微柱凝胶法检测ABO母婴血型不合孕妇血清抗-A（B）IgG效价1154例的结果分析

微柱凝胶法检测ABO母婴血型不合孕妇血清抗-A（B）IgG效价1154例的结果 微柱凝胶法检测ABO母婴血型不合孕妇血清抗-A(B)IgG效价1154例的结果分析 实用医技杂志2011年8月第l8卷第8期JournalofPracticalMedicalTechni?ues,Aust2011,Vo1.18,N0.8 微柱凝胶法检测ABO母婴 血型不合孕妇血清抗一A(B)IgG效价 1154例的结果分析 中山大学附属第三医~(510630) 廖思红邹勇袁青覃雪玲刘文达 ? 805? 【摘要】目的探讨微柱凝胶法(MGT)检测1154例ABO母婴血型不合孕妇血清抗一A(B)IgG效价的临床 意义.采用MGT法对1154例ABO母婴血型不合孕妇进行产前血清抗一A(B)IgG效价测定,分析血清抗一A (B)IgG效价与新生儿溶血病(HDN)发生的相关性.结果l154例孕妇在孕20周首次血清抗一A(B)IgG效价测定 ?1:64者占72.36%(835/1154),其中O—A型,O—B型和O—AB型夫妇抗一A(B)IgG效价的阳性率分别为72.48% (366/505),66.45%(313/471)和80.90%(144/178),各组阳性率差异有统计学意义=13.765,P<0.O1).在产前第30周 左右对1154孕妇中的340例进行抗一A(B)IgG效价的二次随机测定,发现50.50%(51/101)孕妇抗体效价从阴性转 为阳性,51.80%(129/249)孕妇(效价?1:64)抗体效价继续上升,其中.一A型,O—B型和O—AB型夫妇抗一A(B)IgG 效价上升率分别为53.74%(79/147),50.00%(77/154)和56.41%(23/39),各组间差异无统计学意义:1.130,P> 0.05);25例发生HDN的患儿母亲产前抗一A(B)IgG效价测定均?1:256,其中有 12例血型抗体效价持续升高达4倍 以上,1例效价<1:64.结论ABO母婴血型不合孕妇血清抗一A(B)IgG效价水平 与HDN的发生显着相关,利用MGT 检测孕妇血清抗一A(B)IgG效价有助于HDN的早期诊断和干预. 【关键词】血型不合;幼红细胞增多症,胎儿;血清学试验;微柱凝胶法 Analysisofresultsofsernmanti—A(B)IgGtiterdetectionin1154casesmaternal— fetalABObloodgroup incompatiblepregnantwomenbymicrocolumngeltechnologyDSi— hong,ZOUYong,YUANQ,QIN Xue— ling,LIUWen-d~TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat-3enUniversity,Guangzhou51O630,China 【Abstract】 objectiveToinvestigatetheclinicalsignificanceofdetectionthetiterofserumanti— A(B)IgGin 1154ABObloodgroupincompatiblepregnantwomenbymicrocolumngeltechnology(MGT).MethodsDetectthetiter ofserumanti— A(B)IgGin1154casesABOincompatiblepregnantwomen.andevaluatetherelationshipbetweenthetiter ofserumanti—A(B)IgGandhemolyticdiseaseofnewborn 【HDN).Results72_36%oftotal1154casesABO incompatiblepregnantwomenforthefirsttimedetectionat20weekspregnanthavethetiterofserumanti—A(B)IgG higherthan1:64,inwhichthepositiverateinO/A,O,rBandO/ABtypecouplegroupaccountfor72.48%(366/505), 