灵长类实验动物质量检测平台及服务体系建设示范研究

收稿日期:2011 － 09 － 13;修回日期:2011 － 09 － 26 基金项目:广西科技厅基础条件平台项目(桂科能 0718009 － 2A) 作者简介:盘宝进(1966 －)，男，副研究员，本科，pan2005@ china． com． cn． 灵长类实验动物质量检测平台及服务体系 建设示范研究 盘宝进1，陈盛文2，刘军义1，杨 辉2，罗兆飞1，吕春秋1，汪文龙1，韦 刚2 (1．广西省出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，南宁 530022;2．广西省科技厅，南宁 530012) 中图分类号:S865． 1 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2012)04 － 0152 － 03 关键词:灵长类实验动物;质量检测平台;服务体系 摘 要:根据广西实验动物资源和发展现状，开展了“广西实验动物质量检测平台及服务体系建设示 范研究”项目，结果成功建立了广西灵长类实验动物质量检测平台即检测实验室，创建了国家级灵长 类实验动物检测重点实验室，有细菌学、病毒学、寄生虫学、真菌学、饲料营养学、实验动物和动物试验 环境设施 6 大类，80 多个实验动物检测项目已通过国家资质认定计量认证和中国合格评定国家认可 委员会(CNAS)实验室能力认可。具备灵长类实验动物领域法定检测技术实力，培养了一支高素质 的涵盖实验动物检测各个领域、熟悉相关检验业务及质量管理体系文件的专业技术人才队伍，开展了 广西灵长类实验动物质量检测检验服务和实验动物、动物养殖从业人员技术培训，加强了国内外具有 领先管理与技术机构的交流合作，提高了质量检测机构、从业人员的管理和技术水平。 目前，生命科学、生物技术领域的研究与开发十 分活跃，人类已经步入生命科学的新时代。实验动物 是医学、生命科学研究的基础和重要支撑条件，医学、 化工、农业、轻工、环保、航天、商检、军工等许多领域的 科学研究和生产应用也都需要实验动物。实验动物已 经越来越受到各国政府和科技界的普遍重视与关注。 随着生命科学研究的发展，对实验动物品质、品种的要 求越来越高。借助实验动物探索生命的起源，揭示遗 传的奥秘，研究各种疾病的机理，攻克各种疑难疾病， 已成为当代生命科学研究的重要手段之一。 广西以食蟹猴为代表的灵长类实验动物资源独 具特色与优势，食蟹猴实验动物产业发展已形成规 模，有实验猴养殖场十多家，存栏量达 15 万只，占全 国总数的 50%以上，年销售量达 1． 5 万只以上，年出 口创汇达 2 700 万美元，存栏量和出口量均居全国第 一。灵长类实验动物(实验猴)作为人的替身，是高 等实验动物，承担着安全评价和效果试验，其质量的 好坏直接影响科研、生产和检测工作的成败，对试验 结果的可重复性、可信性和科学性起决定性作用。依 据《实验动物管理条例》和《实验动物许可证管理办 法(试行)》，为了提高灵长类实验动物质量，建立灵 长类实验动物质量检测服务平台即检测实验室十分 必要。 由广西省出入境检验检疫局检验检疫技术中心 承担的“广西灵长类实验动物质量检测平台及服务 体系建设示范研究”课，在广西省科技厅和国家质 量检验总局的大力支持和推动下，建立了广西灵长类 实验动物质量检测实验室及国家级灵长类实验动物 检测重点实验室。 1 广西灵长类实验动物质量检测平台及服务体系 建设 1． 1 实验室设备与设施建设 依据国家(GB /T 15481《校准和检验实验室 能力的通用要求》)的要求，在广西省出入境检验检 疫局检验检疫技术中心建立灵长类实验动物质量检 测实验室，开展病毒学、细菌学、寄生虫学、分子生物 学、饲料营养质量、实验动物和动物实验环境质量等 检测。自项目开展以来，重新配备了设备和设施等， 提高了实验室整体的硬件实力。 1． 1． 1 病毒学检测 全自动病毒核酸提取仪、全自 动酶标仪、荧光显微镜、CO2 培养箱、细胞破碎仪、贝 克曼超速离心机等。 1． 1． 2 细菌学检测 全自动病毒酸提取仪、微生物 全自动生化鉴定系统、微生物半自动生化鉴定系统、 普通恒温培养箱、低温恒温培养箱、程序降温仪等。 1． 1． 3 寄生虫学检测 普通光学显微镜、体视显微 镜等。 251 Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine № 4 2012 2012 年 4 月(上) 1． 1． 