柴莪退热栓抗病毒实验研究

柴莪退热栓抗病毒实验研究 柴莪退热栓抗病毒实验研究 第23卷第3期 2005年3月 中医药学刊 CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE Vo1.23NO.3 Mar.,2005 文章编号:1009—5276(2005)03—0523—02 柴莪退热栓抗病毒实验研究 奚小土,罗翌,李际强,邓远辉,姚崇舜 (1.广东省中医院急诊科,广东广州510120;2.沈阳药科大学,辽宁沈阳110016) 摘要:目的:用现代实验学方法对柴莪退热栓体内外抗流感病毒的实验观察,探讨柴莪退热栓抗流感 病毒作用的机理,为临床治疗病毒性上呼吸道感染提供实验依据.方法:接种流感病毒FM1株于MDCK(狗 肾细胞).观察柴莪退热栓体外抗流感病毒作用;体内抗病毒实验以病毒滴鼻感染小鼠,观察柴蓑退热栓对肺 指数,血凝滴度的影响.结果:体外实验通过毒性实验观察到药物煎剂在MDCK上的半数毒性浓度为 12.5rag/mL,在该浓度下,药物对甲型流感病毒无抑制作用.体内实验研究明柴莪退热栓的肺指数抑制 率为20%.提示本药在体内有明显的抗病毒作用.结论:柴蓑退热栓的抗病毒作用可能需要体内免疫 的参与. 关键词:柴莪退热栓;感冒;抗病毒实验 中图分类号:R—O5文献标识码:A 柴莪退热栓由柴胡,莪术,大黄,石膏等药组成,临床 用于病毒性上呼吸道感染引起的发热咽痛等症.笔者对 其进行了抗病毒作用(体外,体内)的实验研究,并与阳性 对照药病毒唑进行了比较. 1材料 1.1体内实验动物:4O只NIH小鼠由广州中医药大 学实验动物中心提供,雌雄各半,体重13,15g.实验动 物质量和条件合格证书:26—02A028,26一O2B023.饲 养环境:室温为23?21E.相对湿度为75?10%. 毒种甲1型流感病毒FM1株,由中国药品生物 检定所提供,经小鼠增强毒力后,于鸡胚尿囊腔传代2 次.并测定其半数致死量. 药物柴莪退热栓各有效成分柴胡,莪术,生石 膏,生大黄等生药(按柴莪退热栓中原方各药比例及相同 含量)购自广东省中医院.阳性对照药物病毒唑(湖北医 药工业研究所,批号:020804). 1.2体外实验药物:同上.毒种:甲1型流感病毒 FM1鼠肺适应株,由中国医学科学研究所生物技术研究 所提供.于MDCK狗肾细胞传代,以病变及鸡红血球血 凝法来判断其滴度,在351E,5%cch孵箱中培养. 细胞:狗肾细胞株(MDCK),由广州中医药大学热带 病研究所实验室保存. 2方法与结果 2.1体内实验按卫生部<中药新药研究指南>…要求 进行. ?稀释病毒实验前,取毒种用流水冲浸融化,以无 菌盐水稀释成每0.05mL含15个LD放冰水中保存. ?感染小鼠把小白鼠随机分组,每组10?1只.分 阳性药物组(病毒唑),病毒对照组及实验药物组,不拘雌 收稿日期:2004—09—21 基金项目:广东省中医药管理局立项课题 作者简介:奚小土(1975一),男,医师,硕士. 雄.在乙醚轻度麻醉下.用已滴定流感病毒液滴鼻感染, 每鼠4滴,约0.05mL.同时设正常小鼠对照组8只. ?给药柴莪退热栓生药煎成100%原药(1g/ mL),以人剂量lg/kg给药,扩大1O倍,即1Og/kg,小鼠 灌胃0.14mL.阳性药物(病毒唑)对照组用药量为 0.07g/kg.无菌过滤.灌胃每次0.2mL.以上药物均在病 毒攻击前一天开始给药.共给药5天,每天1次. ?测定肺指数感染后4天,杀剖小鼠,杀剖前禁食 禁水4小时以上.称鼠体重,腋下动脉放血处死后取出 鼠肺.记录病变程度,将肺放在盛有0.9%生理盐水的平 碟中洗涤两次,用吸水纸吸干表面水分,称出肺重.按以 下公式计算出肺指数与肺指数抑制率:肺指数=[小鼠肺 重(g)//J~鼠体重(g)]×100肺指数抑制率=[(对照组平 均肺指数一实验组平均肺指数)/x~照组平均肺指数]X 100. ?统计学处理对所得实验数据进行t检验,求统 计学的显着性,凡P值小于0,05,定为此药物有效. ?实验结果病毒唑,柴莪退热栓的肺指数抑制率 分别为2O%,2O%.阳性药物病毒唑的肺指数与病毒对 照组相比,P<0.01;柴莪退热栓与病毒对照组相比(P< 0.05;见表1). 表1柴莪退热栓对小鼠实验感染流感病毒 抑制作用(?S) 注:P<0.05. ?结论根据对小鼠感染甲1型流感病毒的体内 作用研究结果,柴莪退热栓有肯定的抗病毒作用. (下转第528页) 中 医 药 523 学 刊 中医药学刊2005年第23卷 三之气,天政布,湿气降,地气腾,雨乃时降,寒乃随 之.感于寒湿,则民病身重肘肿,胸腹满. 四之气,畏火临,溽蒸化,地气腾,天气否隔,寒风晓 暮,蒸热相薄,草木凝烟,湿化不流,则白露阴布,以成秋 令.民病腠理热,血暴溢,疟,心腹满热,胪胀,甚则目f于月中. 五之气,惨令已行,寒露下,霜乃早降,草木黄落,寒 气及体,君子周密,民病皮腠. 