66.45%(313,471)and80.90%(144/178),respectively.Therewasstatisticallysignificantdifferencebetweenthepositive rateofeachgroups(=13.765,P<0.01).Thetiterofserumanti— A(B)IgGin340casespregnantwomenin1154at about30weekspregnantwasrandomlydetectedforthesecondtime.Itwasfoundthatthetiterofserumanti—A(B)IgG in5O.5O%(51/101)pregnantwomenwastransformedfromnegativetopositive,andthetiterin51.8O%(129/249) pregnantwomenwasinereasedcontinuouslyinwhichtherateofriseof3groupsof0/A,O/BandO/ABtypeswere 53.74%(79/147),50.O0%(77/154)and56.41%(23/39),respectively.Therewasnostatisticallysignificantamong3 groups(=1.130,P>0.O5).Inmothersof25casesnewbornswithHDN,thetiterofserumanti—A(B)IgGof25cases whohadnewbornwithHDNwashigherthan1:256andofwhichthetiterofthatof12easesinereasedmorethan4times. Onlyonecase.thetiterwaslessthan1:64.ConclusionTherewasasignificantrelationshipbetweenthetiterofsernm anti—A(B)IgGinABObloodgroupincompatiblepregnantwomenandHDN. 【Keywords】 Bloodgroupincompatibility;Erythroblastosis,fetal;Serologictests;Microeolumngel 新生儿溶血病(hemolyticdiseaseofnewborn, HDN)是因母婴血型不合,母体内的IgG血型抗体通 过胎盘攻击胎儿红细胞引起的一种同种被动免疫性 溶血性疾病.我国以ABO—HDN为主,发病率为 2.0%,2.5%.HDN患儿轻者出现贫血,水肿,肝脾肿 大,重者造成早期流产或新生儿死亡或发生核黄疸 产生后遗症,严重影响着我国人口出生的质量,因此 通信作者:邹勇,Email:zouyongO205@163.com 对HDN进行有效预测和及时干预治疗十分重要.孕 前血清抗一A(B)IgG效价测定是目前预测新生儿溶 血病常用的方法.本研究利用微柱凝胶技术(MGT) 对1154例ABO不合孕妇血清抗一A(B)IgG效价进 行测定,分析了孕妇产前血清抗一A(B)IgG效价与 HDN发生的相关性. 1资料与方法 实用医技杂志2011年8月第18卷第8期 Journal0fPracticalMedicalTechniques,Aust2011,V01.18,N0.8 1.1临床资料:收集2008--2009年在本院输血科进行产前 血清抗一A(B)IgG抗体效价测定的O型Rh(D)阳性孕妇(丈 夫血型为非O型)1154例,年龄1844岁,平均(28~2)岁. 孕妇在孕20周时进行首次血型抗体效价检测,并建议在30 周左右进行第2次血型抗体效价检测,以后每个月测1次. 1.2试剂与仪器:MicroTypingSystemLiss/Coombs卡,ID— Diluent2稀释液,ID—Incubator37SI孵育器和ID—Cen— tfifugel2SII离心机(瑞士达亚美公司). 1.3实验方法:孕妇与其配偶的血型筛查及孕妇血清抗,A (B)IgG抗体效价的测定,采用达亚美卡式MGT检测,严格 按试剂盒说明书进行操作.