5 粗脂肪的测定

和实中润饲料有限公司羽毛粉项目技术部 作业指导书 文件编号: HSZR-12-08 第1版 第0次修订 粗脂肪的测定 颁布日期:2012.08.09. 五 饲料中粗脂肪的测定 1 适用范围 本方法规定了动物饲料脂肪含量的测定方法，本方法适用于油籽和油籽残渣以外的动物饲料。为了本方法的测定效果，将动物饲料分为下列两类；B类产品的样品提取前需要水解。 B类： ―纯动物性原料，包括乳制品； ―脂肪不经预先水解不能提取的纯植物性饲料，如谷蛋白、酵母、大豆及马铃薯蛋白以及加热处理的饲料； ―含有一定数量加工产品的配合饲料，其脂肪含量至少有20％来自这些加工产品。 A 类：B类以外的动物饲料。 对于油籽，在ISO659中介绍了一种己烷提取的“油含量”测定方法。 2 方法原理 2.1 脂肪含量较高的样品（至少200g / kg ）预先用石油醚提取。 2.2 B类样品用盐酸加热水解，水解溶液冷却、过滤，洗涤残渣并干燥后用石油醚提取，蒸馏、干燥除去溶剂，残渣称量。 2.3 A类样品用石油醚提取，通过蒸馏和干燥除去溶剂，残渣称量。 3 试剂 本方法所用试剂，未注明要求时，均指分析纯试剂。 3.1 水至少应为GB／T6682 规定的3级； 3.2 硫酸钠，无水； 3.3 石油醚，分析纯，沸点范围为40℃～60℃。 3.4 玻璃细珠； 3.5 丙酮； 3.6 盐酸：c（HCl ）=3mol/L； 3.7 滤器辅料：例如硅藻土（kieselguhr），在盐酸[c(HCl)=6mol/L]中消煮30 min，用水洗至中性，然后在130℃下干燥。 4 仪器设备 实验室常用仪器设备，特别是下列各件。 4.1 提取套管，无脂肪和油，用乙醚洗涤。 4.2 索氏提取器，虹吸容积约100 mL ，或用其他循环提取器。 4.3 恒温水浴锅，有温度控制装置，不能有火源。 4.4 干燥箱，温度能保持在（103±2）℃ 。 4.5 电热真空箱，温度能保持在（80±2）℃ ，并减压至13.3 kPa 以下，配有引入干燥空气的装置，或内盛干燥剂，例如氧化钙。 4.6干燥器，内装有效的干操剂。 5 分析步骤 5.1 分析步骤的选择 如果试样不易粉碎，或因脂肪含量高（超过200g/kg）而不易获得均质的缩减的试样，按5.2 处理。其他情况下，则按5.3 处理。 5.2 预先提取（膨化大豆） 5.2.1称取10g左右 (精确至1mg）制备的试样（m0），与10g 无水硫酸钠混合，转移至一提取套管中，并用一小块脱脂棉覆盖提取套管。将一内部放有几粒玻璃珠的干燥烧瓶与提取器连接， 再将装有样品的套管置于索氏提取器中，调节加热装置使每小时至少循环10 次，回流2h。取出底部烧瓶，把所有溶液充分震荡混匀，转移到500mL容量瓶中，并用石油醚洗涤烧瓶中的石油醚提取物且一并转移到容量瓶中。对另一个盛有玻璃细珠的干燥烧瓶进行称量，准确至1mg，吸取50mL 容量瓶中的石油醚溶液移人此烧瓶中。 5.2.2 蒸馏除去溶剂，加2mL 丙酮至烧瓶中，转动烧瓶并在加热装置上缓慢加温以除去丙酮，用吹风机吹去痕量丙酮。残渣在103℃ 干燥箱（80℃真空烘箱）内干燥10min（1.5h），在干燥器中冷却，称量（m2），准确至0.1mg。 5.2.3取出套管中提取的残渣在空气中晾干，并放入103℃的烘箱烘3h，干燥残渣称量（m3 ），准确至0.1mg。将残渣粉碎成1mm大小的颗粒，按5.3处理。 5.3 试料处理选择 称取5g (m4）制备的试样，准确至1mg。 对B类样品按5.4 处理。 对A类样品，将试料移至提取套管并用一小块脱脂棉覆盖，按5.5处理。 