叶酸拮抗乙酰水杨酸致大鼠卵黄囊毒性作用的研究

叶酸拮抗乙酰水杨酸致大鼠卵黄囊毒性作用的研究 叶酸拮抗乙酰水杨酸致大鼠卵黄囊毒性作 用的研究 第28卷第3期 1999年5月 卫生研究 JOURNAIOFHYGIENERESEARCH Vo】.28No.3 May1999181 酸致大鼠卵黄瓣陛作肭 生墨 山东省劳动卫生职业病防恰研究所,济南 摘要以奎胚胎培养模型结合免疫组他和电境技术等探讨了rort~.水畅畦和叶畦对太蔽即黄囊受胚胎的 影响.结果表明:培养基含乙酰水杨矗复300#g./ml组的卵黄囊直径和胚胎体长均显着低干阴性对照组,胚胎 畸形丰明显增高.组织学检查发现卵黄囊厚度变薄.问质层血岛,微血管数量明显减少-血管壁细胞不连续, 血管发育不良.即黄囊内皮层细胞顶端微绒毛少见.内皮层细胞的溶酶体,内质网受核蛋白体等结构和数量 均有明显改变.而60mg/kg叶酸灌胃鼠血清与乙酰水杨酸联合应用 后,则卵黄囊的上进毒性作用明显减轻 或消失,提示叶畦能明显拮抗乙酰杨畦致太蔽即黄囊的毒性作用 关键词乙酰畅酸 中图分娄号R971.1 圭酸主全胚胎培养差Q593.4Q319.33T. Antagonismoffolicacidonthe toxicityofaspirininyolksacofrats WangXiaofen,HanMingyong ShandongInstituteofIndustrialHygieneandOccupationalDisease,Jinan250062.China Theantagonisticeffectsoffolicacidtoaspirin0nthedevelopmentofratyolksacandembryos~vere studiedduringearlyorganogenesisbyusingwholeembryoculturetechniqueandelectronmicroscopy.The resultsshowedthatwhentreatedwithaspirin,thediameterofyolksacandthebodylengthofembryowere muchshortertthefrequenciesofabnormalembryosweresignificantlyhigher.andtheyolksacbecamethin— herthanthosewithouttreatment.Thenumberofbloodislandsandcapillariesdecreased,thedifferentation anddevelopmentofbloodvesse1wereretardedinthetreatedgroup.U]trastructureobservationalsoshowed thatthenumbersofmicrovilliandcapillariesweregreatlydecreased,andthestructureandthenumbersof lysosomestendoplasmiereticulaandribosomessignificantlychangedinthetreatedgroup.Whenaspirinwas addedwithhighfolicacidserumtthetoxicityonyolksacdecreasedordisappearedTheresultssuggested thattheprotectionofyolksacwouldberelatedtotheantagonismoffolicacidtoaspirin. Keywords:aspirin,folicacidtyolksac,wholeembryoculture,antagonism,teratogeniceffect 己酰水杨酸是用于人解热镇痛的常用药.该药对人的致 畸作用尚未肯定.但是动物实验已让明有强致畸作用]本 实验室利用己酰水杨酸为阳性对照药物,采用致畸试验和大 鼠垒胚胎培养观察了叶酸的抗致畸作用和有效拮抗剂 量其试验结果已发表1在此基础上,我们又对己酰水橱酸 单独给药叶酸与乙酰水杨酸联合给药对卵黄囊的结构及功 能影响情况进行了初步的探讨. l材料与方法 1.1动物 Wistar大鼠t未育雌性大鼠体重180,240g,雄性大鼠 200~250g.雌雄性大鼠按2:1合笼过夜第二天早晨8点 阴道涂片查精于查到精于曰定为妊娠第0天妊娠第9天 16点定为妊娠第9.5天. 1.2仪器与试剂 *山东省卫生厅资助课?王筱瞽,女,大学,副研究员 转动式培养床,气体供给系统及透射电镜.己酰水扬酸 (山东新华制药厂提供).叶酸(上海生化所东风生化技术公司 产品),免疫组化染色SPr”试剂盒及第八因子相关抗原F… Agf2L京中山生物制品公司产品).IC血清(立刻离心血清,自 制),及Hanks渡. 1.3实验方法 1.31实验分组即己酰水杨酸300Vg./ml阳性对照组 (B),阴性对照组(A)及己酰水扬酸300Fg/ml加叶酸1O, 60mg./kg灌胃鼠血清两个实验组(cD) 1.3.2给药方法和途径将己酰水扬酸直接加入培养瓶中. 叶酸按10,60mg/kg剂量给大鼠灌胃,1小时后取血按要求制 备Ic血清.作为叶酸两个不同剂量组的培养基. 1.3-3IC血清制备同种雄性大鼠,戊巴比妥钠麻醉,无菌 条件下腹主动脉采血,于血液凝固前立即离心(3000r,/min, 5rain).