HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中有关物质
2. 3. 7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于
0,1,2,4,8,12 h时依法进样测定,氯己定峰面积的
RSD为1. 5%。结果表明,供试品溶液能在 12 h 内
保持稳定。
2. 4 样品的测定
取对照品溶液和供试品溶液各 20 μl,进样测
定,按外标法以峰面积计算含量,结果见表 1。
表 1 样品含量测定结果(%,w /v,n =3)
批号 含量
A126 0. 00234
A127 0. 00238
A128 0. 00238
3 讨论
文献报道中,多用三乙胺作为扫尾剂[3,4],本文
采用高氯...
2. 3. 7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于
0,1,2,4,8,12 h时依法进样测定,氯己定峰面积的
RSD为1. 5%。结果
明,供试品溶液能在 12 h 内
保持稳定。
2. 4 样品的测定
取对照品溶液和供试品溶液各 20 μl,进样测
定,按外标法以峰面积计算含量,结果见表 1。
表 1 样品含量测定结果(%,w /v,n =3)
批号 含量
A126 0. 00234
A127 0. 00238
A128 0. 00238
3 讨论
文献报道中,多用三乙胺作为扫尾剂[3,4],本文
采用高氯酸钠改善峰形,并用乙腈作为有机相,色谱
峰对称性更好,柱效更高。
方法学考察结果表明,本文所建立的方法操作
简便、结果准确,可用于玻璃酸钠滴眼液中葡萄糖酸
氯己定的定量测定,从而确保药品的安全性。
参 考 文 献
1 梁光江,王延东,叶成添,等. 滴眼液中几种常用抑菌剂的兔眼刺
激性实验[J]. 中国药房,2010,21(21) :1964-1966
2 中国药典[S]. 2010 年版.二部.附录 215
3 会书钧. 高效液相法测定复方樟脑乳膏中葡萄糖酸氯己定含量
[J]. 中国医药导报,2008,5(28) :29-30
4 张晓栋,丁建. RP-HPLC法测定创口贴吸水垫中葡萄糖酸氯己定
的含量[J]. 海峡药学,2009,21(12) :75-76
(2012-03-04 收稿 2012-05-03 修回)
通讯作者:胡兵 Tel:(027)82937069 E-mail:hbydycf@ yeah. net
HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中有关物质
胡兵 单晓芸 (武汉市食品药品检验所 武汉 430012 )
摘 要 目的:建立 HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中的有关物质。方法:色谱柱为 Venusil MP-C18色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm,5 μm) ,流动相:磷酸酸盐缓冲液(0. 05 mol·L -1磷酸二氢钠,每 1 000 ml加0. 5 ml三乙胺,以磷酸调节 pH至3. 0)-乙
腈 (85∶ 15) ;
波长 295 nm;流速1. 0 ml·min -1,柱温为 25℃。结果:马来酸噻吗洛尔与其降解产物分离良好,其最低检出
限2. 0 ng。结论:所建立的方法稳定性可靠、灵敏、结果准确,可用于马来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质检查。
关键词 HPLC法;马来酸噻吗洛尔滴眼液;有关物质
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2012)08-1138-03
Determination of Related Substances in Timolol Maleate Eye Drops by HPLC
Hu Bing,Shan Xiaoyun(Wuhan Institute for Food and Drug Control,Wuhan 430012,China)
ABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of the related substances in timolol maleate eye drops.
Method:A Venusil MP-C18 column(250 mm ×4. 6 mm,5 μm)was used with phosphate buffer solution(0. 05 mol·L
-1 NaH2PO4,
adding 0. 5 ml triethylamine per 1 000 ml,adjusting pH to 3. 0 with phosphoric acid)-acetonitrile (85∶ 15)as the mobile phase,the
flow rate was 1. 0 ml·min -1,the detection wavelength was 210 nm,and the column temperature was 25℃ . Result:The LOD of the
impurities was 2. 0 ng. Conclusion:The method is reliable,stability and sensitivity,and can be used in the quality control of timolol
maleate eye drops.
