【doc】丝裂霉素C眼用膜剂的制备和质量控制

【doc】丝裂霉素C眼用膜剂的制备和质量控制 丝裂霉素C眼用膜剂的制备和质量控制 第31卷第2期 2?1年4月 温州医学院h?ofW?Medicalc0【【祥.3lNo.2 .2001 3讨论 逆转录.聚合酶链反应(Rr_l?R)是检测HCV感 染最常见的方法,已广泛应用于丙型肝炎的实验研 究和临床诊断.RT-PcR的关键步骤之一是有效抽 提模板HCV-mRNA,它将直接影响cDNA的合成,关 系到整个实验的成败.目前常采用酚/氧仿抽提法 蛋白酶K消化法等经典方法提取,纯化RNA.这些 方法在制备过程中涉及饱和酚变性,冗长乙醇沉淀 等步骤,极易出现RNA丢失,污染,降解而影响其得 到率,纯度和完整性.为了解决这一问,近几年来 国内外文献中不断有新的方法报道.如采用固相载 体法是分离生物分子的—个新途径,它能牢固吸附, 联结生物分子,且很容易从反应液中分离,减少或避 免液相分离技术的弊端,重复性强,产率高,纯度好. 磁捕法分离RNA[就是其中一种备受人们关注的 方法,其原理是基于碱基互补原理及亲和色谱技术, 根据HCV核酸序列出一段与之互补的带有生 物素标记的寡核苷酸探针,在溶液中与靶核酸 (HCV.-A)杂交,加入亲和素包被磁珠.通过生 物素和亲和素之间的特殊结合力,磁珠牢固连接靶 核酸一生物素化探针杂合体,用磁架收集后,经低盐 缓冲液洗涤,去除蛋白质,DNA及非特异核酸,即得 所需纯化的特异mRNA分子l4J.这种方法所提取的 RNA与经典法提取的RNA有较大的区别.由于它 是用~~-i-杂交原理分离RNA,因此,得到的RNA几 乎全部为HCV-RNA,而经典法分离的RNA为血清 总RNA.磁捕法提取的RNA用于RT-PCR检测时, 不会出现非特异性扩增,增强了测定的特异性.本 实验检钡j50铡抗.HCV阳性血清的肝病患者,HCV. RNA阳性34例,血清HCV-RNA阳性率为68%,结 果稳定.对34例HCV.RNA阳性患者同时作蛋白酶 K消化法,提取HCV-mRNA检测HCv患者的对比研 究显示,HCV.RNA阳性仅为28例,两法经精确度概 率检测差异十分显着(P<0.01).表明磁捕法操作 简便,快速,重复性好,检测HCV-RNA阳性率高,更 适于临床标本检测应用,具有很好的实用价值. 4参考文献 [1]李兴,张树林应用pcR检测丙型肝炎病毒P,NA的影响因素 [J].国外医学临床生物化学与检验学分册,1996,17(1):13 [2]王传,黄超,孔宪淘.等.血清丙肝病毒RNA二种提取方法的比 较[J].江西医学院,1997,37(1):59 [3]BoomR.SdCA”,s盥曲删.畦z1.Rapand凼叫emethodfor Fcxificatlonnuelodc[J]JCllmMiembioi,1990,28:495. [4]So/xl~E,K哪印爆L方法.方法:烈聚乙烯醇作为膜荆基质,制备 丝裂霉素C眼用膜荆,井用紫外分光光度法于365rm赴剥定其含量.结果:奉法所制的膜荆膜质柔软,平均 回收率为99.46%,变异系敷(R5D)为0.94%.结论:盟裂霉素C眼用膜荆可有效地防止药物含量下降.增强 了疗效,利于桩束椎广使用. [关键词]丝裂霉素c;聚乙烯醇;眼用膜荆:质量控制 [中圈分类号]R998.1[文献标识码]B[文章编号]100D一2~38(2001)02—0125—03 丝裂霉素C(~tomyclnC)是一种抗肿瘤抗生素, 经组织培养证明,它是成纤维细胞增殖的强力抑制 剂,强度是5.Fu的1OO倍,眼科临床常将血用于青 收稿日期:20o0—07—07 作者简介:王志强(1975一)男,浙江瓯j每人,药师. 光眼手术中,以减少球结膜瘢痕的形成,促进滤过泡 形成并降低眼压等.近几年来,国内外大量文献肯 定了其在眼科应用中的疗效[1.但由于丝裂霉素C 水溶梭极不稳定,目前尚无专供眼科使用的制剂上 市,本实验选用PVAIB8作为基质,制备丝裂霉素c 126? 膜剂,如下. 1材料,方法和结果 温州医学院第31卷 11仪器与试药15V-756型分光光度计(上海第 三分析仪器厂生产),PVA17.88(北京有机化工厂生 产20001103);丝裂霉素(浙江海正药业股份有限公 司生产,0004~0),医用甘油,药用酒精和适量蒸馏 水;成年期大白兔4只,体重2—3kg,由温州医学院 动物实验中心提供. 