HPLC测定熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸的含量

2000年3月 第22卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine Mar．，2000 V01．22No．3 3小结与讨论 采用薄层层析方法鉴别了甘芍注射液的组成药 味一甘草和白芍，并建立了芍药甙和甘草酸铵的 HPLC测定法，具有简便、准确、灵敏等特点。除用 于建立甘芍注射液成品质量外，还用于甘芍注 射液的制备工艺筛选，稳定性试验以及对原料药材、 半成品的质量控制。在甘芍注射液研制过程中，凡 是有需要测定芍药甙和甘草酸铵含量时，均可采用 上述HPLC。这种测定方法的一致性，减少了误差， 简化了操作，有利于保证甘芍注射液的质量稳定。 参考文献： [1]蓝煜．高效液相色谱法测定独活寄生丸中芍药甙和甘草酸的 含量[J]．中成药，1994，16(9)：12．13． [2J李峻、刘良初、毛丽珍．高效液相色谱法同时测定逍遥丸中的 芍药甙和甘草酸[J]．中成药，1994，16(8)：15．16． HPLC测定熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸的含量 王玉萍1， 张 良2， 尚 敏1 (1．黑宝药业集团，黑龙江牡丹江157011；2．牡丹江制药厂，黑龙江牡丹江157013) 摘要：目的：建立熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸的测定方法；方法：采用HPLC测定熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸的含 量，以中性氧化铝吸附黄芩甙去除干扰，达到了很好的分离效果。结果：平均回收率97．26％，RSD1．49％。结论：本方 法简便、快速、准确、重复性好。 关键词：牛磺熊去氧胆酸；HPLC；熊胆滴眼剂；吸附 中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1001—1528(2000)03—0199—02 DeterminationofTUDCAinBearGallEyeDropsbyHPLC WANGYu—pin91，ZHANGLiange，SHANGMinl (1，HeilongjiangHeiBaoMedicineGroup，Muda可iang157011，China；2．Muda巧iangPharmaceuticalFactory，Muda巧iang157013，China) Abstract：0bjective：TUDCAinBearGallEyeDrop．Methods：HPLCmethodwasdevelopedforthedetermi— nationofTUDCAinBearGallEyeDrops．NeuteralA1201wasusedtoabsorbbaicalininordertowipeoffviola— tionandobtaingoodseparationpurpose．Results：Theaveragerecoveryis97．26％andRSDis1．49％．Conclu- sion：Thismethodissimple，quick，accurateandwithgoodreproducibility Keywords：TUDCA：HPLC；BearGallEyeDrops；absorption 熊胆滴眼剂是以熊胆粉为主，配以抗菌谱较广 的黄芩甙，采用现代化制剂手段研制的中药滴眼剂； 主要用于急慢性结膜炎、外伤性角膜炎、睑缘炎、沙 眼、麦粒肿等。方中君药熊胆粉具有清热解毒、平肝 明目、抗菌消炎的功效。其主要有效成分为牛磺熊 去氧胆酸，故对其进行含量测定是质量控制的关键。 该制剂原含量测定方法为薄层扫描法，样品处理须 将结合牛磺熊去氧胆酸高温水解，比较繁杂。参照 卫生部药品标准第十一册熊胆粉项下含量测定方 法，用HPLC法对其进行定量研究⋯。因黄芩甙对 牛磺熊去氧胆酸测定干扰大，利用氧化铝对黄酮类 化合物吸附力强，难以洗脱的特点怛J，采用氧化铝 柱吸附黄芩甙等杂质，再用甲醇洗脱出牛磺熊去氧 胆酸。经反复实验，较好建立了牛磺熊去氧胆酸含 量测定的方法。 1 仪器与试剂 Et本岛津LC．4A高效液相色谱 仪；SP．100型检测器；CR一3A数字处理机。 牛磺熊去氧胆酸对照品 供含量测定用，由中 国药品生物制品检定所提供；熊胆滴眼剂由黑龙江 黑宝药业集团提供；甲醇为色谱级，中性氧化铝(层 收稿日期：1999—01—16 作者筒介：王玉萍(1969～)，女，执业药师，学士学位；从事中药技术开发。 