荚膜组织胞浆菌和马尔尼菲青霉菌鉴定分析

荚膜组织胞浆菌和马尔尼菲青霉菌鉴定分析 荚膜组织胞浆菌和马尔尼菲青霉菌鉴定分 析 影像与检测 荚膜组织胞浆菌和马尔尼菲青霉菌鉴定分析 张淑琼'董云华刘海云李明 (1.昆明市盘龙区人民医院检验科云南昆明650011;2.云南省第一人民医院检验科云南昆明650021) 【摘要】目的整定引起组织胞浆茵病和马尔尼菲青霉菌病的对应病原茵荚膜组织胞浆茵(Hc)和马尔尼菲青霉菌(P.mar).方法 分别把骨髓直接涂片瑞氏染色(Wright'Sstain)~t且接种于双相培养基35?孵育,待生长后涂片检查并转种血琼脂和沙保弱培养基上, 分别于25?及35?孵育,观察生长情况及茵落形态,进行涂片显微镜检.对二者作认真细致的比较.结果HC在骨髓直接涂片瑞氏染色中 均呈大小一致的圆形或卵圆形孢子,胞浆多呈半月形并集中于孢子一端,孢子边缘有染色过程中皱缩所致的未染色区域(似荚膜)oF.mar在 涂片中可见具有诊断意义的有横隔腊肠形孢子细胞或椭圆孢子细胞;HC在沙保弱培养基(sDAJ)25?条件下呈典型的梨形厚壁孢子和齿轮 状大分生孢子.P.mar25?条件下则呈现具特征性水溶性玫瑰红色素及镜下典型的的双轮生青霉帚状枝.结论HC和P.ilia在骨髓涂片 镜检的典型形态上有区别,真茵培养是确定并能严格区分此二者的可靠方法. 【关键词】荚膜组织胞浆茵马尔尼菲青霉茵 【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】1674—0742(2010)04(c)一0166--02 荚膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulatum,H.cap)~马尔尼菲 青霉菌(Penicilliummameffei,P.mar)都是温度依赖型的双相真菌, 由于两种真菌引起的疾病临床表现和病理表现非常相似,常引起误诊 和误报.因此,对于在组织中(一般为血液,骨髓]出现酵母疑为此二者 时.不仅在形态上应进行认真甄别,而且还应进行病原的培养做确认鉴 定.我们从血液f42例患者的骨髓中培养出荚膜组织胞浆菌和马尔尼菲 青霉菌各1例,现报道如下. 病人基本情况.组织胞浆菌病患者:男,36岁,云南罗平县工 人.持续发热,消瘦2月余,巩膜及皮肤黄疸.腹胀20余天.自2001年 5月起出现无明显原因的发热,以夜间及清晨为重.就诊前在当地 某医院诊断为"伤寒"并进行对诊治疗无效且症状加重.入院前门 诊检查B超提示肝脾肿大,腹水.第一肝门区胰头周围多个淋巴结 肿大.腹壁静脉显露.全腹压痛,反跳痛.下肢浮肿.浅表淋巴结无 肿大.WBC7.9×10/L,PLT20×l0/L,Hbl00g/L.金标法抗一HIV 检测阴性.CD4:37.6%,CD8:31.2%.抗一HEVIgM]~N性.经确诊后 用伊曲康唑抗真菌及其它对应治疗有所改善转院.于2002年2月,到 省一院复诊为正常,体重增加20多斤.主诉及其它身体情况良好. 马尔尼菲青霉菌病患者:男,40岁,云南广南县干部,发热,头痛 一 月多.体重减轻,到省一院就诊前有矛龈出血史.曾在某医院诊 断为"肺结核"并抗痨治疗无效.入院肝脾轻度肿大,右颈前淋巴结 肿大如黄豆,有压痛,边界清,活动好.皮肤可见散在瘀斑,瘀点,以 四肢为甚.B超提示肝脾肿大,未见腹水.WBC4.4×10/L,PLT54 ×109/L,Hbl30g/L.金标法抗一HIV检测阳性.CD4:1.43%,CD8: 49.3%.经确诊后用氟康唑抗真菌治疗明显改善出院. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1标本来源此2例病人均为省一院血液科住院患者. 涂片物及培养物均取自患者骨髓. 1.1.2培养基沙保罗培养基(SDAI),根据配方自制;双相 培养瓶(MLI)为进口成品,购自生物?梅里埃公司;血琼脂采用进口 哥轮比亚琼脂(Columbiaagar)j/15%~g羊血配置;尿素酶培养基为 国产柯氏尿素琼脂,按常规配置后分装为斜面.小培养后染色用 乳酸棉兰液(LPCB)染色镜检. 1.2方法 1.2.1骨髓涂片穿刺取骨髓少许,涂片,固定,瑞氏染色, 166中医疗CHINAFOREIGNMEDICALTREATMENT 显微镜下观察. 1.2.2真菌培养取骨髓组织少许分别接种于MLI培养基 内,在35?中培养,待其生长后再移种于SDAI,哥轮比亚血琼脂各 2份,分别置于25?和35?2种温度环境孵育,一定时间观察菌落 形态及镜下菌体形态特点.组织胞浆菌取双相培养基琼脂面菌落 作尿素酶实验.马尔尼菲青霉菌直接取双相培养基琼脂面菌落在 SDA上进行小培养观察帚状枝结构. 2结果 2.1骨髓涂片(×1000):按常规瑞氏染色 组织胞浆菌:镜下可见巨噬细胞内大小基本一致的圆形或卵 圆形孢子,直径约2,4um,孢子内胞浆多呈半月形并集中于孢 子一端,孢子边缘有未染色区域似荚膜(实为细胞壁在染色过程 中皱缩所致).孢子一端稍尖,另一端稍圆,大多聚集成群,充满胞 浆,可有的孢子位于细胞外(图1). 马尔尼菲青霉菌:镜下可见巨噬细胞内圆形或卯圆形孢子,但 大小不一致,直径从1,8m不等,可见到蜡肠样孢子;也可见到 中间有横壁的孢子和分裂相孢子(裂殖方式繁殖,一分为二).此 有横壁的孢子或分裂相孢子具有极大的诊断价值(图2). 2.2真菌培养特征 组织胞浆菌:种入双相培养瓶35?培养.第8天在琼脂面及液 体呈良好生长.无溶血,培养液中有灰白色,大小不等细颗粒.多 数沉于底部,部分悬浮在培养液体中,少数浮于液面.琼脂上长有 约0.2,0.8ram的大小不等灰白色边缘不齐菌落.摇动液体不能冼 落菌苔,难挑取.涂片见菌丝及孢子.革兰染色见到厚壁孢子(图 5)转出到哥轮比亚血琼脂35?培养培养呈酵母相,10d左右呈褐 色,表面有皱折酵母样菌落.涂片为圆或近圆酵母孢子.将此血平 板又置25?培养又返回呈菌丝相,培养10d左右,菌落呈现白色,菌 落表面羊毛绒状(图3).同时转入SDAI平板一份,25?培养20d左 右.取菌落涂片则可看见芽生孢子,厚壁孢子,甚至齿轮状大分生 孢子(图6). 马尔尼菲青霉菌:种入双相培养瓶35?培养.第5天明显浑浊, 第7d在琼脂面及液体呈良好生长.培养液中呈均一的絮状沉淀生 长,可见到其间连接有微红色,细小,表面"刺"样小突起的颗粒.琼 脂上长有大小不均,微红色,扁平,表面有丝的菌落.摇动液体不能 洗落菌苔,难挑取.涂片可见大量菌丝及少量孢子.转出一份到哥