形杆菌PCR试剂盒

奇异变形杆菌PCR检测试剂盒 【摘要】 奇异变形杆菌主要污染动物性食品, 特别是肉类, 因此应加大对动物性食品中奇异变形杆菌的监测力度, 保障消费者的食用安全。目前, 有关奇异变形杆菌检测的通常采用传统的菌分离、生化反应进行鉴定, 操作复杂, 耗时较长, 不适应日常食品卫生检测监督工作的需要。近年来发展起来的分子生物学方法如PCR、多重PCR 、实时荧光PCR等广泛应用于食源性致病菌的检测,克服了传统检测方法的不足。该方法用于奇异变形杆菌检测具有特异性强、敏感、快速的特点, 适用于动物性食品中奇异变形杆菌检测的快速筛选检验。 PCR检测方法步骤 1， 细菌分离与培养 2， 变形杆菌计数􀀁 3， 细菌DNA 的制备􀀁 4， PCR引物 5， PCR反应体系和条件 6， PCR特异性试验 7， PCR方法检测敏感度试验 8， 扩增产物的检测 9， 结果与分析 【使用方向】 天津生物芯片提供的奇异变形杆菌PCR检测试剂盒使用奇异变形杆菌的特异引物，可与样本中的奇异变形杆菌基因组的相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对奇异变形杆菌快速检测的目的。试剂盒具有特异性强的特点，可以将奇异变形杆菌从其它细菌中特异地区分出来。 用于食品、饮用水、临床样品以及环境样品中的奇异变形杆菌的检测。 【产品组成】 奇异变形杆菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒 组 份 规 格 数 量 核酸提取液 1ml/支 2支 奇异变形杆菌PCR反应液 500μl /支 1支 Taq酶 12μl /支 1支 奇异变形杆菌阳性对照品 100μl /支 1支 阴性对照品 100μl /支 1支 【储藏条件及有效期】 -20℃保存，避免反复冻融，有效期一年。 【样品处理】 （1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，去上清。 （2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，去上清。 （3）加入80μl核酸提取液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100℃水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。 （4）取中层上清液用于PCR检测。 【使用方法】 1. 试剂配制（试剂准备区） 从试剂盒中取出PCR反应液在室温融化，并充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm离心10s。设所需要的管数n（n=样本数+1管阳性对照品+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。计算所需要的n管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR反应管中，每管22μl。 PCR反应液 Taq酶 每个反应体系试剂用量 21.7μl 0.3μl 2. PCR扩增（扩增和产物分析区） 将样本、阴性对照品和阳性对照品使用前恢复至室温，2000rpm离心10s。向每个PCR反应管中加入3μl模版（样本、阴性对照品或阳性对照品），震荡混匀，于2000rpm离心10s。将PCR管放入PCR仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约需2小时 3. 结果判断（扩增和产物分析区） 从PCR管中取出2μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。在紫外灯下，阴性参照品没有任何条带，奇异变形杆菌阳性参照品具有大小为375bp的条带。当被检样品经电泳检测出现375bp的条带则判定奇异变形杆菌阳性，当未出现条带或所出现的条带大小与阳性参照品的条带大小不一致时均视为阴性结果。 【注意事项】 1. 本试剂盒不做临床诊断。 2. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理，试验人员必须进行专业培训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。 3. 样本准备和试剂准备阶段应使用生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器。 4. 对每次实验进行质量控制。 5. 试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融。 6. 实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。 7. 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。 第1 页