199 万方数据 2000年3月 第22卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine Mar．，2000 V01．22No．3 析用)由天津市化学试剂三厂提供。 2 色谱条件【3J YWG—C18反相柱(10vm)，200× 4．6mm，流动相：甲醇一磷酸二氢钠溶液(0．03mol／ L)65：35；检测波长：210nm；流速：lml／min；理论塔 板数(n)按牛磺熊去氧胆酸计不低于2500。 3供试液的制备 精密量取熊胆滴眼剂5ml通过 中性氧化铝柱(粒度100目，69，干法装柱)，待溶液 全部渗入，再以60ml甲醇分别洗脱。洗脱液水浴蒸 干，用甲醇溶解定容至10ml量瓶中摇匀，过滤。收 集续滤液为供试品溶液。 4对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥 至恒重的牛磺熊去氧胆酸对照品适量，精密称定，加 甲醇溶解，并定量稀释至lm|含lmg的溶液，即得。 5标准曲线的制备 取牛磺熊去氧胆酸对照品加 甲醇制成lml含5mg的对照品溶液。精密吸取对照 品溶液1．0，2．0，3．0，4．0，5．0m1分别置于10ml量 瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。取10vl进样，按色 谱条件测定。以浓度为横坐标、积分值为纵坐标作 图，得一直线，回归方程为： Y=2865．166X+112．3，r=0．9993。 牛磺熊去氧胆酸在5—25vg之间成线性关系。 6 阴性试验取样品及不含熊胆粉的滴眼剂，制备 成供试液和阴性溶液。精密吸取上述2种溶液各 10vl，注入色谱仪中，记录色谱图。结果表明，阴性 溶液对牛磺熊去氧胆酸的测定无干扰。 7精密度试验 精密吸取lml含对照品牛磺熊去 氧胆酸1．28mg的溶液10vl，照含量测定方法，连续 进样6次。峰面积积分值分别为3790，3787，3793， 3788，3787，3784，平均值3788，RSD=0．089％。 8样品含■测定精密吸取供试品溶液10vl，按所 设HPLC条件分析，以外标法计算含量。测定结果 见表1。 表1 熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸含量(n=3} 200 图1对照品高效液相色谱图 图2样品高效液相色谱圈 图3阴性对照高效液相色谱圈 注：1牛磺熊去氧胆酸2牛磺鹅去氧胆酸 9回收率试验精密量取已知含量的样品(2．377 mg／m1)2．5rnl，6份。分别加入已配制好的对照品 溶液(2．981mg／m1)lml和2rnl，按上述方法测定计 算回收率。见表2。 表2 回收率试验 平均回收率：97．26％，RSD=1．49％。 10小结用HPLC测定熊胆滴眼剂中牛磺熊去 氧胆酸的含量，关键在于样品的处理。若处理不当， 则达不到理想分离效果。经实验用氧化铝吸附黄芩 甙去除干扰，再用甲醇洗脱分离效果较好。经测定， 50m!以上甲醇均可将牛磺熊去氧胆酸洗脱下来，本 方法稳定、准确、重复性好。回收率97．26％，RSD= 1．49％。表明该方法可行，能有效控制本制剂的含 量。 本文得到黑龙江中医大学田明老师的指导．在此表示感谢。 万方数据 2000年3月 第22卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedieine Mar．，2000 V01．22No．3 105． 参考文献2 [3]张启明，殷晓建，严光东，等．高效液相色谱法直接测定熊胆粉 [1]药品标准(第十一册)[s]．1997．43． 中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量[J]·药物分析杂 [21丁林生，等．中药化学，[M]．北京：中国中医药出版社，1997， 志，1993，13(5)：321-323． 汉丹肝乐胶囊的薄层色谱鉴别 冯艳明， 蒋新元， 叶丽梅， 张 昀 (贵阳制药厂，贵州贵阳550004) 摘要：目的：鉴别汉丹肝乐胶囊中的丹参、防己、赤芍和黄芪。方法：采用薄层色谱法，其中赤芍和黄芪为同时鉴别。结 果：建立了简便、灵敏、可靠的TLC法。结论：可用于本品质量控制。 关t词：汉丹肝乐胶囊；丹参；汉防己；赤芍；黄芪；TLC 中圈分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1001—1528(2000)03—0201—02 IdentificationofHandanganleCapsulesbyTLC FENGYan-ming，JIANGXin—yuan，YELi—mei，ZHANGYun (GuiyangPharmaceuticalFactory，Guiyang550004，China) Abstract：0bjective：ToidentifySalviaMihiorrhiza，StephaniaTetrandra，PaeoniaVeitchiiandAstragalus MembranaceusinHandanganleCapsules．