4 分子生物学检测 荧光定量 PCR仪、高效变 性液相色谱仪、等温扩增实时浊度仪、柱层析蛋白质 纯化系统、PCR 扩增仪、凝胶成像分析系统、电泳 仪等。 1． 1． 5 饲料营养质量与卫生项目、环境质量项目的 检测 液相质谱联用仪、气相质谱仪、液相质谱仪、原 子吸收分析仪、氨基酸分析仪、ICP 检测仪、光照度 计、温湿度计、风速仪、声级计、尖埃粒子计数仪、大气 采样仪等。 1． 2 实验室质量体系建设 实验室按照 ISO /IEC 17025:2005 检测和校准实 验室能力认可的要求，制定了保证检验项目全程 质量控制的质量管理体系文件、程序文件和操作指导 书等。技术人员要掌握这些质量管理体系文件的相 关内容，并在试验过程中严格执行这些文件的规定， 保证实验室检测服务体系的有效运行，为保证实验室 检测质量提供保障。实验室获得国家资质认定计量 认证，获得国家实验室能力认可。 1． 3 人员配置 实验室业务技术人员结构配置合理，设置 2 名相 关专业领域的技术领军人，拥有熟悉相关检验业务及 质量管理体系文件的业务人员 17 人。微生物学检测 人员 8 名，其中高级工程师 3 人，博士 2 人，硕士 3 人;化学仪器分析检测人员 9 名，其中高级工程师 2 人，博士 3 人，硕士 4 人。 1． 4 实验室检测技术能力建设 经过 3 年的不懈努力，几乎开发了灵长类实验动 物质量检测的全部项目，包括细菌学、病毒学、寄生虫 学、真菌学、饲料营养学、实验动物和动物试验环境设 施 6 大类，80 多个实验动物检测项目。这些项目通 过了国家计量认证和中国合格评定国家认可委员会 (CNAS)的国家实验室能力认可。 1． 5 实验室检测人才队伍建设 1． 5． 1 实验室内部培训 建立了质量检测技术人员 培训，实行实验室技术人员内部定期培训，聘请 行业专家专题培训，参加广西省科技厅实验动物管理 委员会以及检验检疫系统等有关管理部门的定期培 训等。 1． 5． 2 外派人员培训 定期派人员到本领域技术先 进的国内外检测机构、实验室进行考察、参观和技术 培训，提高实验动物质量检测技术人员素质。 1． 5． 3 培养和引进人才 引进预防兽医学和化学分 析博士各 1 名，培养预防兽医学硕士 1 名，增加了实 验室检测人员实力，优化了原有技术人才的结构与 配置。 1． 6 实验室质量检测服务范围及作用 开展广西灵长类实验动物生产和使用单位实验 动物病原微生物、寄生虫、实验动物与动物试验设施 环境等质量相关指标的检测，提交检验报告，供相关 单位和行政主管部门采用，为社会提供信息咨询和技 术服务。提高广西灵长类实验动物质量，促进广西灵 长类实验动物向标准化、规范化发展，促进灵长类实 验动物行业发展。 2 广西灵长类实验动物质量检测平台的服务功能 广西省科技主管部门组织专家评审，通过并授权 广西省出入境检验检疫局检验检疫技术中心作为广 西灵长类实验动物质量检测指定实验室，已全面开展 广西灵长类实验动物生产单位和使用单位的质量检 测服务，内容如下: 1)接受广西省科技管理部门的委托，为灵长类 实验动物生产及使用单位办理申请和使用许可证业 务时提供办证检验、换证检验和年度检验服务。 2)接受广西灵长类实验动物生产及使用单位的 委托检验。 3)为周边省区灵长类实验动物质量检测提供 服务。 4)开展广西灵长类实验动物技术培训和信息咨 询服务。 5)承担科研、标准制订任务，开展国内外学术交 流活动。 6)承担广西省科技管理部门的其他任务。 3 国家级灵长类实验动物检测重点实验室建设 通过建立科研项目，在广西省科技管理部门的大 力支持和推动下，特别是在实验室建设、科研和检测 技术能力方面得到显著提升，国家质量检验总局于 2008 年批准广西省出入境检验检疫局检验检疫技术 中心建设国家级灵长类实验动物检测重点实验室。 在以下几方面取得了积极的进展。 3． 1 实验室设施进一步扩大 新建设的实验中心大楼配置了 2 000 m2 的配套 实验室，设施和环境能满足灵长类实验动物及相关领 域项目检测要求。 3． 2 实验室设备加强 2008 年以来国家质量检验总局投入了 2 000 多 万元用于购买相关的仪器设备，提高了实验室的整体 硬件实力。 3． 3 建成配套的生物安全检测实验室 在国家质量检验总局和广西省地方政府的大力 支持下，建成了与重点实验室和质量检测实验室相配 套的生物安全二级检测实验室，并且已通过 CNAS 的 评审。在国内，这是第 4 家通过国家评审的生物安全 二级实验室，保证了在生物安全二级检测实验室进行 项目检测的开展。 