离心后静置60rain,再离心(3000r/min,30min).将制 备的血清放8?水浴中30分钟,灭活补体,一20C球箱保 存备用. ,7 p八 ? . l82卫生研究第28卷 1.34培养方法将9.天孕鼠脱颈椎处死.无菌条件下分 离出胚胎.移入50ml培养瓶中.每瓶盛3只胚胎,3mr血清. 将培养瓶放入培养床培养48小时.分别在培养开始时,第16 小时和24小时充入混合气体3分钟,Oz:CO.:N:混合气体 比储依次为5:5;9O,2O,5:75t4O:5155a 1.4指标测定 1.4.1旺胎测定将培养后的胚胎移人生理盐水中,在解剖 显微镜下测量卵黄囊最大直径,胚胎顶臀长.井胚胎的发 育,畸形等情况 1.2组织检查(1)卵黄囊组织结构观察:将部分卵黄囊 用Bouin液固定,病理切片常规处理后,光镜下观察(2)卵黄 囊血管发育:采用SP法’,以第八因子相关抗原(F…A)标 记卵黄囊内皮层细胞,观察卵黄囊血管的发育及密度(3) 超微结构观察:部分卵黄囊按常规制备电镜标本.于透射电镜 下观察. 2结果 2.1叶酸对乙酰水扬酸致卵黄囊和胚胎发育异常的影响 从附表中可见,乙酰水扬酸单独作用下,卵黄囊直径及胚 胎顶臀长均明显低于阴性对照组(P<0.05).胚胎畸形率亦 明显增高.叶酸60mg/kg灌胃鼠血清与300~g/ml乙酰水杨 酸联合作用,则卵黄囊直径和胚胎顶臀长均显着高于单独乙 酰水扬酸组(P<0.O5),胚胎畸形率也明显降低(P<O.05). 附衰叶酸对乙t木格馥致卵黄囊结构和胚格发育异常的影响 与阴性对照(A)组比较,(1)P<005(2)P<O.00l;与阳性对照 (B)组比较-(3)P<O.05 2.2卵黄囊组织结构改变 光镜检查,与阴性对照组(A)比较,发现单独乙酰水杨酸 组(B)卵黄囊厚度明显变薄.卵黄囊内皮层细胞排列不整齐, 琉松,有坏死细胞间质层中血岛,微血管少见.血管壁细胞不 连续免疫组化染色显示:卵黄囊血管内皮细胞胞浆内棕黄色 颗粒比明性对照组明显减淡,甚至消失.反应强度约为(一, +).而叶酸6omg/kg灌勇鼠血清与乙酰水杨酸30o~g/ml联 合应用组(D)卵黄囊组织结构显着不同于单独乙酰水杨酸组 (B).卵黄囊内皮层细胞排列整齐,密集,间质层血管较丰富. 血管壁细胞连续,管腔内可见红细胞.免疫组化染色显示血管 内皮细胞貔浆中棕黄色颗粒较密集,分布较均匀,基本类同于 阴性对照组.反应强度可为’卅). 电镜检查,B组卵黄囊有明显的超微结构改变.主要表现 为:内皮层细胞顶端微绒毛减少.内皮层细胞内质网,高尔基 体,核蛋白体,溶酶体数量显着减少,并且有肿胀,破损而D 组卵黄囊内皮层细胞顶端微绒毛较多,排列较整齐内皮层细 咆内质网,高尔基体,溶酶体及棱蛋白体的结构和数量基本同 于阴性对照组,未见有明显的肿胀和破损等改变. 3讨论 本次实验发现单独乙酰水扬酸组胚胎卵黄囊直径和胚胎 体长明显低于田性对照组.而胚胎畸形发生率高达6667% 上述结果是否与乙酰水扬酸引起的卵黄囊组织结构改变或损 害有关,就这一问题进行如下讨论. 31乙酰水杨酸影响卵黄囊的营养作用 单独乙酰水杨酸组卵黄囊于光镜下观察,其厚度明显比 阴性对照组变薄,并且内皮屡细胞排列疏松电镜检查发现 内皮层细胞顶端微绒毛少见,内皮层细胞溶酶体,高尔基体, 内质嗣及核蛋白体等有不同程度的肿胀,破损上述组织学改 变,可能影响卵黄囊内皮层细胞对营养物质的摄取,消化及代 谢等功能.使棱酸和蛋自质合成受阻,进而影响胚胎的生长, 发育 3.2乙酰水杨酸影响卵黄囊的遗血和血循环功能 在所有脊椎动物中,血管发生首先开始于卵黄囊的中胚 层,即间质层在此形成血岛,然后形成檄血管和血循环本 实验病理和免疫组化检查所见:在乙酰水枥酸作用下.卵黄囊 血岛,微血管少见,血管壁细胞不连续,血管发育不良t管腔内 红细胞少见.表明卵黄囊造血和血循环的组织学改变或损害 都将导致胚胎细胞缺氧和代谢紊乱,进而弓l起胚胎毒性作用, 使胚胎技育异常 3.3叶酸保护作用观察 在叶酸10mg/kg,60mg/kg灌胃鼠血清与乙酰水杨酸联 合应用的两个实验组中,叶酸lOmg/kg灌胃血清(c)组各项 观察指标测定结果类同于单独乙酰水杨酸组.而叶酸60rag/ kg灌胃血清与乙酰水柄酸联合应用(D)组,使卵黄囊组织损 害的各种表现明显减轻或消失.卵黄囊直径,胚胎体长均显着 高于单独己酰水杨酸组,基本同于阴性对照组.胚胎畸形率降 至l8.18试验结果提示含高剂量叶酸血清的培养基能拮 抗乙酰水杨酸对卵黄囊组织的毒性作用,使卵黄囊发挥应有 的生理功能 4参考文献 】waanyJC.Expermenta]production0fcongenitalrnalfor~tions inrbysalycylatepoisoning.AmJPathot-】959,3S:315331 2GreenawayJc.SodiumSalyeylatetentogenicityinvitro.Teratol— ogy?1982-26:267】71 3韩明勇.叶酸拮抗乙酰东杨酸致体外大鼠胚胎畸形的研究.山东压 科大学.】997,35(4):349350 4王莅芬叶酸抗乙酰水扬酸致畸作用的实验研究卫生研究,1998. Z7(1】t214 5倪灿荣编.免疫组织化学宴验新技术及应用.北京:北京科学技术 出版社,1鲫3.蛆 6王爱平啮齿娄动物脏壁卵黄囊功能研究现状卫生毒理学杂志. 1?3,(增刊)179 (1998—11—13收犒)