5.4 水解（鱼粉、肉骨粉、大豆、谷蛋白、酵母、马铃薯蛋白） 试料转移至一个400mL 烧杯，加100mL 3mol/L盐酸和玻璃珠，用表面皿覆盖，在火焰上或电热板上加热至微沸，保持lh ，每10min 旋转摇动一次，防止产物粘附于容器壁上。取下冷却，加一定量的滤器辅料，防止过滤时脂肪丢失，在布氏漏斗中通过湿润的无脂的双层滤纸抽吸过滤，残渣用冷水洗涤至中性。 小心取出滤器并将含有残渣的双层滤纸放入一个提取套管中，在80℃ 电热真空箱中于真空条件下干燥60min ，从电热真空箱中取出套管并用一小块脱脂棉覆盖。 5.5 提取 5.5.1将一些玻璃珠转移至一干燥烧瓶，称量（m5），准确至1mg 。将烧瓶与提取器连接，收集石油醚提取物。 将套管置于提取器中，用石油醚提取6h 。使用索氏提取器，则调节加热装置使每小时至少循环10次。 5.5.2 蒸馏除去溶剂，直至烧瓶中几无溶剂，加2mL 丙酮至烧瓶中，转动烧瓶并在加热装置上缓慢加温以除去丙酮，吹去痕量丙酮。残渣在103℃ 干燥箱内（80℃真空烘箱）干燥10min（1.5h），在干燥器中冷却，称量（m6），准确至0.lmg 。 6计算 6.1 预先提取测定法 试样的脂肪含量W1 ，按下式计算，% 式中：m０——在5.2 中称取的试样质量，g； m１——在5.2 中装有金刚砂的烧瓶的质量，g； m２——在5.2 中带有玻璃珠的烧瓶和干燥的石油醚提取物残渣的质量，g； m３——在5.2中获得的干燥提取残渣的质量，g； m４——试料（5.3中）的质量，g； m５——在5.5中使用的盛有金刚砂的烧瓶的质量，g； m６——在5.5中盛有金刚砂的烧瓶和获得的干燥石油醚提取残渣的质量，g； ｆ——校正因子单位，g/kg （ｆ＝1000g/ kg ）。 结果表示准确至1g/Kg。 6.2 无预先提取的测定法 试样的脂肪含量W2 ：按下式计算，以克每千克表示： 式中：ｍ４——试料（5.3中）的质量，g； ｍ５——在（5.5中）中使用的带有玻璃珠的烧瓶的质量，g； ｍ６——在（5.5中）中盛有金刚砂的烧瓶和获得的石油醚提取干燥残渣的质量，g； ｆ——校正因子单位，g/kg （f = 1000g/kg）。 结果表示准确至1g/kg 。 7 重复性 A类样品两个平行试样测定结果之间的绝对值不大于2.5g/kg，对于B类样品样品，两个平行试样测定结果之间的绝对值不大于5g/kg。 8 注意事项 8.1石油醚易挥发、易燃且具有一定毒性，需要在通风橱中操作。且隔离火源。 8.2丙酮有毒，需要在通风橱中操作。 8.3水解时必须要加入玻璃珠，防止溶液暴沸，发生烫伤，且造成实验失败。火源要先大后小，最后保持微沸状态。 9 结果准确度的保证 9.1所用无水石油醚不能用乙醚代替，因为乙醚剧毒，且乙醚提取过程中可能会因为样品中含有的水分而造成样品中的糖类和无机物被抽提出来。 9.2样品冷却时间要一致。 9.3带手套操作，手上的汗油渍会附于提取套管上，影响结果。 9.4提取不完全则有误差,要求必须做平行样。我国规定两个平行实验测定结果之间的允许相对偏差，在粗脂肪含量≥10%时，为3%；而＜10%者，为5%。 9.5控制好其回流次数，10次/h即6min/次。 9.6脂肪提取过程中有一部分脂溶性物质如游离脂肪酸（亚油酸、亚麻酸）、磷脂、蜡、色素（胡萝卜素、叶黄素等）、以及脂溶性维生素（ADEK）等。 � EMBED \* MERGEFORMAT ��� � EMBED \* MERGEFORMAT ��� 和实中润饲料有限公司羽毛粉项目技术部 HSZR-12-08 _1234567890.unknown _1234567891.unknown