【doc】芦荟制品中芦荟苷含量测定及通便作用研究

【doc】芦荟制品中芦荟苷含量测定及通便作用研究 芦荟制品中芦荟苷含量测定及通便作用研 究 食品与药品FoodandDrug2008年第l0卷第Ol期 芦荟制品中芦荟苷含量测定及通便作用研究 张春玲',厉保秋,尹洪银.,赵秀兰 (1.山东大学公共卫生学院营养与食品卫生研究所,山东济南250012;2.山东大学公共卫生学院 毒理学研究所;3.山东大学公共卫生学院理化检验室) 摘要:目的测定不同工艺生产的芦荟制品中芦荟苷的含量,观察芦荟制品对便秘小鼠排便功能的影响.方法采 用高效液相色谱法测定芦荟制品中芦荟昔的含量.采用复方地芬诺(10mg/kg.bw)造模小鼠,灌胃给予6种芦荟制 品(1.0g/kg),观察各组首次排黑便时间,5小时粪便粒数,粪便性状,粪便干湿重.结果(1)库拉索芦荟 全叶干粉,精制干粉,全叶冻干粉,全叶喷干粉,纯化药用级干粉及市售复方芦荟胶囊六种芦荟制品的芦荟苷含量 依次为0.088%,0.266%,0.908%,6.7l%,13.97%和3.4l%.(2)芦荟精制干粉,芦荟纯化药用级干粉能 够缩短便秘小鼠的首便时间,增加其所排粪便的粒数和重量;芦荟全叶冻干粉能够缩短便秘小鼠的首便时间,增加其 所排粪便重量;芦荟全叶喷干粉能够增加排出粪便的重量;芦荟全叶干粉未见明显通便作用;6种芦荟制品均不影响 小鼠体重增长.结论芦荟制品可以缓解复方地芬诺酯所致便秘,其机制可能是促进肠蠕动,加快粪便排出,发挥 润肠通便作用. 关键词:芦荟;芦荟苷;通便;高效液相色谱法 中图分类号:R975.2文献标识码:A文章编号:l672—979X(2008)0l一0025—04 DeterminationofAloininAloeProductsandStudyonPurgativeEffectofAloe 收稿日期:2007—09—18 作者简介:张春玲(198l一),女,山东青岛人,硕士研究生,研究方向为营养与疾病 通讯作者:赵秀兰,女,教授,硕士生导师E—mail:zhao.xl@sdu.edu.cn 为:醇沉浓度80%,醇沉密度1.2,醇沉次数1次; (2)在选择血清检测波长时,因为一个固定波 长不能最大程度地检出其中的组分,所以根据其所 含组分的性质,在不同保留时间范围内用DAD检测 器选取了3个波长进行检测; (3)用某种化学成分的体内量变规律常难反映 中药制剂及其疗效的时间变化过程,难以体现中医 药理论体系的整体观念.对中药制剂的药效,特别 是有效成分不明确的中药制剂的药效进行药动学研 究,只用化学药物常用的血药浓度法或尿药浓度 法,是不能反映中药中多种成分的综合疗效与协同 效应的.近年以药理效应法,药物累积法和生物指 标法等对中药制剂进行体内药动学研究,更能反映 制剂的体内动态过程,体现中医理论体系的特点, 在设计思路与方法上有所突破.但药理效应法等需 要有作用迅速的药理指标.因此,我们尝试用给药 前后的血清指纹图谱,从整体上考察和反映中药在 体内的吸收和代谢过程,而不是只考察其中的一两 种成分,这是对中药药动学研究的一种新尝试; (4)利用欧氏距离综合反映指纹图谱中的多个 特征值来度量图谱间的差异,具有全面客观的优 点,能从整体上反映给药前后血清指纹图谱的变 化.因此,通过对血清指纹图谱用欧氏距离作整体 比较来研究中药的药动学,更加符合中药整体作用 的特点. 参考文献 【1】康军.当归化学成分及其药理作用研究进展.医药产业资 讯,2005,21(23):l12. 【2】张善玉,朴惠顺.人参等五种植物药不同浓度醇沉物中多糖 含量【J】.延边大学医学,1994,17(4):271273 【3】王玉华,袁久荣.中药多糖的化学研究概况【J】.中成药, 2004,24(6):496—498. 【4】刘娟,彭仁诱,乐江,等.当归多糖的分离纯化及其部 分性质研究【J】.华西药学杂志,2004,19(6):1214. 【5】吴立军.天然药物化学【M】.第4版.北京:人民卫生出版 社,2004:225—228. 【6】王玉华.中药方剂四物汤补血作用有效部位的研究【D】.山 东:山东中医药大学,2004:59—62. 