终之气,寒大举,湿大化,霜乃积,阴乃凝,水坚冰,阳 光不治.感于寒,则病人关节禁固,腰胜痛,寒湿推于气 交而为疾也."((素问?六元正纪大论)) 其中,"二之气"是从春分日(3月21日)开始,至小 满(5月21日)为止,其所论"其病温厉大行,远近咸若", 是指此间将有大的温疫流行,并且虽然流行范围很广,但 是其症状远近相似.而事实,这段时间正是SARS (非典)流行最严重的时期,与运气学说的预测正好相符, 足可见运气学说科学预测的准确性. 由于癸未之年气运相合为运生气,属小逆之年.可知 全年气候变化较为剧烈,故(素问?六元正纪大论)中说: "癸未癸丑岁上太阴土中少徵火运下太阳水寒化雨化 胜复同,邪气化度也,灾九宫.雨化五,火化二,寒化一, 正化度也.其化上苦温,中成温,下甘热."指出癸未和癸 丑之年气候寒水偏胜,土湿来复,出现气候异常变化及自 调现象,灾害易出现在南方.同时,还指出了在对疾病的 治疗及饮食调理方面所宜的药物及食物,这对临床上防 治疾病的发生具有重要的指导意义. 可见,了解每年的运气情况,就能够帮助我们了解该 年的气候变化规律与疾病流行趋势,以便做到以预防为 主,充分警惕并防范有关疫情的发生和传播. 总之,运气学说充分反映出中医学理论体系中"天人 相应"的整体观念,突出了自然变化和人体生命活动的各 种节律,在中医基本理论体系中,占有极其重要的地位. 运用中医运气学说,便可对sARS(非典)类疾病的疫情, 做出科学的预测.这充分体现出中医学"治未病"的预防 思想,突显出中医学的高明之处,也使人们开始反思运气 学说极其珍贵的实用价值.因此,(素问?六节藏象论)中 指出:"不知年之所加,气之盛衰,虚实之所起,不可以为 工矣."即强调若不懂得每年主客加临之期,运气太过与 不及等运气情况,就不能成为一名合格的医生.运气学 说中所包含的精深理论和珍贵的实用价值值得我们进一 步深入探索和研究. 参考文献: [1]方药中,许家松.黄帝内经素问运气七篇讲解[M].第4 版.北京:人民卫生出版社,1984.109,406 [2]覃贤茂.黄帝内经与运气的推算[M].北京:中国友谊出版 公司,1993.223,225 [3]田合禄,田蔚.中医运气学解秘[M].太原:山西科学技术 出版社,2002.393,412 (上接第523页) 2.2体外实验 ?柴莪退热栓毒性实验在96孔细胞微量板上进行, 每孔0.1mL.细胞数为3×10个/mL,待24小时长成 完整单层后,将药液用维持液稀释成不同浓度,抛掉原培 养液后将不同浓度的药液加入细胞孔中,每孑L0.1mL, 以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞的无毒 浓度界限.同时在相应敏感细胞上攻击病毒之TCID50. 实验时设病毒对照,细胞对照,药物毒性对照及(病毒唑) 对照,置于37?,5%coz培养箱内,每天在倒置显微镜 下细胞病变并记录其药物对细胞的毒性作用,连续观察 7天后终止实验. ?将培养7天后的细胞上清以50ul/孔移入微量血 凝板后,每孔加入0.5%的鸡红细胞悬液,设盐水对照. 室温作用30分钟后,根据其血凝结果判定药物的抗病毒 作用.结果判定标准:"一":无血凝,红细胞积聚在中心 成一规则圆点;"?":圆点边缘有不明显的小块;"+":红 中细胞凝集,占体积的25%;"++":红细胞凝集占整个微 磊孔板的50%;"+++":红细胞凝集约占整个底层的 75%;"++++":红细胞凝集,均匀铺在板底. —— ?实验结果结果表明:通过毒性实验观察到药物 煎剂在MDCK上的半数毒性浓度为12.5mg/mL,在该 浓度下,药物对甲型流感病毒(FM1)无抑制作用,阳性药 物病毒唑半数毒性浓度为25ug/mL,该浓度下药物对 FM1有抑制作用,阳性药物成立.实验结果见表2. 表2药物在MDCK上对病毒致病变抑制作用 药物200rag/mL**药物200ug/mL一一 100**100一一 50**50一一 25**25一十 12.5++12.5++ 6.25++6.25++ 3.125++3125++ 1.56++1.56++ 注:+:表示不抑制;一:表示抑制;*表示药物毒性. 3讨论 通过体内实验证明,柴莪退热栓具有明显抗病毒作 用,而体外细胞培养甲型流感病毒培养液血凝滴度实验 未能显示柴莪退热栓具有直接的抑制病毒作用.结合本 次体内实验,笔者推测柴莪退热栓的抗病毒作用可能与 其调动体内免疫抗感染能力有关.柴莪退热栓体内抗病 毒作用为其临床用于上呼吸道病毒感染疾病的发热等病 症的治疗提供了现代药理学依据. 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部药政管理局,中药新药研究指南, 1994.118 [2]李仪奎,王钦茂.中药药理实验方法学[M].上海:上海科 学技术出版社,1991.294,295