基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究

基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究 基于中药信息学对三种中药免疫调节作用 的实验研究 ? 834?辽宁中医杂志2007年第34卷第6期 基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究 李艳菊,刘辉,郭月秋.,马连学 (1.大连开发区医院检验科,辽宁大连116600;2.大连医科大学临床免疫学教研室,辽宁大连116027; 3.大连市药品检验所中药室,辽宁大连116021;4.抚顺矿务局总医院检验科,辽宁抚顺113~)8) 摘要:目的:探讨利用中药文献信息资源筛选具有免疫调节作用的中药的可能性.方法:于药典中随机选取1O味 中药分别查阅相关文献,选择有2个或2个以上单位独立完成并发2篇以上支持具有免疫调节作用沦文的中药进行 实验研究,共计有3种中药(白芍,何首鸟,山药)入选.将3种中药制戍含20%生药的生药液,用该生药液给已经用卵 清蛋白免疫过的小鼠灌胃,每天1次,每次0.5mL/~,连续7天,测血清中相应抗体水平.结果:3种中药均能使小鼠体 内的卵清蛋白抗体显着升高,与生理盐水组比较有显着差异(P<005).结论:初步证明中医药信息库的中药信息资 源具有较高的可靠性,本文提出的筛选原则对筛选具有免疫调节作用的中药具有一定的指导意义. 关键词:免疫调节;中药信息学;白芍;何首乌;山药 中图分类号:R96;R285.5文献标识码:B文章编号:1000—1719(2007)o6,0834一o2 TheResearchofImnluneRegulationE骶ctsofThreeChineseMedicines BasedOilChineseMedicineInformatics /2Yan-ju.,UHui,GUOYue—qiu,MALian—xue4 (1.ExaminingDepartment,DalianDe ,'meZoneHospital,Dalian116600,Liaoning,China;2ClinicImmunologyTeachingand ResearchCenter,OalianMedicalUniversity,Dalian116027,Liaoning,China;3.TCMoff'we,DalianInstitutionofDrugContml, Dalian116021,Liaoning,China;4.ExaminingDepartment,FushunMineralHospital,Fushun113008,Liaoning,China) Abstract:Objective:ToinvestigatethepossibihtyofselectingtheClfinesemedicinewithimmuneregulationeffectsaccord— ingtotheliteratureresourcesoftheChinesemedicines.Methods:TleIlChinesemedieineswere:selectedrandomly,butonlythe medicines,thosehadbeentestedbymorethantwoinstitutionsandwere:reportedbymorethantwopapersrespectivelythatwhich hadtheeffectsofimmuneregulation,couldbeselectedinthistest,atlastthreemedicines(RadixpaeoniaeAlba,Radixpolygoni MuhifloriandRhizomaDioscoreaewereselected.rhecrudeherballiquidscontained20%crudeherbalmedicineofthethree medicineswtprepared,themiceimmunedwithovalbumin(OVA)wereor~lyadministratedwiththethreeherballiquidsre— speetively,midthedosewas0.5mLeachmouseoneday,andrepeated7days,thentheantibodytoOVAwasdetected.Results: