维生素B1片的质量研究方案

维生素B1片的质量研究 一、概述 　维生素B1(硫胺素),化学名称为氯化42甲基232[(22甲基242氨基252嘧啶基甲基]252(22羟基乙基)噻唑钅翁盐酸盐,具有维持正常糖代谢及神经消化系统功能,用于防治缺乏维生素B1 所致的脚气病,也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗。维生素B1在体内经焦磷酸激酶作用生成的焦磷酸硫胺素(TPP)是多种酶的辅酶,在体内糖代谢中发挥极其重要的作用。 二、维生素B1及制剂的质量研究标准 1.维生素B1的性质： 维生素B1又称硫胺素或抗神经炎素。由嘧啶环和噻唑环结合而成的一种B族维生素。为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦，有引湿性，露置在空气中，易吸收水分。 2、制备工艺对产品质量的影响 维生素B1 在空气中就很不稳定容易吸收空气中的水分, 还可以在空气中与铁、铜等金属反应而失去治疗效果, 3、药品的稳定性： 在碱性溶液中容易分解变质。酸碱度在3.5时可耐100℃高温，酸碱大于5时易失效。遇光和热效价下降。故应置于遮光，凉处保存，不宜久贮。在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏。 4、维生素B1片剂的质量标准： 维生素Ｂ1片 维生素Ｂ1片 拼音名：Weishengsu Ｂ1 Pian 英文名：Vitamin Ｂ1 Tablets 书页号：2000年版二部－785 本品含维生素Ｂ1(C12H17ClN4OS.HCl)应为标示量的90.0％～110.0 ％。 【性状】 本品为白色片。 【鉴别】 取本品的细粉适量，加水搅拌，滤过，滤液蒸干后，照维生素Ｂ1项下的鉴别试验，显相同的反应。 【检查】 应符合片剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ A）。 【含量测定】 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素Ｂ1 25mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液(9→1000) 约70ml，振摇15分钟使维生素Ｂ1溶解，加盐酸溶液(9→1000) 稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(9→1000) 稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录Ⅳ A），在246nm 的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（Ｅ1% 1cm）为421计算，即得。 【类别】 同维生素Ｂ1。 【规格】 (1) 5mg (2) 10mg 【贮藏】 遮光，密封保存。 三、维生素B1的质量研究方法 1、维生素B1的鉴别 标准规定：取本品细粉适量（约相当于维生素B1-20mg）加氢氧化钠试液10ml使维生素B1溶解后，过滤，取滤液2.5ml，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟后，放置分层，上层醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光消失，再加碱使成碱性，荧光又显出。 实践证明，该品种细粉中加入氢氧化钠试液后经搅拌或超声处理后，随厂家辅料的差异形成粘度不等的胶状溶液，过滤速度极慢，有的甚至滤过12小时以上也不足标准规定2.5ml滤液，真空抽滤亦有一定困难，影响下面的分析操作。取本品细粉氢氧化钠试液研磨均匀，取溶液2.5ml作为滤液直接操作，获得同样效果。 2、维生素B1的检查 酸度 取本品0.50g ，加水20ml溶解后，依法测定，pH值应为2.8 ～3.3 。 溶液的澄清度与颜色 取本品1.0g，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显色， 与对照液（取比色用重铬酸钾液0.1ml ，加水适量使成10ml）比较，不得更深。 硫酸盐 取本品2.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液2.0ml 制成的对照液比较，不得更浓(0.01％) 。 硝酸盐 取本品1.0g，加水溶解使成100ml ，取1.0ml ，加水4.0ml 与10％氯化钠 溶液0.5ml ，摇匀，精密加入稀靛胭脂试液［取靛胭脂试液，加等量的水稀释。临用前， 量取本液1.0ml ，用水稀释至50ml，照分光光度法，在610nm 的波长处测 定，吸收度应为0.3 ～0.4］1ml ，摇匀，沿管壁缓缓加硫酸5.0ml，立即缓缓振摇1分 钟，放置10分钟，与标准硝酸钾溶液（精密称取在105 ℃干燥至恒重的硝酸钾81.5mg， 置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml ，置100ml量瓶中，加水 稀释至刻度，摇匀。每1ml 相当于50μg的NO3）0.50ml用同一方法制成的对照液比较， 不得更浅（0.25％）。 干燥失重 取本品，在105 ℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0 ％。