1.2处方和制备 1.2.1PvA1Bs的预处理:PvAlB8用85%乙醇浸泡 24h后倾出乙醇,再用85%乙醇洗涤2次,晾干备 用. 1.2.2玻璃板预处理:玻璃板以75%乙醇涂擦一 遍,趁湿铺上一张两边宽于玻璃板的聚乙烯薄膜,驱 出残留气泡,使薄膜紧密平展地贴于玻璃上,再把两 边宽出部分贴在玻璃板反面,使薄膜固定备用. 1.2.3处方筛选:方法按文献[2]将PvA1翳,甘油 和水按不同质量比分称取5份,80?水浴加热,混合 均匀,在预先铺有塑料薄膜的玻璃板上涂膜,待膜干 后,比较其外观,透明度,柔软性和成膜性,并各取适 量,观察其水溶性,初步筛选出服用药膜配方. 1.2.4处方:PVA17.883g,丝裂霉素C10rog,甘油0.7g, 蒸馏水20肛d. 1.2.5制备:按处方量取PVAI7.?和甘油,加适量蒸 馏水浸泡24h,使PVA18完全湿润膨胀后,于水浴 上加热溶解,制成成膜材料浆槭,待用.另按处方量 精密称取丝裂霉素c,加蒸馏水适量溶解,加入成膜 材料浆液中搅匀.置于(70o?5o)水浴保温脱泡1h, 将膜料倒入预先制好的玻璃板上,手工制膜 200er~d,待膜自然干燥24h后,于紫外灯下灭菌 30min,切成0.5em×1.0cm大小,包封.每片含药 25p.g,相当于0.o2%丝裂霉素c滴眼液2,3滴. 1.3质量控制 13.1性状:本品为淡蓝色半透明薄膜,有一定韧 性. 1,3.2鉴别:取含量测定项下的溶液按分光光度法 测定,在365nm波长处有最大吸收. 1.3.3重量差异限度检查:符合中国药典二部 (1995年版)膜剂项下有关规定. I3.4捌定波长的选择:按处方量称取丝裂霉素 C,加蒸馏水配制成10tzg/ml的溶液;另取处方量的 PVA{弼和甘油,加蒸馏水稀释成与上掖相同的浓 度,分别以蒸馏水为空白,溶液在紫外区扫描,丝裂 霉素c在365t~a处有最大吸收量,而PVA等成膜材 料在此波长处吸收量极小,可忽略不计. 1.3.5标准曲线的绘制:精密称取105?干燥至恒 重的璧裂霉素C10mg,置于100ml容量瓶中.用蒸 馏水稀释至刻度,摇匀,精密吸取稀释液,再用蒸馏 水稀释成2,15t,e/ml系列浓度,分别以蒸馏水为空 白,按紫外分光光度法于365nm波长处测定吸收度, 并经计算得出回归方程:C=16.67A一0.06937(r= 0.9999,rl=6),表明丝裂霉素C在此范围内线性关 系良好. 1.36回收率试验:精密称取丝裂霉素C对照品, 加人相应量的无丝裂霉素的空白药膜中,用蒸馏水 稀释至一定浓度,以溶剂为空白对照,于365nm波长 处测定其含量,计算得回收率见表1. 表l回收率结果 1Rdresult ~a*ety?.d 由盯(埘)mEmb(;)(%)recovery(%)v丑;吣(锚j 1.3.7样品含量测定:取0.5era×1.0cm药膜4o 片,精密称定,剪碎置于烧杯中,加蒸馏水浸泡.待 溶解后,转移至100m/容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻 度,摇匀,于365nm波长处测定其吸收量,纳入回归 方程计算含量,测得3个批次的试制品结果分别为 标示量的98.3%,99.7%,99.5%. 1.3.8刺激性试验:按方法[3],取大耳白兔4只, 左眼放置药膜一片,右眼作空白对照,给药后使眼睛 被动闭合5—10分钟,连续给药一周,绐药后6, 24,48,72小时至7天跟的局部反应情况.结果如表 2所示,除一只白兔角膜稍有浑浊,血管充血呈鲜红 色且有少量分泌物外,其他白兔左右眼差异均无显 着性,按跟刺激性评价标准,该眼用药膜无明显刺激 性. 表2用药后局部反应情况 Tab2A曲trottedvfithmed~elne n.田n?hlddD cb目?s自d? 2讨论 据杨德旺主编的《眼科治疗学》介绍,目前服 舛 钟 8J蜥粥栅螂 12291椭枷蝴瑚 第2期王志强等:丝裂霉素c眼用膜荆的制蔷和质量控制127? 