孕妇血清中抗A或抗B抗体效 价?1:64,判读为阳性IlJ.对疑似ABO—HDN的新生儿出生1周 内做新生儿HDN3项检测,包括直接抗人球蛋白试验,游离 抗体试验和抗体释放试验.试验按全国临床检验操作 [21,ABO—HDN诊断[31:ABO母婴血型不合,临床有黄 疸,贫血和溶血症状.HDN3项检查阳性,或直接抗球蛋白试 验和红细胞抗体释放试验其中1项阳性. 1-4统计学处理:应用SPSS15,0软件处理数据,率的比较采 用检验,以P<O.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1O型孕妇Rh(D)及其配偶血型测定:经卡式MGT检测 血型,1154例O型孕妇及其非O型配偶的Rh(D)血型结果 均为阳性,配偶A血型者505例(占43.76%,505/1154),B血 型者471例(占4O.81%,471/1154),AB血型者178例(占 15.42%,505/1154). 2.2孕妇第20周左右首次血型抗体效价测定:l154例ABO 母婴血型不合O型孕妇中,首次血型抗体阳性者835例,阳 性率为72.36%(835/1154);其中,妻/夫血型O/A组366例, 阳性率为72.48%(366~05);O/B组313例,阳性率为66.45% (313/471);O/AB(抗A或抗B)组117例,阳性率为65.73% (117/178).各组间血型抗体阳性率差异有统计学意义(= 13.765,P<0.01),见表1 表11154例ABO母婴血型不合孕妇首次血型抗体效价 2.3孕妇第30周左右二次血型抗体效价测定:从首次血型 抗体检测的I154例孕妇中随机选取340例进行了跟踪观察 统计,与首次血型抗体效价比较,50.50%(51/lO1)孕妇抗体 效价从阴性转为阳性,51.80%(129/249)孕妇(效价?1:64) 抗体效价继续上升,其中O/A组,O/B组,O/AB组血型抗体效 价上升分别占本组孕妇的53.74%(79/147),50.00%(77/154) 和56.41%(22/39),各组间差异无统计学意义(=1.130,P> 0.05),见表2. 表2340例ABO母婴血型不合 孕妇二次血型抗体效价 注: 1括号内数据为第2次血型抗体测定效价上升且?1:64者. 2.4孕妇血型效价与HDN新生儿溶血的关系:经临床诊断, 25例新生JL(单胎)患HDN,男性l5例,女性10例,出生年龄 1,5d,平均2.9d.其中,O/A组1O例,O/B组7例,O/AB组 8例;25例HDN孕妇中,有l2例血型抗体效价持续升高达4 倍以上,24例产前最后,次血型抗体效价测定?1:256, 1例?1:64. 3讨论 MGT是建立在传统血清学基础上的一项免疫 学血型检测技术,在1994年获得美国食品与药品监 督管理局(FDA)批准,MGT因为其操作简单,重复性 好,灵敏度高,结果易于判断以及做Coombs试验红 细胞不需洗涤等优点,已广泛应用于包括血型鉴定, 不规则抗体筛选等多项常规检测中.我科从2004年 开始运用MGT开展血清孕妇IgG抗A(B)效价测 定,大大提高了检测的灵敏度和可靠度,减少了传统 试管法的人为误差,为临床HDN的诊断和预防提供 了重要依据. 本研究中对ABO母婴血型不合孕妇首次IgG抗 A(B)效价测定的结果显示,不同母一婴血型组抗一A (B)IgG效价阳性率有所不同,其中妻/夫血型O/A 组抗一A(B)IgG效价阳性率显着高于O/B组和 O/AB组(P<0.05),分析原因笔者认为这可能与不同 血型抗原的免疫原性强弱有关.在对孕前340例 ABO不合孕妇血清抗体效价的二次跟踪测定中发 现首次检测效价?1:64的孕妇中有51.80%抗体效 价继续上升,25例确定为HDN的新生儿有24例抗 体效价?l:256,这表明ABO不合孕妇血清IgG抗 A(B)效价的高低与HDN的发生密切相关.然而跟 本研究一样,也会出现孕妇血清IgG抗A(B)效价虽 实用医技杂志2011年8月第18卷第8期 J0umalofPracticalMedicalTechniques,August2011,Vol_18,N0.8?807? 高但仍不发生HDN的特例.这种现象的发生可以从 以下几方面来解释:?