金黄色葡萄球菌的分离培养试验

            实验  金黄色葡萄球菌的分离培养 一．实验目的； 1． 掌握Baird-Parker培养基的配制方法 2． 掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法 二．实验 1原理； Baird-Parker培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。 利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。 2 仪器与试剂   250ml三角瓶  灭菌锅 量筒 Baird-Parker氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤 3操作步骤 3.1 培养基配制 Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml，121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml，摇匀后倾入无菌平皿。   7.5%氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g蒸馏水1000mlph7.4）将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225 mL，121 ℃高压灭菌15 min。 3.2增菌及分离培养 3.2.1挑取金黄色葡萄球菌接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37℃）恒温箱中培养6-8h. 3.2.2将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板，于36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。 3.3观察菌落形态 4、结果判定   根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类 三、实验结果               实验  金黄色葡萄球菌的染色镜检 一．实验目的; 掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。 二．实验内容 1原理;革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。 2仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。）革兰氏碘液(碘1g碘化钾2g 蒸馏水300ml先加少许水混匀在加蒸馏水至300ml)；沙黄复染液（沙黄0.25g 95%乙醇10ml蒸馏水90ml）（或番红复染液） 3操作步骤; 3.1挑取B-P平板上的金黄色葡萄球菌单菌落于5ml 5%氯化钠肉汤中37℃培养6-8h。 3.2取金黄色葡萄球菌涂片在火焰上固定，并用大肠杆菌作阴性对照，滴加结晶紫染液染1min，水洗。 3.3滴加革兰氏碘液，作用1min 水洗。 3.4滴加95%乙醇脱色约15-30s，直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗。 3.5滴加复染液，复染1min ，水洗待干，镜检。 三 实验结果