【doc】自制尿素试纸快速检测胃幽门螺旋菌的研究

【doc】自制尿素试纸快速检测胃幽门螺旋菌的研究 自制尿素试纸快速检测胃幽门螺旋菌的研 究 \一5J} l99l牟第6期.3仇?. 自制尿素试纸快速检测胃幽门螺旋菌的研究 南京走学医学院附属鼓楼医院垫韪郭文琦/. 本文自制尿素试纸检删胃幽门螺旋甍tHP),其最适pH为6.5.共检刮I8|例经胃镜和病理检测 确诊的胃病患者,HP性检出率为66.3,敏感性为99.82,特异性lO0.与病理检测法对照, 两者符合率为95.65%,检删结果lE分钟内可确定.认为自制尿素试纸是一种检刮胃HP的简易新方法. 在正常情况下,人的胃粘膜无尿素酶.而当 胃粘膜有幽门螺旋菌(Helicobacterpylori, HP)感染时,由于HP含有丰富的胞外尿素酶, 因此检测尿素酶的存在即可以诊断胃粘膜有 HP感染.目前,国内外均有多种检测尿素 酶的试剂盒,但一般以液俸或琼脂为载体,且一 些检测方法需要数小时,甚至24小时才能作出 诊断.为此,我们试制了尿素试纸,旨在以固 俸为载体,缩短观察时间,降低检测成本,使 之为基层医院推广应用. 材料与方法 一 ,胃镜及病理诊断 经临床验证184例患者,男118例,女鹋例, 年龄18~B3岁,平均42岁.经胃镜及病理诊断 后,慢性浅性胃炎105例,慢性萎缩性胃炎 22例(其中包括慢性浅表萎缩性胃炎8例,疣状 胃炎1例),胃溃疡4例,十二指肠球部溃疡 46例(包括复合性溃疡3例),幽门管溃疡4例, 胃癌I例,十二指肠炎2例. 胃镜检查时,常规在胃窦大弯侧或小弯侧 臣幽f]5cm内取胃粘膜一块,约0.4x0.2cn1卫. 无菌操作下分为两块,一块作尿素试纸法检测, 另一块进病理作细菌学检测为对照. 二,屎素试纸法 配制尿素一甲酚红混台液35ml,调整pH至 6.5,浸泡一张9cm的滤纸4小时,取出滤纸 后于37~C烤箱内烤千,并裁剪成1.2x0.6cm的 条形,常温下干燥器中保存. 取条状试纸一张,置于经消毒后的玻片 上,用无菌眼科镊夹取胃粘膜组织块,并吸千 组织块,放在试纸中央,取另一玻片覆盖在上 面,并轻轻压紧两玻片,常温下静置观察.以 试纸在l5分钟内变为紫红色判断HP检出阳 性.并根据紫红色由浅到深的程度变化,分为 +,十+,+}}三级,无紫红色出现则为(一). 分别配制不同pH值(pH为5.9;6.2}6.8} 7.1)系列尿素一甲酚红混台液,并按上述方法 制成相同大小的试纸条,与pH6.5的试纸及病 理细菌学检测于同一组织标本上作对照试验. 三,病理细菌学检测 取上述方法中的另一组织块置于10%甲醛 溶液中固定,经石蜡包埋切片,按改良Giemsa 染色,在油镜下作HP计数,以HP数量最多的 视野中菌数为标准分为0,<5,5,l0,>10 四级. 实验数据以X=检验确定实验组与对照组的 差异显着性,P<o.05认为有统计学意义. 结果 一 ,两种检测方法的比较 如表1所示,尿素试纸检测122例阳性, 阳性检出率为66.3%,敏感性93.85(122/ 130).特异性100(54/54).病理细菌学检出 130例HP阳性,阳性检出率70.65.两种方 法HP的符台率g5.65%(176/184). =,尿素试纸法的反应时间 我们观察了52例尿素试纸法阳性的紫红色 出现时问,结果如表2所示.1分钟显示阳性 表1尿素试纸法与病理细茵学 检测结果出较 的有25例,阳性出现率为48.O8‰5分钟显 示阳性的有42例,阳性出现率为80.77‰15 分钟垒部显示阳性,阳性出现率为100%.结 果表明,尿素试纸法检测HP在15分钟内可以 作出诊断. 三,不同pH值尿素试纸的结果比较 分别用pH为5.9,6.2,6.8,7.1的尿素 试纸与pH6.5尿素试纸及病理细菌学检测作对 江苏院药 表2尿素试纸法阳性的反应时间 阳性累计侧数 反应时间 (miI/1)++++ 12410 53282 1533127 阳性出现 合计率(%) 2548.08 4280.77 52lO0.00 照结果如表3所示.PH5.9及pH6.2的尿素 表3不同pH尿素试纸检测结果比较 'P<O.O5?'p<o?ol 试纸HP阳性检出率明显低于病理细菌学橙出 率(p<0.01);pH7.1的尿素试纸HP阳性检出率 明显高于病理细菌学检出率(P<O.O5).pH 6.8;~flpH6.5的尿素试纸阳性检出率与病理细 菌学检测率无明显的统计学意义(p>0.05), 但pH6.5的尿素试纸阳性检出率与病理细菌学 检测率相近.