地塞米松

地塞米松 哈尔滨恒泰克生物技术有限公司 Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd. 地塞米松(DEX)ELISA检测试剂盒说明书 (编号:HITEK E.DEX001) 一、 概述 五、 试剂盒组成 地塞米松 (DEX)是应用广泛的抗菌素， 对家禽 1. 酶标反应板:96孔微孔板(12条×8孔规格) 疾病控制和治疗起到重要作用。但长期使用会导致许 2. 地塞米松校准品: 1mL/瓶×7瓶 多细菌对地塞米松药物产生耐药性，且有潜在的致癌 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05、 性。地塞米松酶联免疫试剂盒具有方便，快速，灵敏 50ppb 等特点，适用于现场大批量样品检测。 3. 抗体工作液: 7mL/瓶×1 瓶 ……………蓝色盖 本试剂盒是应用 ELISA 技术研发而成的检测产 4. 酶结合物: 11mL/瓶×1 瓶 …………… 红色盖 品，操作时间仅需 80分钟，试剂盒灵敏度为 5. 底物 A 液: 7mL/瓶×1 瓶 …………….红色盖 0.05ppb，线性范围为0.05ppb,4.05ppb。 6. 底物 B 液: 7mL/瓶×1 瓶 …………… 黑色盖 7. 终止液: 7mL/瓶×1瓶 ……………黄色盖 二、 原理 8(浓缩洗液(20×)50mL/瓶×1 瓶 ……………透明盖 本试剂盒采用间接竞争法。酶标板上包被的抗9. 浓缩复溶液(2×)50mL/瓶×1 瓶 …………… 透明盖 原与加入的校准品(或样本)中的抗原竞争结合加10. 其他: 入的抗体。洗去多余的抗体，加入酶结合物与抗体说明书说明书×1份;封板膜×2张;自封袋×2个 结合，洗去多余酶结合物，用TMB底物显色，样本 吸光值与其残留物地塞米松负相关，与校准曲线比六、 实验需要但试剂盒未提供的试剂和仪器 较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中地塞1. 仪器 米松的含量。 微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、三、 适用范围 振荡器、离心机、恒温箱、天平(感量0.01g)、 可定性定量检测鸡肉样等样本中地塞米松的残 涡旋仪、刻度移液管 留量。 2. 微量移液器:单道20μL,200μL、100μL,四、 试剂盒技术指标 1000μL、多道250μL 试剂盒灵敏度: 0.05ppb 3. 试剂:氯仿、正己烷、去离子水。 检测线性区间: 0.05ppb,4.05ppb 样本最低检测限: 七、 样本前处理步骤 鸡肉 …………………………0.1ppb (一) 样本处理前须知 回收率: 1. 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂鸡肉……………………………80%,120% 时要更换吸头。 2. 实验前须检查各种实验器具是否干净，必要时可 对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结 果。 (二) 样本前处理需配制如下溶液 样品复溶液:把浓缩复溶液(2×)按1份浓缩液 +1份去离子水稀释。 地址:哈尔滨市南岗区汉广街41号金华大厦321室 电话/传真: E-mail:hljhtk @163.com 邮编:150000 哈尔滨恒泰克生物技术有限公司 Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd. (三) 样本前处理方法 设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630组织(鸡肉)(处理方法与喹喏酮类、磺胺通用) 检测，在5min内读完数据)，测定吸光度值(OD1、 称1?0.05g 均质过的组织样本于50ml离心管 值)。 中;加入8ml氯仿，振荡 2min， 九、 结果判定 4000r/min 以上，25?离心10min; 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方2、 取 4ml清澈有机相至玻璃试管中，50-60?氮气 法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所 或空气吹干; 含的地塞米松含量呈负相关。 3、 用 1ml样本复溶液溶解干燥的残留物，加入正 1. 粗略判定 己烷2ml。混合 30s，2000r/min 25?离心 用样品的平均吸光度值与校准值比较，可得出样 7min; 本所含地塞米松浓度范围(ppb)。假设样品1的吸光4、 取下层100µl液体用于分析。 度值为0.339，样品2的吸光度值为1.153，校准品吸 样本稀释倍数: 2倍 光度值分别是:0ppb为1.839; 0.05ppb为1.345;(四) 样品的保存 0.15ppb为0.926;0.45ppb为0.452; 1.35ppb为0.156。