科在使用丝裂霉素C滴跟时直接用蒸馏水溶解,由 于丝裂霉索C水溶液极不稳定,0.04%丝裂霉素C 水溶液放置一天后,水解率约达20%.显然直接用 丝裂霉素C水溶液滴眼有明显缺陷,通过制成眼用 膜剂,能有效克服其水溶液不稳定的缺点. 制备眼用膜剂应采用无菌操作法,在100级净 化工作台上铺膜,制成的膜剂厚度应在0.08ram为 宜,用紫外分光光度法测定含量,方法简便,适于药 厂和医院进行快速分析制剂. 3参考文献 1]李建军.张铁民.墼裂霉煮C在眼科的应用进展[J]国外医学 眼科学分册.1998.22(1){?一24. [2]罗明生.高天惠.药剂辅料太全[M].成都:四川科技出版社, 1993.88—89 [3]衰伯俊新药评价基础与实践[M].北京:人民军医出版杜. 1998123—124 _4]扬德旺眼科治疗学[M].北京:人齄卫生出版杜,1983155 (本文编辑:金永勤) XY单纯性性腺发育不全并性腺母细胞瘤及无性细胞瘤一例 案报道 赵宇’,王宗教 (1.温州医学院第二附属医院妇产科,浙江温州325000;2.温州医学院第二附属医腕病理科,浙江温州325027) [关键词】性雎发育障砰症,45,xY;性腺母细胞瘸;无性细胞瘸 [中围分类号】R737[文献标识码】B[文章编号】 2138{2001)02—0127—01 1000— 患者,19岁,社会性别,女性.因阴蒂肥大,乳房发育欠 佳人院,无月经来潮,体格健壮,语音粗钝,性格如男孩,口周 有少许胡须. 查体:身高171m,体重52,皮下脂肪少,双乳房发育不 良,乳晕稍淡,两侧腹股沟及大阴唇未扪及包块阴毛倒三 角形,阴蒂肥太长3.0em左右,处女膜完整,肛检耒扪及宫颈 宫体,可扪及紧索状组织,右附件区可及3.0erax3.0era大小 肿块.染色体检查为46,xY,睾酮升高.雌激素下降.B超示 子宫幼稚,右附件混合性包块.诊断为XY单纯性性腺发育 不全.在连续硬膜外麻醉下剖腹探查,见子宫幼稚,右卵巢 肿瘤3.0amx3.0era大小,灰白色,光滑,包膜完整,左侧正 常,两侧输卵管正常.行两侧附件切除术,术后给予倍美力 及安宫黄体酮人工周期替代治疗. 病理检查:大体检查右附件处见一灰白色肿块约4.0era x2.5emx2.0em大小,表面光滑,包膜完整,切面灰白略带黄 色,质中,附有输卵管样条索组织一条.左输卵管组织一条, 边上见1.0amx1.0era灰白色组织,切面颗粒状.镜下检查 双侧输卵管结构正常.双卵巢样组织及肿块切片见肿瘤组 织由多个圆形巢状韧组成,周围纤维分界清.圆形巢中央为 散在的大而圆的生殖细胞的,胞质丰富,另见支持—颗粒细胞 样细胞环绕生殖细胞或玻璃样物质形成腔,似Call-Exner 收稿日期:2000—12—04 作者筒介:赵宇(1973一),男.浙江温州人,住院医师. 小体.瘤巢内外散在大小不一的钙化灶.另一切片全为生 殖细胞构成,成片状分布,胞质丰富而透明,核居中,生殖细 胞闻见多少不等的细胞散在,偶见多核巨细胞,性腺边缘见 胶元带,似卵巢白膜组织,但无卵泡系统.病理诊断:双侧性 腺母细胞瘤伴一铡无性细胞瘤. 讨论xY单纯性性腺发育不全又称swy啪咖嗡患者由 于染色体出现基因突变,胚胎期的睾丸不发育,不分泌睾丸 酮和副中肾管抑制因子,因而中肾管退化.不再发育成男性 生殖器.而副中肾管由于缺乏副中肾管抑制因子而发育成 女性生殖系统其临床特征是,多发生于年龄小于笛岁的 青年,常因原发闭经就诊,身材高大,乳房发育欠佳,内外生 殖器为女性,但发育差,属于性分化异常,常伴内分泌异常, 主要为高雄澈素,低雌激素等,如本例. 1953年s?首先对性腺母细胞瘤进行描述.肿瘤继 发于旺胎性腺或发育不良性腺,由生殖细胞和性腺样细胞组 成.90%以上患者具有Y染色体,尤以46,xY核型多见.如 本倒为典型的xY单纯性性腺发育不全并双侧性腺母细胞 瘤.性腺母细胞瘤分单纯型和混合型,后者指混合有生殖细 胞来源的其他肿瘤成分,60%为无性细胞瘤,lO%为内胚窦 癌,胚胎型癌及各型畸胎瘤等,混合型常具潜在恶性或恶性, 预后欠佳.故诊断明确后应及早行两铡性腺预防性切除. 本倒术后7月,无肿瘤复发征象,有规则月经来潮,目前尚在 随访中. (本文编辑:毛文明)