新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)...

新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)... 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法) 目录 ? 产品名称 通用名称: 英文名称: ? 包装 ? 预期用途 ? 检验原理 ? 主要组成成分 ? 储存条件及有效期 ? 适用仪器 ? 样本要求 ? 检验方法 ? 参考值(参考范围) ? 检验结果的解释 ? 检验方法的局限性 ? 产品性能指标 ? 注意事项 ? 参考文献 ? 生产企业 ? 医疗器械生产企业许可证编号 ? 医疗器械注册证书编号 ? 产品标准编号 ? 说明书批准及修改日期 1 产品名称 通用名:促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法) 英文名称:TSH kit(TRFIA) 包装规格 96人份/盒 960人份/盒 预期用途 用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿血样本中促甲状腺素(TSH)的浓度，适用于新生儿甲状腺功能低下的筛查，仅用于体外诊断。 促甲状腺素(TSH)是由垂体前叶分泌的一种糖蛋白，是调节甲状腺功能活动的主要激素。主要作用是促进甲状腺激素的合成与分泌。TSH受下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素(TRH)控制，还受甲状腺素(T3、T4)的影响，即负反馈作用。血液中甲状腺素浓度升高时，下丘脑减少TRH 的释放，垂体分泌的TSH减少，甲状腺素的释放也随之减少。血液中TSH的正常浓度很低，却维持着甲状腺的正常功能。 先天性甲状腺功能低下症(congenital hypothyroidism,,,)是常见的引起儿童智能与体格发育低下的内分泌疾病，发病率约1/3000,1/5000。该病症的早期症状不明显或无症状,因此，早期诊断是防止该类患儿发生智力及体格发育障碍的关键,而新生儿筛查是获得早期诊断的重要措施之一。在新生儿甲状腺功能低下的筛查方面，检测TSH水平被认为是较灵敏的、可行的方法。但在甲状腺功能低下的确诊中同时还需要做其它试验，如血清T3、T4、TSH等。 检验原理 采用“双抗体夹心法”，96孔微孔板包被抗-β-hTSH-抗体，与被分析物中的TSH抗原β位点结合，铕(europium，Eu)标记的抗-hTSH-抗体与抗原的其他位点结合，形成“三明治”的抗原抗体复合物，利用增强液将三价铕离子解离，与增强液形成高荧光强度的鳌合物，通过时间分辨荧光仪测定最后产物中铕离子的荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，判断反应体系中被分析物的浓度 主要组成成分 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)组成见表1。 表1 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)组成表 名称 96人份/盒 960人份/盒 包装 Eu-抗体(Eu标记TSH单克隆抗体) 0.5ml/瓶 2.5ml/瓶 浓缩洗液25X (Tween 20溶液) 40ml/瓶 200ml/瓶 无色透明塑料瓶 实验缓冲液(50mM Tris-HCl溶液) 30ml/瓶 250ml/瓶 增强液(0.1M 冰醋酸溶液) 30ml/瓶 250ml/瓶 TSH包被板(包被鼠抗TSH单克隆抗体) 1块 10块 铝箔袋 标准血片A,F(1,10,25，50，100，250 uIU/ml) 1份 3份 铝箔袋或无色透明塑料袋 质控血片C1、C2 1份 2份 盖膜 2张 20张 说明书 1份 注:标准品与质控品的浓度若有改动，将在试剂盒内放置通知单。 储存条件及有效期 储存 2,8?,防止冷冻。 有效期 12个月。试剂盒开启后可在2,8?保存6周。 适用仪器 时间分辨荧光分析仪。本说明中的技术参数使用PE公司1420 D型时间分辨荧光分析仪。激发光波长340nm，发射波长614nm。 样本要求 采血单位应按照卫生部“新生儿采血常规”采取足跟血。 检验方法 2 1.检测前将试剂盒放室温(18,25?)平衡; 2.浓缩洗液与去离子水1:25稀释，稀释后2,8?可保存1个月; 3. Eu-抗体与实验缓冲液1:200倍稀释; 4.专用打孔钳打下直径3mm标准品、质控品和样本血片放入相应的微孔中; 5.每孔加200μl的Eu-抗体稀释液，室温振荡4小时; 6.洗板:反应结束后弃去反应混合物，每孔加洗液400μl，弃去，共洗涤6次。在吸水纸上拍 干至没有潮气; 7.每孔加入200μl增强液，室温振荡10分钟; 8.在20分钟内读取荧光值，时间分辨免疫荧光分析仪激发波长340nm，发射波长614nm。 结果计算 1. 手工计算: a) 计算标准品、质控品和样本平均荧光值; b) 建立标准曲线，使用标准品的荧光值与其相对应的浓度绘制标准曲线。