3． 4 提升了实验室科研技术实力 351《黑龙江畜牧兽医》科技版  近几年，由实验室主持或参与的国家和省部级科 研及标准制订项目有十多项，主要有“实验猴沙门 菌、志贺菌二重 PCR 检测的建立与应用研究”、 “广西实验动物质量检测平台及服务体系建设示范 研究”、“食蟹猴检测技术服务平台建设”等，通过项 目的带动，提升了实验室整体的科研和技术实力。 3． 5 加强了与国内外相关领域的技术交流与合作 实验室相关人员赴日本对实验猴管理和检验检 疫情况成功地进行了考察和学习交流;与日本农林水 产省、厚生劳动省代表团、法国食品安全局、越南兽医 局进行了技术合作与交流;与美国 VRL 实验室建立 技术合作机制，引进研发国际先进水平的快速检测技 术并推广应用;参加灵长类实验动物与药物研发新进 展国际论坛等。 (015) 收稿日期:2011 － 09 － 01;修回日期:2012 － 02 － 09 基金项目:河北大学青年基金项目 作者简介:张书玲(1975 －)，女，讲师，硕士，zslhealth@ 163． com． 咖啡因对果蝇生物学效应的研究 张书玲，董丽君，刘 燕 (河北大学 生命科学学院，河北 保定 071002) 中图分类号:S865． 9 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2012)04 － 0154 － 03 关键词:咖啡因;果蝇;生存试验;生育力;体重 摘 要:为了探讨咖啡因对果蝇寿命、生育力和体重的影响，试验采用向培养基中添加咖啡因饲喂果 蝇的方法对其进行研究。结果表明:在培养基中添加咖啡因能显著缩短果蝇平均寿命，与对照组相 比，0． 5，1． 0，3． 0 g /L浓度组雌果蝇平均寿命分别缩短了 18． 20%、51． 35%、73． 57%，雄果蝇平均寿 命分别缩短了 16． 30%、58． 96%、75． 54%，差异均极显著(P ＜ 0． 01) ;饲喂咖啡因后 F1 和 F2 代果蝇 数量与对照组相比，分别下降了 33． 03%、71． 04%、88． 69%和 49． 05%、70． 95%、90． 71%，差异均极 显著(P ＜ 0． 01) ;试验组果蝇的平均体重均呈先上升后下降的趋势，但在饲喂咖啡因后，各试验组果 蝇的平均体重比对照组下降快。 咖啡因是常用的饮品和食品添加剂，适度食用咖 啡因可以消除疲惫、兴奋神经以及缓解肌肉酸痛［1］， 尤其是上班族，经常饮用咖啡(即摄入大量的咖啡 因) ，可以提神和提高工作效率。但有研究证明，过 量摄入咖啡因会引起一系列不良反应。例如:咖啡因 可以诱使妇女乳腺癌的发生;另外，咖啡因影响人体 内钙离子的吸收与平衡，常见的骨质疏松也与咖啡因 的大量摄入有着不可分割的关系;摄入大量咖啡因同 样影响心血管系统及导致流产和新生儿体重过轻、下 肢畸形等不良反应［2 － 3］。在咖啡因生物学效应试验 中，常用小鼠等作为研究对象，以果蝇为试验动物则 未见报道。研究将不同剂量咖啡因加入果蝇的培养 基中，研究其对果蝇寿命、生殖能力及体重的影响，克 服以小鼠为研究对象带来的试验周期长、条件不易控 制的不足，以期建立一种快速评价食品添加剂安全性 的果蝇生物模型。 1 材料 咖啡因粉，购自保定市化学试剂有限公司。黑腹 果蝇，由河北大学生命科学学院遗传实验室提供。 2 方法 2． 1 种蝇培养 野生型黑腹果蝇培养于干燥、25 ℃的恒温培养 箱中，经扩大培养后待用。 2． 2 果蝇培养基制备 基本培养基的制备参照参考文献［4］的方法。 样品培养基制备:在基本培养基中分别加入咖啡因， 浓度为 0，0． 5，1． 0，3． 0 g /L，搅拌均匀后立即分装于 洁净的培养指管中，每管培养基厚度约为1． 0 cm。每 种培养基均分装 10 支指管(雌雄各半)。 2． 3 果蝇寿命试验 取 8 h内羽化未交配的成虫，用乙醚麻醉，分开 雌雄果蝇并随机分为对照组和 3 个剂量组，每组雌雄 果蝇各 100 只，在温度为 25 ℃、相对湿度为 60%的 条件下饲养。每天定时统计果蝇的存活数和死亡数， 每 4 d 更换 1 次培养基，至果蝇全部死亡为止。试验 结束后，分别计算雌雄果蝇平均寿命、最长平均寿命 (最长 10 只的平均寿命)、最短平均寿命(最短 10 只 的平均寿命)和半数死亡时间。 2． 4 果蝇生育力试验 451 Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine № 4 2012