26食品与药品FoodandDrug2008年第10卷第0l期 ZHANGChun—ling,LIBao—qiu,YINHong—yin3,ZHAOXiu—lanl,2 (1.InstituteofNutritionandFoodHygiene,2.InstituteofToxicology,SchoolofPublicHealth.3.Divisionof Ph3,sicochemicalInspection,ShandongUniversity,Jinan250012,China) Abstract:ObjectiveTodeterminatethecontentofaloininaloeproductswithdifferenttechnologicalprocessesand observethepurgativeeffectofthesealoeproductsonconstipatedmice.MethodsAloininaloeproductswasdetermined byIlighperformanceliquidchromatography(HPLC).micewereadministeredwithCompoundDiphenoxylate(10 mg&g)todevelopaconstipationmodelandwereadministeredwith6kindsofaloeproducts(1g/kg)bygavage.111e firstblackstooltime,stoolgrainsandstoolweightin5hourswereobserved.Resultsr1)Thecontentofaloinjndifferent aloebarbadensisM姐 el"productswasasf0UOWS"0.088%inaloewholeleafdriedpowder,0.266%inaloerefinedwhole leafdriedpowder,0.908%inaloewholeleaffrozendriedpowder(100:1),6.71%inAloewholeleafspraydriedpowder (100:1),13.97%inaloepurifieddriedpowderformedicineand3.41%inComplexAloesCapsule.(2)aloerefinedwhole leafdriedpowderandaloepurifieddriedpowderformedicinecouldshortenthefirstblackstooltimeandincreasestool grainsandweightin5hoursofconstipatedmice;aloewholeleaffrozendriedpowder(100:1)couldsho~enthef'wst blackstooltimeandincreasestoolweight;aloewholeleafspraydriedpowder(100:1)couldincreasestoolweightin 5hours.Whilealoewholeleafdriedpowderhadnosignificantpurgativeeffect.111esixaloeproduc~hadnoeffecton thebodyweightofmice.CondusionAloeproductscanbeeffectiveonCOILStipationcausedbyCompoundDiphenoxylate byenhancingthemovementofbowelandincreasingexcretionofstoo1. Keywords:aloe;aloin;purgation;highperformanceliquidchromatography 芦荟(Azoe),系百合科多年生肉质草本植 物,其含有的芦荟苷,芦荟多糖等对人体具有多种 功效,并已广泛应用于食品,医药和化妆品工业. 