nlelevelsoftheantibodytotheovalbuminofthemiceofbeingorallyadministratedwiththethreeherballiquidswere:allsiguifi— cantincreasethanthemicebeingorallyadministratedwithnormalsaline(P<0.05).Conclusions:Itwasprovedpreliminarily thattheinformationresourcesinthei~fformationstorehouseoftheChinesemedicineswerecredible,theprincipleofscreenpres— entedinthispaperisvaluableforselectingtheChinesemedicineswithinanuneregulationeffects. Keywords:immuneregulationeffects;Chinesemedicineinformatics;radixpaeoniaealba;radixpolygonimultiflofi;rhizoma dioscoreae 近年,关于中药对机体免疫调节作用的研究越来 越多,许多学者关注对中药的实验药理学方面的研究, 所涉及的中药成分和研究方法各异.为探讨这些研究 的可比性,笔者利用信息学的原理,随机选取有2个或 2个以上单位独立完成,并发表2篇以上的支持有免 疫调节作用的论文的中药,采用统一方法进行实验研 究,为利用中药文献信息学的原理筛选具有免疫调节 作用的中药,深入探讨中药的免疫药理机制提供实验 收稿日期:2006…1128 基金项目:辽宁省教育厅资助课(990221063) 作者简介:李艳菊(1968一),女(满族),辽宁抚顺人,副高级检验技师, 硕士,研究方向:中药的免疫作用及规律. 通讯作者:刘辉(1960一).男,教授,硕士生导师. 依据. 1材料和方法 1.1中药的选择 于2000年版中华人民共和国药典随机选取10 昧中药,于中国期刊网查找相关研究文献,凡有两个或 两个以上单位独立完成,并发表两篇以上的支持具有 免疫调节作用的论文的中药,即纳入本研究,其中自芍 (RadixpaeoniaeAlba),何首鸟(RadixpolygoniMuhi- flori)和山药(RhizomaDioscoreae)3种中药符合入选 条件.3种中药购于大连医科大学附属医院,经大连 市药检所鉴定均为正品. 1.2实验动物 昆明小鼠,雄性,体重18,22g,由大连医科大学 实验动物中心提供. 辽宁中医杂志2007年第34卷第6期 13实验方法 1.3.1中药水煎剂的制备取3种中药各20g分别 置于lO00mL的玻璃烧杯中,各加水500mL;浸泡lh 后.置于火上煎熬.先武火煮沸以后改为文火,再煎 熬30min后熄火,用纱布滤出药液.再向各个烧杯内 加水300mL,用同样的方法煎熬.将2次滤液混合后 置于火J二,浓缩成lOOmL,制成含生药20%的药液. 将该药液密封,置于冰箱冷藏保存,以备用. 1.3.2卵清蛋白抗原的制备取市售鸡蛋,将壳击碎 后取卵清1mL,加生理盐水4mL. 13.3免疫取小鼠,注射卵清蛋白抗原,0.2 mL/只,注射部位为小鼠大腿内侧肌肉.第1次免疫 后1O天,进行第2次免疫,第2次免疫后4天采血. 1.3.4给药方法将小鼠随机分成4组,每组16只, 第1组给予生理盐水灌胃为对照组;第2组给予白芍 水煎剂灌胃,为自芍组;第3组给予何首乌水煎剂灌 胃,为何首乌组;第4组给予山药水煎剂灌胃,为山药 组.在第1次抗原注射后的第三天各组同时开始给 药,每天1次,每次0.5mL/只,连续7天. 1.4抗体效价测定 卵清蛋白抗体测定采用酶联免疫吸附试验 (ELISA).以卵清蛋白包被酶标板,测定相应抗体,抗 体水平以OD值表示.主要步骤如下:?用包被液稀 释鸡卵白(1:5),加到酶标板中,每孔0.1mL,置湿盒 中,4~C24h;次日用洗涤液充分洗涤3次,甩干;?将待 检血清稀释1O倍后加入酶标板中,每孔0.1mL,置 37"(2恒温箱30min;取出同前法洗涤3次,甩干;?将 羊抗鼠抗体(卫生部北京生物制品研究所出品),用抗 体稀释液1:1200稀释后,每孔加0.1mL,置37'(2恒温 箱30rain;取出同前法洗涤3次,甩干;?各孔加A,B 底物液(上海科华生物公司)各0.05mL,置暗处约 15min,其间不时观察;?