Methods：UsingTLC．PaeoniaVeitchiiandAstragalusMembranaceus wereanalyzedsynchronously．Results：Thesipmle，sensitiveandreliableTLCidentificationmethodswereestab— lished．Conclusion：Themethodsmaybeusedforthequalitycontrolofthisdrug． Keywords：Handanganlecapsules；salviaMihiorrhiza；stephaniatetrandra；paeoniaveitchii；astragalusMem— branaceus；TLC 汉丹肝乐胶囊系治疗肝纤维化及肝硬化的中药 复方制剂，由丹参、汉防己、赤芍及黄芪等6味中药 组成，具有活血化瘀、舒肝理气等功能。因组分多， 采用不同的展开剂分别对方中各药味进行薄层色谱 鉴别，其中对赤芍和黄芪中的芍药苷和黄芪甲苷采 用同时鉴别，方法简便灵敏，重复性好。 1仪器与材料 汉丹肝乐胶囊及阴性样品为本厂制备。丹参酮 UA(TanshinoneIIA)、汉防己碱(Tetrandrine)、防己 诺林碱(Fangchinoline)、芍药苷(Paeoniflorin)及黄芪 甲苷(AstragalosideIV)由中国药品生物制品检定所 提供。CQ250超声波清洗器为上海超声波仪器厂 生产。薄层色谱用硅胶G为青岛海洋化工厂生产， 其余试剂均为分析纯。 2薄层色谱鉴别 2．1丹参取本品内容物约29，加乙醇15ml，超声 波处理30min。滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使 溶解，作为供试品液。另取缺丹参的阴性样品，同法 制成阴性对照品液。再取丹参酮ⅡA对照品加乙醇 制成1mg／1ml的溶液，作为对照品液。照《中国药 典》薄层色谱法试验⋯，吸取上述溶液各5td，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以苯一氯仿一丙酮(5：4 ：0．5)为展开剂，展开，取出，晾干。日光下检视，供 试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点，阴性对照液无此斑点，见图1。 收稿日期：1999—02—02 基金项目：贵州省“九五”攻关项目，黔科合计字(1996)1028号。 作者简介：冯艳明(1959～)，女，贵州毕节市人，工程师，学士学位；主要研究方向：天然药物开发，电话：0851—6823148。 201 万方数据 HPLC测定熊胆滴眼剂中牛磺熊去氧胆酸的含量 作者： 王玉萍， 张良， 尚敏， WANG Yu-ping， ZHANG Liang， SHANG Min 作者单位： 王玉萍,尚敏,WANG Yu-ping,SHANG Min(黑宝药业集团,黑龙江,牡丹江,157011)， 张良 ,ZHANG Liang(牡丹江制药厂,黑龙江,牡丹江,157013) 刊名： 中成药 英文刊名： CHINESE TRADITIONAL PATENT MEDICINE 年，卷(期)： 2000，22(3) 被引用次数： 0次 参考文献(3条) 1.药品标准 1997 2.丁林生 中药化学 1997 3.张启明.殷晓建.严光东 高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量 1993(05) 相似文献(10条) 1.期刊论文 廖丽云.徐小平.贺英菊.严绍华 HPLC测定熊胆贝母止咳胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量 -华西药学杂志 2004,19(2) 目的建立熊胆贝母止咳胶囊中牛磺熊去氧胆酸的测定方法.方法采用中性氧化铝吸附黄酮类的干扰杂质,色谱柱为ODS柱(4.6mm×150mm,5μm);甲醇- 0.03mol·L -1 磷酸二氢钠缓冲溶液(65∶35,pH4.41)为流动相;检测波长205nm.结果平均回收率99.62%,方法精密度RSD=0.25%(n=5);结论本法简便、准 确可靠、重复性好,能较好地将牛磺熊去氧胆酸从有黄酮类组分干扰的混合物中分离出来. 2.