中国药典记载芦荟性寒,味苦,归肝,胃, 大肠经,有清肝热,通便等功效".芦荟营经水解 氧化后即转化为芦荟大黄素,芦荟大黄素能促进肠蠕 动.芦荟中芦荟苷的含量测定方法有高效液相色谱 法,质谱法,荧光分光光度法,毛细管电泳法等. 本试验采用高效液相色谱法?卅分析了几种库拉索芦荟 (AloebarbadensisMiller)制品中芦荟苷的含量, 并采用排便实验观察了它们的通便作用. 1仪器与材料 1.1材料 1.1.1动物雄性昆明种小鼠,体重20.0?2.0g, 由山东大学实验动物中心提供【合格证号SCxK (鲁)20030004】. 1.1.2样品和试剂库拉索芦荟(海南中和药业有 限公司);复方芦荟胶囊系(上海复星临西药业有 限公司);芦荟苷标准品(中国药品生物制品检定 所,纯度98%);复方地芬诺酯片(常州康普药 业有限公司);指示墨汁?(含5%的活性炭粉,1O% 的阿拉伯树胶);乙腈和甲醇为色谱纯试剂;其他 试剂为分析纯. 1-2仪器 LC一10AD高效液相色谱仪(日本岛津公司), ZORBAXSB-18色谱柱(4.6mm×150mm,5/am,杜 邦公司);KQ一500型超声波清洗器(昆山市超声仪器 有限公司);METTLERAE100电子分析天平(上 海梅特勒,托利多有限公司). 2方法 2.1芦荟制品的加工 芦荟全叶干粉由芦荟全叶经脱水干燥粉碎而 成;芦荟纯化药用级干粉是提取芦荟叶皮与凝胶间 的芦荟黄汁,经浓缩干燥而得到的棕色粉末;全叶 喷干粉和全叶冻干粉系全叶芦荟浓缩汁经喷雾干燥或 真空冷冻干燥工艺制成,其100倍的水溶液具有1:1 芦荟全叶原汁的基本特征;精制干粉系芦荟全叶经 低温干燥,超微破壁粉碎加工制成. 2.2芦荟苷的含量测定… 2.2.1色谱条件ZORBAXSB一18色谱柱(4.6mm× 150mm,5/am),检测波长355nm,流动相为乙腈: 水(25:75),流速:imL/min,柱温:25?. 2.2.2工作曲线绘制精确称取芦荟苷标准品10 mg,用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀. 吸取上述溶液配成浓度分别为O.5,0.25,0.1,O.05, O.01,O.005,O.001mg/mL的标准系列.按上述色 谱条件,以20L进样,以峰面积定嚣.以标准 品浓为横坐标峰面积为纵坐标,绘制工作曲线. 2.2.3样品中芦荟苷含量测定将不同工艺芦荟制 品分别于75?烘干至恒重,精确称取l00mg,置 食品与药品FoodandDrug2008年第10卷第01期27 50mL容量瓶中,30mL甲醇溶解,超声振荡提取 30min,放至室温,用甲醇定容至刻度,摇匀, 0.45"m微孔滤膜过滤,滤液备用.进样量20IL, 外标法计算样品中芦荟苷含量,平行测定3次,取 平均值. 2.3芦荟制品的通便功能}5 2.3.1动物分组及给药小鼠随机分为8组,每组 10只.包括5个样品组(芦荟全I-f'干粉组,芦荟 精制干粉组,芦荟全叶冻干粉,芦荟全叶喷千粉绢 和芦荟纯化药用级干粉组)和3个对照组(复方芦 荟胶囊阳性对照组,空白对照组和模型对照组). 各组灌胃给药0.02mL/g,样品组给予1.0g/kg受试 物(芦荟制品用蒸馏水稀释),模型组和空白对照 组给予等容量蒸馏水.每天1次,连续10d.末 次灌胃后,各组动物禁食16h(不禁水),样品 组,阳性对照组及模型对照组分别灌胃给予复方地 芬诺酯10mg/kg,空白对照组给予等容量蒸馏水. 2.3.2指标观察给予复方地芬诺酯(浓度为0.05%, 0.5h后,样品组及阳性对照组分别给予含有指示墨汁 的相应受试样品,空白和模型对照组给予指示墨汁,动 物单笼饲养,开始计时,并供给饲料和饮水,观察i己 录每只动物首次排黑便时间,5h内排便粒数及重量. 试验过程中每5天称量1次小鼠体重. 2.4数据统计 实验数据以均数?标准差(?S)表示,采用 SPSS11.5统计软件包对实验数据进行One—waY ANOVA分析及Dunnett检验. 3结果 3.1芦荟苷的含量测定 药典方法满足6个芦荟制品中芦荟营含量测定的 需要,芦荟苷的出峰时问在15min左右,制品中 的杂质均不干扰.