各孔内加入2MH2SO40.05 M1,终止反应;用酶标仪(Biocell—ht2型)检测OD值 (450ran). 1.5统计分析 实验结果以均数?差(戈?s)表示,两组间 均值比较采用t检验,显着性水准P<0.05.用SPSS 软件协助完成. 2结果 3种中药均能使小鼠体内的卵清蛋白抗体显着升 高,与生理盐水组比较有显着差异(P<0.05),见表 1. 表13种中药xCtJ,鼠卵清蛋白抗体生成水平的影响(;?s) 拄:与对照组比较,P<0.05. 3讨论 传统中药的使用方法多是水煎剂口服,考虑中药 水煎剂已包含中药的各种成分,于是本文采用中药水 煎剂口服的给药途径.给机体注射抗原检查相应抗体 产生的水平,特别是采用酶联免疫方法进行检测可以 灵敏地反映机体的免疫水平的变化,在中药免疫调节 作用中已有成功地应用j,抗体的产生需要T细胞 ? 835? 的辅助和细胞因子的参加,因此检测抗体的水平也可 以在一定程度上反映细胞免疫的情况,是一种评价机 体免疫的有效方法.故本文统一采用抗原激发以酶联 免疫测相应抗体的方法对依据文献选出的中药的免疫 作用进行实验. 白芍系毛莨科植物的去外皮干燥根,有文献报导 白芍水煎剂对巨噬细胞功能有明娩的促进作用;对 白芍总苷(Totalglucosidcsofpaeony,TGP)的系列研 究,使白芍总苷的免疫调节作用得到广泛证实叫. 山药为薯蓣科多年生宿根蔓草植物山药的块根, 又名白苕,土薯,大薯,薯药】,山药富含多糖,可刺激 和调节免疫系统的功能【9】,山药磷脂类成分有提高免 疫功能的作用. 何首乌,又称首乌,赤首乌,为寥科植物何首乌的 干燥块根.何首乌有促进老龄小鼠胸腺呈明显形态和 超微结构逆转变化的作用?,有实验表明,何首乌能 增加老年大鼠胸腺胞浆蛋白和核酸含量[1引,从而起到 促进胸腺细胞增生,保护胸腺组织,提高免疫力的作 用.何首乌能使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显上 升',提高机体的非特异性免疫功能,同时还能提高 正常小鼠脾脏抗体形成细胞数l引,从而使机体特异性 免疫功能增强. 笔者的实验表明,口服以上3种药物水煎剂均能 使小鼠卵清蛋白抗体有明显的升高作用(表1),进一 步证实了3种药物的免疫调节作用.也说明了本文所 使用的验证试验方法有效.初步证明中医药信息库的 中药信息资源具有很高的可靠性,本文提出的筛选原 则(有2个或2个以上单位独立完成,并发表2篇以上 的支持有免疫调节作用的论文)对筛选具有免疫调节 作用的中药具有一定的指导意义. 参考文献 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:北京 化学工业出版社,2000:1—317 [2]杨光.党参多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床, 2005,21(4):39 [3]常波.灌服中药"三仙汤"对小鼠免疫应答的影响[J].中华实用 中西医杂,2004,4(5):676 [4]姜宪辉.补骨脂对激发态小鼠的体液免疫影响的实验研究[J].辽 宁中医学院,2004,6(2):116 [5]梁雯若.白芍抗炎免疫药理作用研究[J].新中医,1989,21(3): 51 [6]李俊.白芍总苷对B淋巴细胞增殖和白细胞介素l生成的调节作 用[J].中国药理学和毒理学杂志,1994,8(1):53 [7]划烨.白芍总苷负调节大鼠腹腔巨噬细胞诱生TNF的定量分析 [J].数理医药学杂志,1998,I1(1):1 [8]明-李时珍.本草纲目(下册)[M].北京:人民卫生出版社. 1982:1676 [9]蒋艳玲.怀山药多糖对衰老小鼠免疫器官组织的影响[J].河南中 医药学刊,2002,17(6):18—19 [10]王苏玲.炮制对山药磷脂成份的影响[J].中国中药杂志,1993, 18(6):340 [11]魏锡云.黄芪和何首乌对老龄小鼠胸腺影响的超微结构研究 [J].中国药科大学,1993,24(4):238 [12]金国琴,赵伟康.首乌制剂对老年小鼠胸腺肝脏蛋白质和核酸含 量的影响[J].中草药,1994,25(4):590 [13]应久皓,周学优,朱秀琴.何首乌炮制品药理临床研究[J].中国 中药杂志,1992,17(12):722 [14]周志文,周金黄,邢善田.何首乌浸膏提取物对小鼠T,B淋巴细 胞免疫功能的作用[J].中药药理与临床,1989,5(1):24—25