荧光值为纵轴(Y 轴)， 浓度为横轴(X轴); c) 样品的TSH浓度:首先在Y 轴上查找荧光值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的点拉 垂直线与X轴相交，得出TSH浓度值。 2. 利用时间分辨荧光仪所带的软件，自动计算样品浓度值。 3. 计算公式:Lin-Lin或 Log-Log 4. 全血值与血清值换算:1μU/ml全血值,2.2μU/ml血清值 参考值(参考范围) 参考值为?10.5μU/ml。 对672例正常新生儿血斑样本使用本试剂盒进行TSH检测，检测结果的分布见图1。 图1 672例样本TSH分布图 672例新生儿TSH分布图(时间分辨免疫荧光法) 频数累计频率 1801.2 160 1140 1200.8 100 0.6频数80累计频率 600.4 40 0.220 00~1~2~3~4~5~6~7~8~9~10~11~12~13>13 分组(uIU/ml) 每个实验室应建立自己的正常参考值范围。 检验结果的解释 a) 质控品的结果必须控制在要求范围之内，否则实验结果不符合可接受范围视为无效。 b) 实验结果仅仅是患者临床的一个部分，只有与所有的临床诊断吻合，才能做出最终诊断。 3 c) 实验结果不能单独决定患者的治疗。 检验方法的局限性 a) 必须使用新生儿筛查专用S&S903#滤纸。使用其他滤纸结果将不同。 b) 采集血斑时间为出生72小时，.避免因生理原因而导致出现假阳性结果。 c) 不排除药物对TSH浓度的直接影响。如果病人有临床症状或相关病历，即使TSH正常也要复查。 产品性能指标 1. 试剂盒外观整洁，文字符号标识清晰 2. 固体组分: 96孔微孔板(可拆卸，已包被鼠抗TSH单克隆抗体)铝箔袋包装; 标准血片 每份有6个标准浓度; 质控血片 每份有2个浓度; 盖膜 白色不干胶纸。 液体组分:实验缓冲液为浅粉色液体，其它液体组分应清亮无沉淀，无絮状物 3. 血制品经抗-HIV、HBsAg、抗-HCV、梅毒抗体、转氨酶检测应呈阴性 4. 剂量,反应曲线的线性范围1,250μU/ml(非精确值，以试剂盒内实际标定值为准)，R?0.99 5. 批内精密度:CV不大于10 % 6. 批间精密度:CV不大于15 % 7. 准确性:回收率为85,,119, 8. 灵敏度:最低可检出限不大于3.3μU/ml 9. 特异性:与HCG、LH、FSH无交叉反应 注意事项 1. 仅用于体外诊断。 2. 不同批号的试剂不可混用;超出有效期的试剂不可使用。 3. 自备实验材料:时间分辨荧光分析仪、去离子水、移液器、吸头、吸水纸、一次性手套等。 4. 所有试剂、样本应视为有潜在的生物危害，实验结束应采用高压或其它方法处理。 参考文献 [1] 武学成,何林,周克. .时间分辨荧光免疫分析方法的研究进展. [2] Juhani Vuori, Simo Rasi, Timo Takala, and Kalervo . Dual-Label Time-Resolved luoroimmunoassayfor Simultaneous Detection of Myoglobin and Carbonic Anhydrase Ill in Serum. CLIN. CHEM. 37/12, 2087-2092 (1991) [3] 吴冯波.时间分辨荧光免疫分析——原理与实践. 化学通报 2005 年 第68 卷 [4] Feng-Bo Wu, Shi-Quan Han, Tao Xu, and You-Feng He. Sensitive time-resolved fluoroimmunoassay for simultaneous detection of serum thyroid-stimulating hormone and total thyroxin with Eu and Sm as labels Analytical Biochemistry 314 (2003) 87–96 [5] 卫生部《卫生部关于印发〈新生儿疾病技术〉的通知》，附件2。 [6] 黄雨三主编《新生儿疾病筛查与临床诊断治疗技术操作规范全书》2005，2:111-119 生产企业 企业名称:北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址:北京市海淀区恩济庄18号院4,2,302 邮政编码:100036 电话:010,51295656 传真:010,88140690 网址:www.unionluck.com.cn 医疗器械生产许可证编号 4 京药管械生产许20040085 医疗器械注册证书编号 注册产品标准编号 说明书批准及修改日期 5 i 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨免疫法)说明书 96人份/盒 480人份/盒 医疗器械生产许可证编号:京药管械生产许20040085号 医疗器械注册证书编号: 注册产品标准编号: 北京协和洛克生物技术研究开发中心 6 7