在0.001,0.5mg/mL内,芦荟 营浓度与峰面积之间呈现良好线性关系(y=1.3219 ×106X+3934.9,r=0.9997,P<0.05),采用 外标法计算6种制品中芦荟营含量:芦荟全叶干 粉0.088%,芦荟精制干粉0.266%,芦荟全叶冻 :_f粉0.908%,芦荟全叶喷干粉6.71%,芦荟纯化 药用级干粉13.97%,复方芦荟胶囊3,41%. 3.2芦荟制品的通便功能 试验过程中各组动物的饮食和活动正常,各组 小鼠粪便均为粒状便,未出现腹泻现象.试验结束 时,样品组小鼠体重与空白对照组及模型对照组比 较,均无明显差异(P>0.05)(表1). 表l样品对各组实验小鼠体重的影响(n=10,?) 表2各组小鼠的排便时间,粪便粒数及重量(?S,n=l0) JD<0.05,P<0.01,VS模型对照组 28食品与药品FoodandDrug2008年第1O卷第O1期 各组小鼠的首便时间,5h粪便粒数及粪便重量 见表2.结果表明,芦荟精制干粉,芦荟纯化药用 级干粉能够缩短便秘小鼠的首便时间,增加其所排 粪便的粒数和重量;芦荟全叶冻干粉能够缩短便秘 小鼠的首便时间,增加其所排粪便重量;芦荟全叶 喷干粉能够增加排出粪便的重量;芦荟全叶干粉未 见明显通便作用. 4讨论 目前我国居民膳食中植物性食物比例逐年下降, 膳食纤维摄人量不足,便秘的发病率较高.滥用治 疗便秘药物的现象也较普遍,这些药物大多泻下作 用强,长期服用易形成依赖性,使便秘加重[6】. 传统医学认为芦荟有导泻作用,温和,使用方 便且容易接受.芦荟的化学成分复杂,已知的有I60 多种,芦荟苷为主要成分之一.石井康子通过大鼠 实验发现,芦荟主要的刺激部位是大肠,其中芦荟 苷在大肠中被氧化成芦荟大黄素发挥刺激性泻下作 用.因此芦荟对便秘和痔疮,特别是对老年性便秘 有明显疗效【.本实验表明,芦荟能缩短便秘小鼠 的首便时间,增加粪便干,湿重.芦荟缓解便秘的 可能机制是促进肠蠕动,加快粪便排出.给予芦荟 后小鼠体重与对照组无明显差异,且未出现腹泻, 说明芦荟作用较为温和,与文献报道【】一致. 由于芦荟的品种,种植环境,加工方式等差 异,不同的芦荟制品中各种成分的含量有所不同. 本实验中不同芦荟制品芦荟苷的含量相差较大,结 果表明其促进肠道运动的程度也不同,但未观察到 芦荟苷与首便时间等指标的相关性,这可能与不同 加工方式导致芦荟苷的吸收率不同有关.芦荟精制 千粉采用超微破壁粉碎加工的方式,可能在体内吸 收率较高.另外,芦荟中含有的芦荟大黄素,芦荟 宁,芦荟咪酊和芦荟纤维等成分,也具有增进食 欲,健胃和缓泻的功能.芦荟促进肠运动的有效成 分和作用机制还有待进一步研究. 参考文献 【l】国家药典委员会.中华人民共和国药典一部【s].化学工业 出版社,2005:l12l13. 【2】RebeccaW,KayserO,HagelsH.Thephytochemicalprofile andidentificationofmainphenoliccompoundsfromthe leafexudateofAloesecundiflorabyhigh??performanceliq-- uidchromatography—massspectroscopy【J】.Phytochem Ana1.2003;14(2):83—86. 【3】侯冬岩,回瑞华,吴师,等.芦荟花中芦荟苷的HPLC分 析及抗氧化性iiii定【J】.浙江大学(理学版),2004; 31(4):438—441. 【4】李静梅,吴颖.高效液相色谱法检测芦荟及其芦荟制品中 芦荟苷的含量【J】.食品工业科技,2003{24(11):76—77. 【5】中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范IS]. 2003:159—161 [6】林子洪,吴敬勋,肖梓栋,等.芦荟对小鼠便秘的作用 及其机制初探【J】.广东医学,2005{26(10):1336-1338. 【7】王富丽.芦荟的研究与临床应用【J】.继续医学教育,2001; 1(1):55.56.