胎儿红细胞表面A或B抗原 性较弱,与抗A或抗B亲和力低,从而减少了红细 胞的破坏.?胎儿红细胞表面A或B抗原密度小, 结合的抗A或抗B少,不引起红细胞破坏.?胎儿 自身吞噬细胞的黏附能力较弱,红细胞破坏较少. ?与产生的主要IgG的亚型有关.最近亦有报道,母 体血清IgGl和IgG3的含量,尤其是IgG1的含量与 ABO系统HDN的发生最为密切.因此对ABO血 型不合孕妇进行血清IgG抗A(B)效价监测的同时 进行IgG亚型含量测定将进一步提高HDN的预测 和诊断水平. 总之,采用MGT进行孕妇血清IgG抗A(B)效 价的动态监测大大提高了检测的灵敏度和标准化, 对临床HDN的早期诊断和干预提供了重要依据. 参考文献 …1雷红霞,牛芳.孕妇血型IgG抗体与新生儿溶血病关系研究. 中国输血杂志,2004,17(5):344. f2]叶应妩,王毓三.全国临床检验.2版.南京:东南大 学出版社,1997:110. f3】金汉珍,黄德珉,官希吉,等.实用新生儿学.2版.北京:人 民卫生出版社,2005:531-550. f4】周益强,肖倩,冯尚克,等.IgG亚型与新生儿ABO溶血病相 关性的研究.广东医学,2011,32(2):182—184. (收稿日期:20l13—28) ? 方法与经验? 二次分化法在苏木素一伊红染色中的应用及探讨 湖北省武汉钢铁集团公司职工总医院(430080)郑明军 一 张优质的切片要求切片完整,厚薄均匀,无刀痕,无皱 褶,还要求染色清晰,核质分明,对比度好.在苏木素一伊红 (HE)染色中,分化是关键,笔者对2万余张常规组织切片进 行了深染重退对比染色;发现经2次或2次以上分化组织染 色的切片,无论是色彩鲜艳度,细胞清晰度,还是核质对比 度,都优于1次分化染出的组织切片,具体方法如下. 1材料与方法 1.1材料:?实验的全部组织材料均来自我院2009--2011 年临床科室送检标本.?成熟的Harris苏木素染液500mL, 1%醇溶性盐酸伊红500mL,1%盐酸酒精溶液500mL,70%, 80%,90%,95%酒精各500mL,100%无水酒精1000mL. 1.2方法:石蜡切片常规脱蜡至水,Harris苏木素液浸染5, 10min,充分水洗.用l%盐酸酒精分化液提洗3次,充分水 洗.人饱和碳酸锂水溶液10s,充分水洗.再入1%盐酸酒精 液提洗2次,充分水洗.饱和碳酸锂水溶液返蓝10S,充分水 洗.水片镜下观察细胞核及核染色质颗粒清晰,细胞质,肌纤 维,结缔组织等透亮,无蓝色背景,如有蓝色背景可再入盐酸 酒精中分化,饱和碳酸锂中返蓝.切片入1%醇溶性盐酸伊红 中1min,80%,90%,95%,100%酒精提洗3次,二甲苯液二道 提洗3次,中性树胶封固. 1-3制片过程中的注意事项:防止组织脱片,烤片温度80 qc,时间20min,组织脱蜡去苯必须彻底,每周更换脱蜡二甲 苯及酒精溶液,并充分水洗翻. 苏木素染液要有效,保持新鲜,防止沉淀和氧化膜的形 成.具体做法是定期适当加入冰醋酸可阻止苏木素的色素根 与铝离子化和形成蓝色的沉淀色素,延长染料的有效期. 使用经盐酸酸化的伊红,染色力增强,组织细胞色彩更加 鲜艳,核质对比更加清晰[31. 2结果 细胞核及核染色质颗粒清晰,均质呈深蓝色,核仁呈紫红 色,黏液,软骨呈紫色,细胞质呈桃红色,血管,结缔组织呈粉 红色,肌肉呈红色,红细胞呈朱红色,色彩鲜艳,层次分明,红 蓝对比突出.而一次性分化染出的组织切片,细胞核呈黑蓝 色,染色质结构不清,呈灰蓝朦胧状,不利于诊断. 3讨论 HE染色的关键是看细胞核的着色情况.细胞核的主要 成分是核酸,包括DNA和RNA,它们的基本化学成分是糖, 碱基和磷酸,因DNA的双螺旋结构带有极强的负电荷,使细 胞核易与带有阳离子的碱性染料苏木素结合.因细胞质带正 电,同性相斥,不易与带正电的苏木素结合.但是,由于组织 的吸附作用也会染上苏木素,分化的作用就是利用低浓度的 盐酸阻止苏木素和细胞质,肌纤维,结缔组织的结合,阻止苏 木素的色素根与铝离子化合形成蓝色沉淀色素,去除组织切 片上过染的染料,在分化的过程中由于水合氢离子比任何染 料离子的弥散分化都快,因而使应染部分着色恰当,细胞结构 显得均匀清晰,其他部分几乎不着色,通常一次分化是达不到 此目的,只有2次或2次以上的分化才能达到此目的. (收稿日期:2011-03—24)