1. 未处理的样品冷冻保存。 则样品1的浓度范围是0.45ppb,1.35ppb;样品2的2. 处理好的样本在2,8?避光保存24小时。 浓度范围是0.05ppb,0.15ppb，再乘以其对应的稀释 倍数即为样本中地塞米松的实际浓度。 八、 酶标免疫分析程序 2. 定量分析 1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温(20,所获得的每个浓度校准溶液和样本吸光度值的平 25?)平衡30min以上，注意每种液体试剂使均值(B)除以第一个校准品(0校准品)的吸光度平 用前均须摇匀。 )再乘以100%，即百分吸光度值。 均值(B0 2. 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔条放 入自封袋，保存于2,8?。 B 百分吸光度值(%), ×100% 3. 配洗涤工作液:用去离子水将浓缩洗涤液B 0 (20×)按1:19体积比进行稀释。即1份浓 缩洗涤液(20×)，19份去离子水。用于酶标B—校准品溶液或样本溶液的平均吸光度值 板的洗涤，洗涤工作液在4?环境下可保存一B—0ppb校准品溶液的平均吸光度值 0 个月。 4. 加校准品/样本100μL/孔到各自的微孔中，然以校准品百分吸光率为纵坐标，以地塞米松校准 后加入抗体工作液50μL/孔，用封板膜封板，品浓度(ppb)的半对数为横坐标，绘制曲线图。 轻轻振荡混匀，25?环境反应30min。 将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上5. 取出微孔板，甩出孔内液体，用去离子水按250读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为 μL/孔洗板4次，每次浸泡30秒，在吸水纸上样本中地塞米松实际浓度。 拍干。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大6. 加酶结合物100μL/孔，用封板膜封板，轻轻量样品的准确、快速分析。 振荡混匀，25?环境反应30min。 7. 取出微孔板，甩出孔内液体，用去离子水按250 μL/孔洗板4次，每次浸泡30秒，在吸水纸上 拍干。 8. 显色:每孔加入底物A液50μL，再加底物B 液50μL，轻轻振荡混匀，25?环境下避光显 色15min。 测定:每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，9. 地址:哈尔滨市南岗区汉广街41号金华大厦321室 电话/传真: E-mail:hljhtk @163.com 邮编:150000 哈尔滨恒泰克生物技术有限公司 Harbin high-tec Biotelhnology Co.,Ltd. 十、 注意事项 变质。 1. 用前将所有试剂温度回升至室温20,25?。 12. 该试剂盒最佳反应温度为25?，温度过高或过2. 用之后立即将所有试剂放回2,8?冰箱。 低将导致吸光度值和灵敏度发生变化。 3. ELISA分析中的重现性很大程度上取决于洗 板的一致性，仔细按照推荐的洗板程序操作是十一、 储藏条件和保质期 ELISA测定程序中的要点。 储藏条件:试剂盒于2,8?保存，不要冷冻。 4. 所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用封板保 质 期:该产品有效期为12个月，生产日期 膜封住微孔板。 见包装盒。 5. 室温低于25?或试剂及标本没有回到室温 (20,25?)会导致测定的OD值偏低。 6. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会 伴随着出现标准曲线不呈线性、重复性不好的 现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操 作。 7. 试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现 象。 8. 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。 9. 不要使用过了有效期的试剂盒，稀释或掺杂使 用不同批号的盒中试剂。 10. 不用的微孔板放进自封袋重新密封，校准品和 底物对光敏感，因此要避免直接暴露在光线 下。 11. 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 校准品的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能 地址:哈尔滨市南岗区汉广街41号金华大厦321室 电话/传真: E-mail:hljhtk @163.com 邮编:150000