炽灼残渣 不得过0.1％。 铁盐取本品1.0g，加水25ml溶解后，依法检查，与标准铁溶液 2.0ml制成的对照液比较，不得更深(0.002％) 。 重金属 取本品1.0g，加水25ml溶解后，依法检查，含重金属不得过百万分之十。 总氯量 取本品约0.2g，精密称定，加水20ml溶解后，加稀醋酸2ml 与溴酚蓝指示液8 ～10滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定至显蓝紫色。每1ml 硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于3.54mg的氯(Cl)。按干燥品计算，含总氯量应为20.6％～21.2％。 3、其他测定维生素B1片含量的方法： 1 高效液相色谱法 　 高效液相色谱法是以经典液相色谱法为基础,引入了气相色谱的理论与实验方法,发展而成的分离分析方法。具有适用范围广,分离性能好,分析速度快等优点。采用反相离子对HPLC 法测定脑脊液中维生素B1 的药物浓度,最小检测量可达10 - 7～10 - 8 g。其色谱条件为: 检测波长270 nm; 流动相: 甲醇250 mL 与0.000 5 mol/ L 己烷磺酸钠(内含l %冰醋酸) 750mL 混合,流速1 mL/ min。进样5 次,测得回收率为97.0 %。本法灵敏度高,脑脊液中的还原糖、氯化物和其它无机离子、脂溶性物质等均不干扰测定,是一种较理想的测定方法。采用快速高效液相色谱分析测定食品中维生素B1 的含量。其色谱条件为:流动相:50 %甲醇/ 磷酸盐缓冲液(pH = 710) ; 流速1 mL/min ;M420 荧光检测器(360/ 425 nm) ,灵敏度4X;纸速0.5 cm/ min ;外标法定量分析。最小检出量为0.1 ng ,回收率为94.4 ±1.27 %。该方法简化了样品前处理,大大缩短了分析时间,且Sep2pak C18小柱可以反复使用10 次左右,成本可降低,因此是一个值得在实验室推广的快速分析方法。 2 　荧光法 荧光分析法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和物质含量测定的方法,其最主要的优点是测定灵敏度高和选择性好。 2.1 　时间扫描动态荧光法　利用自制的简单装置和k3 Fe (CN) 6 在碱性条件下氧化维生素B1 的反应,在激发波长372 nm ,发射波长460 nm处,监视反应的进行,记录荧光强度与时间关系曲线,测得最大荧光强度, 方法线性范围为5.40 ～4.32 ×103 μg/ L , 相关系数为0.999 8 , 检出限为1.44μg/ L ,相对标准偏差为2.1 %( n = 12) ,回收率在95 %～104 %之间。该方法简化了操作手续,缩短了分析时间,适用于药物制剂中维生素B1 的测定。 2.2 　光化学荧光分析法　报道了维生素B1 和维生素B6 的光化学动力学(波长选择和时间选择) 荧光分析法联合测定的原理和方法。该法的建立是基于B1 的光化学荧光衍生化反应和B6 的光分解反应。B1 的浓度在0～1.4μg/ mL 呈良好的线性关系, r = 01999 ,检出限为0160 ng/ mL ,相对标准偏差为0.99 % ( n = 8) 。该法可以克服K3Fe(CN) 6 对B6 荧光的猝灭而对B1 的测定产生的干扰,但操作繁琐,用于混合物的测定效果良好。 2.3 　光化学反应———FIA 荧光分析法　提出并建立了一种用“光子”作试剂代替各种氧化剂的维生素B1 光化学反应—FIA 荧光分析法。对反应体系的介质,注样速度,注样管长度以及注样方式进行了实验和讨论。维生素B1 浓度在0～2.0μg/ mL 范围内呈良好的线性关系, r = 0.999 ,检出限为2.0 ng/ mL (S/ N = 3) 。对9 份含维生素B1 为0.10μg/ mL 的试液进行平行测定,相对标准偏差为2.7 %。对维生素B1 片剂分析,测得维生素B1 含量为标示量的94 % ,标准加入回收率为97 %～100 %。对维生素B1 注射液分析,测得维生素B1 含量为标示量的100 % ,标准加入回收率为95 %～100 %。在尿液基质中做标准加入回收实验,回收率为80 %～83 %。基于维生素B1 在碱性介质中发生光化学反应生成强荧光物质的光化学应—FIA 荧光分析法避免了K3Fe (CN) 6 法难以克服的氧化剂用量不易控制,过量的K3Fe (CN) 6 对产物荧光信号有猝灭及HgCl2 法和BrCN 法所用试剂毒性较大等缺点。该法简单、快速、灵敏度高。 4 　光度法 探讨了反应介质,显色时间、浓度与吸光度的关系,研究出了一重氮苯磺酸反应光度法快速测定维生素B1 的方法。以495 nm 为工作波长,最低检出量为0.025 μg/ mL , 加入回收率为98.6 %～102.5 % ,相对标准偏差为2.5 %。该法简便易行,精密度高,用于维生素B1 的快速测定。 5 　间接原子吸收法 在强电解质溶液中,Ag + 与维生素B1 中Cl - 生成AgCl 沉淀,离心沉降,不经过滤分离,直接测其清液中剩余Ag + 含量,间接计算出维生素B1 含量的新方法。具有线性范围宽(500～4 000μg/ 5mL) ,重现性好,快速省时,所用试剂少等优点,利用本法测定了片剂和针剂中维生素B1 含量。