阿莫西林聚合物测定法[1]

  附件：  阿莫西林聚合物测定方法的质量标准（草稿）与研究资料 阿莫西林聚合物测定法 （草稿） 阿莫西林聚合物 照分子排阻色谱法(中国药典2005年版二部附录Ⅴ H)测定 色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶 G-10(40～120μm)为填充剂,玻璃柱（1.0×30cm）,流动相A为pH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液(取0.05mol/L磷酸氢二钠95ml和0.05mol/L磷酸二氢钠5ml,混合均匀，滤过)。流动相B为水,流速每分钟1.5ml,检测波长为254nm, 量取0.2mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液100μl, 注入液相色谱仪, 分别以流动相A,B进行测定，记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计算理论板数均不低于500,拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰与供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。 称取阿莫西林约0.2g置10ml量瓶中，加2%无水碳酸钠溶液4ml使溶解后，用0.3mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液稀释至刻度，摇匀。量取100μl注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液100μl,连续进样5次,峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。 对照溶液的制备  取青霉素对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约含青霉素0.2mg的溶液。 测定法   取本品约0.2g, 精密称定，置10ml量瓶中，加2%无水碳酸钠溶液4ml，使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。立即精密量取100μl注入液相色谱仪,以流动相A为流动相进行测定,记录色谱图。另精密量取对照溶液100μl注入液相色谱仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，结果除以10, 即得,含阿莫西林聚合物以阿莫西林计不得过0.15% (阿莫西林: 青霉素=1: 10)。 方法的研究与验证 1.流动相的选择  照2005年版药典阿莫西林高分子聚合物项下; 流动相A:  pH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液(取0.05mol/L磷酸氢二钠95ml和0.05mol/L磷酸二氢钠5ml,混合均匀，滤过)。 流动相B: 水, 2.检测波长: 254nm, 3. 分离度试验  根据药典附录ⅤH分子排阻色谱法规定，高分子杂质检      查时，某些药物分子单体与其聚合体不能达到基线分离时，其分离度计算公式为 R=高聚体的峰高/单体与高聚体之间的谷高＞2.0 分离度试验溶液  由于高分子聚合物的对照品不易获得，而样品中的高聚物又极少，在配制分离度溶液时，适当的加入蓝色葡聚糖2000，使聚合物的峰增大，一般蓝色葡聚糖2000的加入量是使聚合物峰面积达到规定限度的1～2倍。 称取阿莫西林约0.2g置10ml量瓶中，加2%无水碳酸钠溶液4ml使溶解后，用0.3mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液稀释至刻度，摇匀。量取100μl注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图进行分析，得高聚物峰的含量为0.26%（规定限度为0.15%），分离度为2.53。（附图）                         附图.  分离度计算色谱图 (阿莫西林) 4. 样品取样量对聚合物测定结果的相关性考察 同批样品,取样分别为约100mg,175mg和270mg,分别置3个10ml量瓶中,按样品测定方法测定,结果明,供试品溶液在9.8mg/ml～27.2mg/ml范围内,溶液浓度与聚合物峰面积呈良好线性关系，相关系数r=0.9985     浓度（mg/ml） 峰面积 9.8         1.2597 17.58 2.0941 27.2 3.344                         5. 流速的选择 选用1.5ml/min　流速，聚合物的保留时间约在6.6分钟，而主峰流出在10分钟以后，分离度良好，故选用1.5ml/min 流速。（附图）  在40分钟内完成一个样品的分析。.         附图.  阿莫西林样品分析全程色谱图     讨论：本方法与原药典方法除使用色谱柱规格为（1.0×30cm）不同外，其他条件均相同。现提供已建立的方法，供起草单位参考。