KEY WORDS HPLC;Timolol maleate eye drops;Related substances
马来酸噻吗洛尔(timolol maleate)是一种非选
择性 β -受体阻断药,具有较好的降眼压作用,不良
反应小,近年来被广泛应用于开角型、闭角型青光眼
以及继发性青光眼和其他高眼压症的临床治疗。为
了控制药品质量,确保临床用药安全有效,本文参照
已发表文献[1],建立了 HPLC法,可用于测定马来酸
噻吗洛尔滴眼液的有关物质。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:安捷伦 HP1100。试剂:磷酸
二氢钠为分析纯,乙腈为色谱纯,水为纯化水。马来
酸噻吗洛尔滴眼液由武汉市远大天天明制药有限公
司提供(批号:111201、111102)。《欧洲药典》系统
适用性对照品,购自百灵威科技有限公司,批号:
1. 0[2]。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Venusil MP-C18 色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm,5 μm) ,流动相:磷酸盐缓冲液(0. 05 mol·
8311
www. zgys. org 研究报告
L -1磷酸二氢钠,每 1 000 ml 加0. 5 ml三乙胺,以磷
酸调节 pH 至3. 0)-乙腈 (85 ∶ 15) ,检测波长 295
nm,流速为1. 0 ml·min -1,柱温为 25℃。
2. 2 系统适用性试验
精密称取马来酸噻吗洛尔对照品约 25 mg,置
50 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为对照品
储备液。量取4. 0 ml,置 10 ml 量瓶中,加 10 mol·
L -1氢氧化钠溶液1. 0 ml,在 105℃加热 30 min,放
冷,加 1 mol·L -1盐酸1. 0 ml,用水稀释至刻度,摇
匀,作为系统适用性试验溶液。量取 20 μl,按上述
色谱条件进样,马来酸噻吗洛尔峰与相邻峰的分离
度符合要求,各杂质峰之间的分离度符合要求。经
与《欧洲药典》系统适用性试验对照品比较,并用
LC-MS确定相对分子质量。确定了破坏杂质分别为
杂质 B、G、D。见图 1。
1.《欧洲药典》杂质 G(5. 955 min) 2.杂质 B(9. 3 min )
3.马来酸噻吗洛尔(18. 9 min) 4.杂质 D(20. 99 min)
图 1 系统适用性试验色谱图
2. 3 专属性试验
2. 3. 1 未破坏样品 取马来酸噻吗洛尔原料,加水
制成每 1 ml中约含0. 5 mg的溶液,作为储备液。量
取 4 ml,置 10 ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,量
取 20 μl,按上述色谱条件进样。
2. 3. 2 酸破坏 量取储备液 4 ml,置 10 ml 量瓶
中,加盐酸0. 2 ml,放置 2 h,加入 50%氢氧化钠溶液
0. 2 ml中和,用水稀释至刻度,摇匀,量取 20 μl,按
上述色谱条件进样。
2. 3. 3 碱破坏 量取储备液 4 ml,置 10 ml 量瓶
中,加 50%氢氧化钠溶液0. 2 ml,放置 3 h,加入盐酸
0. 2 ml中和,用水稀释至刻度,摇匀,量取 20 μl,按
上述色谱条件进样。
2. 3. 4 氧化破坏 量取储备液 4 ml,置 10 ml量瓶
中,加双氧水 1 ml,放置 1 h,用水稀释至刻度,摇匀,
量取 20 μl,按上述色谱条件进样。
2. 3. 5 高温破坏 量取储备液 4 ml,置 10 ml量瓶
中,水浴加热 2 h,放冷,用水稀释至刻度,摇匀,量取
10 μl,按上述色谱条件进样。
2. 3. 6 光照破坏 量取储备液 4 ml,置 10 ml量瓶
中,用水稀释至刻度,摇匀,在日光下照射 3 h,量取
20 μl,按上述色谱条件进样。
2. 3. 7 空白辅料 取空白辅料,进样,未见有明显
干扰。
由图 2 可见,与未经破坏的样品色谱图比较,在
酸、碱、高热及氧化条件下杂质峰的个数、杂质峰的
总面积都有明显增加,但是降解产物与主峰在选定
的色谱条件下都得到较好分离,经二级管检测器检
测,主峰的纯度较高,说明该色谱条件能满足有关物
质检查的需要。
A.酸破坏 B.碱破坏 C.氧化破坏 D.加热破坏
E.未破坏样品
图 2 专属性试验 HPLC色谱图
2. 4 最低检测限试验
取对照品贮备液,以不同比例稀释后测定(以
信号为噪声的 2 ~ 4 倍为最低检出) ,得马来酸噻吗
洛尔最低检测限为2. 0 ng。
2. 5 耐用性试验
采用 phenomenxe luna C18色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm,5 μm)进行专属性试验,主峰与其他破坏产
物均能达到良好分离,见图 3。
1.《欧洲药典》杂质 G(4. 65 min) 2.杂质 B(6. 77 min)
3.马来酸噻吗洛尔(12. 86 min) 4.杂质 D(14. 94 min)
图 3 耐用性色谱图
2. 6 线性关系考察
精密称取马来酸噻吗洛尔对照品适量,加水溶
9311
中国药师 2012 年第 15 卷第 8 期 China Pharmacist 2012,Vol. 15 No. 8
解并稀释制成每 1 ml 中含 100 μg 的溶液,分别精
密量取 1,2,5,10,20 ml,置 100 ml 量瓶中,用水稀
释至刻度,摇匀,照“2. 1”项下的色谱条件测定,以
浓度(C)为横坐标,以峰面积(A)为纵坐标进行线