学位论文 郑兴 柱前衍生RP-HPLC分析胆酸类物质方法的研究 2006 本文以熊去氧胆酸(UDCA)、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)三种胆酸为研究对象。采用柱前衍生化反相高效液相色谱法，紫外(UV)检测 器。提高了胆酸色谱分析的测定波长、测定范围、选择性和灵敏度。建立了一种胆酸的柱前衍生化测定方法，同时进行了方法的验证。并用于实际样品 熊去氧胆酸片、熊胆粉和人工牛黄的分析。 第一章介绍了高效液相色谱衍生化方法的分类，胆酸类物质的测定方法，以及胆酸衍生化分析方法的意义、背景。 第二章以吡啶一苯甲酰氯为衍生化试剂，RP-HPLC，紫外检测器，测定波长235nm，研究了牛磺熊去氧胆酸的分析方法，提高了牛磺熊去氧胆酸的灵 敏度和线性范围。 第三章以溴乙酰基对硝基苯为衍生化试剂，RP-HPLC，紫外检测器，波长265nm，研究了熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的分析方法，方法简便快速、灵敏 度高。 3.期刊论文 王守箐.WANG Shou-qing RP-HPLC直接测定普济痔疮栓中牛磺熊去氧胆酸含量 -食品与药品A2006,8(8) 目的建立HPLC测定普济痔疮栓中牛磺熊去氧胆酸含量的方法.方法样品经提取后用HPLC测定.色谱条件:C18柱.流动相:甲醇-水-冰醋酸 (78:22:0.01).流速1.0 mL/min,柱温:室温;检测器为ELSD,漂移管温度105℃雾化气体:空气;流速2.0 L/min.结果本法线性关系良好(r=0.998 2),牛磺熊 去氧胆酸平均回收率为99.9%,RSD为1.03%.结论本法较原方法操作简便、重复性好,适合普济痔疮栓的含量控制. 4.期刊论文 刘秀霞.殷红兰.孙海胜.石威武.徐土根 HPLC法测定参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量 -中国药业 2002,11(3) 目的:探讨参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量测定方法.方法:HPLC法,选用CLC-ODS柱,以甲醇-磷酸二氢钠(0.03mol/L)(65:30)为流动相,用磷酸 将流动相pH值调至4.40,检测波长210nm.结果:回归方程为y=-996.90+3 839.33 X,r=0.999 6(n=5),线性范围为3.14～15.70μg,平均回收率为 99.87%,RSD为1.50%.结论:HPLC法可以用来测定参熊心痛丸中牛磺熊去氧胆酸钠的含量. 5.期刊论文 李开敏.詹世琴.龚土学 HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量 -中国药业 2000,9(3) 采用HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的含量,以μ-BonndapakC18为分析柱(10μm,4.6×250mm),甲醇-磷 酸二氢钠溶液(0.03mol/L,65:30)为流动相,紫外检测波长为210nm,平均回收率分别为98.8%(RSD=1.41%,n=5))和101.3%(RSD=0.74%,n=5). 6.学位论文 王丽影 人工引流熊胆粉的品质评价研究 2006 熊胆(BearBile)为熊科动物黑熊SelenarctosthibetanusCuvier或棕熊UrsusarctosLinnaeus的干燥胆囊。味苦，性寒。具有清热解毒，凉心平肝 ，利胆明目等功效。熊胆粉为熊科动物黑熊经胆囊手术引流胆汁而得的干燥品，属国家卫生部批准的一类新药，临床上作为熊胆药物使用。 本文对熊胆及其替代品的研究情况进行了综述，在此基础上，首次建立了熊胆粉药材的色谱指纹图谱，并建立了以熊胆粉的主要有效成分牛磺熊去 氧胆酸(Taurocherodeoxycholicacid)和牛磺鹅去氧胆酸(Tauroursodeoxycholicacid)为指标的含量测定方法。用此法对黑宝一个月份内连续10个批号和 12个月份产熊胆粉以及9个不同产地的熊胆粉的药材样品进行质量评价，从而建立一种较好的控制药材内在质量的方法。 通过比较黑宝一个月份内连续10个批号和12个月份产熊胆粉药材指纹图谱可看出，黑宝不同的熊胆粉药材指纹图谱相似度较高，绝大多数大于 0.9，黑宝熊胆粉总体的化学组成一致性较好，质量稳定，可作为黑宝熊胆粉的专属性指纹图谱；而从9个不同产地的熊胆粉指纹图谱可以看出，各 地的熊胆粉相似度较差，由色谱工作站辅助自动进行峰匹配，仅能确定7个共有峰，较黑宝熊胆粉的色谱峰要少很多。