故认为pH6.5的尿素试纸较适合 于作HP检测 四,胃粘膜话检部位与尿素试纸HP阳性 检出率的关系 127例慢性胃炎及39铡十二指肠球掷{贵疡 患者行胃镜检查时,话检部位为窭大弯侧或小 弯侧距幽fqScm处.在慢性胃炎患者屎素试纸 HP阳性检出率窦小弯侧明显高于窦大弯侧 (p<0.05),而对十二指肠球部溃疡的病人来 说,两处活检部位无明显差异,见表4,5. 表4慢性胃炎患者胃粘膜活捡部位对HP捡4的影响 P<0.O5 表5十=指肠球部溃病惠者胃粘腱活检部位对HP检洲的影响 话检部位 尿素试纸法 台计阳性检出率(%) 窦大弯 窦小弯 i00.0 90.48* 37239 'P>o.05 】991年第6期 讨论 目前,国内外有许多检测胃HP感染的方 法",如细菌分离培养法,胃粘膜直接涂片 染色检查法,组织切片染色法,尿素酶试荆 盒I血清学和免疫学检查法等,其中以 尿素酶检测法较快且准确可靠.尿素酶检测法 是利用HP含有丰富的特异性胞外尿素酶的特 点,根据尿素酶在常温下分解尿素产氨,利用后 者可使周围环境中pH值升高的原理而. 尿素酶检测法一般以液体及琼脂为载体,检测 时问较长,迭数小时甚至24小时我们设计以 试纸为固体载体的屎素酶检测法,与病理细菌 学捡测法对照,具有较高的敏感性(93.85%), 较强的特异性(i00).两者HP检出符合率达 95.65%,而且检视f成本降低了i0O倍以上 本法以试纸为载体,仅需部分组织块中被 挤压出的液体,液体量少,缓冲成分少,组织 块中尿素酶园挤压而能够得到充分释放,使反 应速度加快,反应时间大大缩短.15分钟内即 可字旺断HP检测结果,近5O%可在1分钟内出 现阳性结果.因此尿素试纸法是一种快速的HP 检铡方法. 尿素试纸本身的pH值为6.5,与PH5.9, pH6.2,PH6.8厦pH7.1的尿素试纸比较,具 有较高的特异性和敏癣性,且HP阳性检出率 与病理细菌学检出率一致.pH值过低或过大, 会引起假阴性或假阳性增多. 根据GoodwinE提出的HP在胃粘膜上呈 不规律分布的论点,为避免实验中的误差,我 们在活检时,于一部位取一块组织,在同一组 织块中作实验和对照.在实验中仍有8例呈现 尿素试纸法阴性,而病理检测阳性我们认为 可能是同—组织块中也有HP分布的不规律性. 我们还观察到,尿素试纸检测HP时.与 胃粘膜活检部位有一定的关系.对十二指肠球 部溃疡的患者,胃窦大弯侧和小弯例的组织 活检时HP阳性检出率无明显影响}对慢性胃 炎患者,窦小弯侧的HP阳性检出率较窦大弯 侧高,其原因有待进一步探索我们认为,为 了提高HP阳性检出率,在不增加病人痛苦的 情况下,一般活检部位以窦小弯侧为优. 参考文献 MorrisAetelILanceLl986,】:149 Groha~DYeLa1}L~ncef19s9.1: l17d MeNultyCAM,Wis.RlLancet i985.lIl443 McNultyCAM,WiseRlLancet l986.1l387 McNuIfyCAMetal;Gufl989,30' 1O58 MarshalIBJWafrenJRLancet l084,1_13?. Ha20IISLefa1}A址JGagtfoentefo l987.82l292 杨海涛等-第一军医大学1989*17 Oderd~Getal{Gutl989J30;912 GoodwlaCSetakJClinPatko[ 1986.38Il127 (1990年12月5目收稿) 南京部分儿童HBV摩染血清=对半 流行磊学监测 我们于1988~1990年期间对来院门诊及住院患儿 3787人采用ELIsA法检测血清二对半.年龄均在1】 天,ll岁根据调查资料分析确诊的小儿乙型肝炎 大多欣乏典型症状,主要以发热,上呼吸道感染或胃 肠炎为主要表现,同时伴有恶心呕吐,腹痛腹泻. 易误诊为上盛,急性胃肠炎等.本地区在春秋两季发 病卓为高峰,患儿多分布幼儿园或家庭中,尤其家庭 中母亲有HBsAgHBeA~,HBcAb~阳者,其子女 多数曼染,虽家庭聚集现象. 经对我院三年资料分析表嘎l9~HBsAg阳性 率为29.39,Ig90年为l7.90,提示HBsAg感染 有明显下降趋势.l988年HBgAg阳性率为21.52%, 】990年为l3.17,说明传染严重程度有所好转.推测 原因与小儿注射乙肝疫苗,对该病的防疫意识增强, 卫生状况有所改瞢有密切关系 (本工柞曾检验科王均乐.程平避富茸,羽癣扞 莓同志的大力协助,在此一并癌斯) (甫意市儿童医院戈童军医重整) i]]]i] 123456789" !;[;l