性回归,得回归方程为 A = 1. 1 × 104C + 94。
2. 7 精密度试验
取线性项下的 2 μg·ml -1的溶液,连续进样 6
次,峰面积的 RSD = 0. 54%。
2. 8 重复性试验
取同一批供试品 6 份,照“2. 9”项下方法测定,
结果每批只检出一个杂质,分别为0. 03%,0. 04%,
0. 03%,0. 04%,0. 04%,0. 03%。
2. 9 有关物质检查
精密称取马来酸噻吗洛尔滴眼液适量,用水稀
释制成每 1 ml 中含0. 2 mg的溶液,作为供试品溶
液。精密量取适量,用水稀释制成每 1 ml中含 2 μg
表 1 马来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质测定结果(n =3)
批号
杂 质(%)
杂质 B 杂质 D 杂质 G 未知杂质 总杂质
111102 未检出 未检出 未检出 0. 02 0. 02
111201 未检出 未检出 未检出 0. 03 0. 03
的溶液,作为对照溶液。分别精密量取对照溶液和
供试品溶液各 20 μl,照上述液相色谱条件测定。3
批样品的测定结果见表 1。
3 讨论
3. 1 流动相的选择
采用乙腈-水系统,对乙腈和水的比例进行了优
化,使碱加热破坏产物与主峰达到完全分离,加入三
乙胺防止拖尾,通过破坏试验进行验证,此条件下马
来酸噻吗洛尔出峰时间适中,马来酸噻吗洛尔峰与
各杂质峰能够有效分离;结果表明此方法可用于马
来酸噻吗洛尔滴眼液有关物质检查。
3. 2 有关物质测定波长的选择
经二级管阵列检测器检测,主峰和破坏产物的
最大吸收波长在 295 nm。故选用 295 nm 波长进行
检查。
参 考 文 献
1 税庆华,李志明,于茂盛. HPLC法测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中
的有关物质[J].食品与药品,2005,7(12A) :41-42
2 EP[S]. 7. 0 ed. 2010. vol 2. 3095
(2012-04-08 收稿 2012-06-01 修回)
通讯作者:任海祥 Tel:(025)80860166 E-mail:suhuash@ sina. com. cn
HPLC法测定益利康软胶囊中红景天苷的含量
王曙东 苏华 陈翠 任海祥 (南京军区总医院制剂科 南京 210002)
摘 要 目的:建立高效液相色谱法方法测定益利康软胶囊中红景天苷的含量。方法:采用 Lichrospher-C18色谱柱(150 mm
×4. 6 mm,5 μm) ,甲醇-水(12∶ 88)为流动相,检测波长:275 nm,柱温为室温。结果:红景天苷在0. 030 1 ~ 0. 602 0 mg·ml -1
的范围内呈良好的线性关系,r = 1. 000 0,平均回收率为99. 45%,RSD为0. 65%(n = 6)。结论:本法简便、准确,可作为该制剂
的定量分析方法。
关键词 红景天苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R927. 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2012)08-1140-03
Determination of Salidroside in Yilikang Soft Capsules by HPLC
Wang Shudong,Su Hua,Chen Cui,Ren Haixiang(Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military
Command,Nanjing 210002,China)
ABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of salidroside in Yilikang soft capsules. Method:Sali-
droside was determined by HPLC with a Lichrospher-C18 column(150 mm ×4. 6 mm,5 μm)as the chromatographic column and metha-
nol-water (12∶ 88)as the mobile phase . The flow rate was 1. 0 ml·min -1 and the detection wavelength was set at 275 nm. Result:
The linearity of the salidroside concentration and the peak area were both promising within the range of 0. 030 1-0. 602 0 mg·ml -1(r
= 1. 000 0). The average recovery was 99. 45% with RSD of 0. 65%(n = 6). Conclusion:The method is simple and accurate,and
can be used in the analysis of salidroside in Yilikang soft capsules.
KEY WORDS Salidroside;HPLC;Determination
益利康软胶囊主要成分为红景天、刺五加、人 参、黄芪、灵芝孢子,具有益气固本、补脾益肺、镇痛
0411
www. zgys. org 研究报告
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