该结果提示，各产地的熊胆粉较黑 宝熊胆粉有些偏离，质量差异较大，因此在选择药材产地时应予以注意，缩小药材的产地范围，无疑对保证熊胆粉的质量一致具有重要作用，进而为熊 胆粉药材质量控制提供参考。 对黑宝一个月份内连续10个批号和12个月份产熊胆粉两种主要有效成分同时定量的结果表明，黑宝熊胆粉单一成分含量或两种成分含量之和均较高 ，质量较好；一个月份内连续10个批号的熊胆粉相似度较好，质量均一稳定。而9个不同产地的熊胆粉质量差异较大，且两成分的含量较黑宝熊胆粉低 ，偏离较大。 7.期刊论文 朱明礼.袁绪荣.刘世萍.高旭年.杨炳友 HPLC法测定胆清片中牛磺熊去氧胆酸的含量 -中医药学报 2001,29(4) 胆清片是由熊胆粉、金钱草、茵陈、板兰根、郁金、甘草六味中药组成,用于急慢性胆囊炎、胆石症的治疗.为控制产品质量,针对君药熊胆粉中的牛 磺熊去氧胆酸进行测定.实验表明HLPC法结果令人满意,灵敏度高,重现性好. 8.期刊论文 沈俊.周聃.张若丹.苏诚.吴纯洁.SHEN Jun.ZHOU Dan.ZHANG Ruo-dan.SU Cheng.WU Chun-jie HPLC测 定风热清胶囊中的绿原酸和牛磺熊去氧胆酸 -华西药学杂志2008,23(3) 目的 建立测定风热清胶囊中绿原酸和牛磺熊去氧胆酸的方法.方法 采用HPLC法,绿原酸的测定用Kromasil C10柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为 乙腈-0.4%磷酸溶液(9:91),流速为0.8 ml·min-1,柱温为35℃;牛磺熊去氧胆酸的测定用Phenomenex双子星C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇- 0.03 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(65:35)(磷酸调pH4.4),流速为0.8 ml·min-1,柱温35℃.结果 绿原酸进样量0.3176-2.3820 μg与峰面积的线性关系良好 (r=0.9999),平均回收率为103.82%,RSD=0.30%;牛磺熊去氧胆酸进样量0.2036～1.6288 μg与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为 98.72%,RSD=0.98%.结论 所用方法简便可行、重复性好,可控制风热清胶囊的质量. 9.学位论文 赵勇 秦艽地上部分化学成分的研究熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸钠和牛磺鹅去氧胆酸钠的分离与含量测定 2005 本文首先对秦艽地上部分化学成分进行了一定研究，运用多种分离方法分离得到6种化合物，并运用波谱学手段(UV、IR、MS、13C-NMR、1H-NMR、 HMBC、HMQC、H-HCOSY)，结合理化常数、标准对照品，鉴定了6种化合物的结构。同时采用正交试验法优选出从秦艽地上部分提取龙胆总苷的最佳提取工 艺：通过不同型号大孔吸附树脂对龙胆苦苷吸附效果的比较，确定了用于富集龙胆苦苷的大孔吸附树脂的型号；并通过其对龙胆苦苷的吸附和洗脱试验 ，确定了最佳工艺条件。此外，采用HPLC法对秦艽地上部分不同部位龙胆苦苷进行了定量分析；为陕西省教育厅重点科研项目“秦艽地上部分综合开发 利用”进行了基础研究。其次，采用经典柱层析法和高效制备液相色谱法相结合从熊胆粉中分离得到牛磺熊去氧胆酸钠和牛磺鹅去氧胆酸钠两种差向异 构体，并采用ELSD-HPLC法对熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸钠和牛磺鹅去氧胆酸钠进行了定量分析。 10.期刊论文 郭喆.梁军.袁海龙.魏振满 高效液相色谱法测定熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸含量 -武警医学 2007,18(6) 熊胆胶囊具清热利湿之功效,用于慢性乙型肝炎、湿热中阻等证的治疗.该药中熊胆主要成分为牛磺熊去氧胆酸(TUDCA),是分析鉴定熊胆质量的主要 指标之一.有研究用薄层色谱法测定其含量,但样品处理相对繁杂[1],也有采用HPLC测定的类似报道,但参照类似方法很难重复[2,3].本研究采用HPLC法进 行该药中TUDCA定量研究,所用方法稳定、准确,重复性好. 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhongcy200003008.aspx 授权使用：哈尔滨医科大学(hebykdx)，授权号：a55420c1-ad10-4bb5-8bab-9e310176a429 下载时间：2010年11月18日