蛇毒神经毒素的放射性碘化标记

生物化学与生物物理进展 �, , � 年 第 一� 卷 第 � 期 蛇毒神经毒素的放射性碘化标记 池 木 根 陈 世 铭 �军事医学科学院毒物药物研究所 , 北京 �� � � � � � 关键词 蛇毒神经毒素 , 放射性腆化标记 , 氛胺 � 法 , 烟碱受体 目前 , 生物科学的发展非常迅速 , 随着对各种生物 大分子的深入研究 , 放射性同位素标记技术显得更为 重要 , 几乎所有的生命科学都涉及到这一技术的应用 � 蛇毒神经毒素是一种小分子量蛋白质 , 用” ‘�标记后可 作为研究烟碱受体的一种示踪物 � 碘化掺人蛋白质目 前使用得最多的方法是氯胺 丁 法 ‘’ , , ’ , 氯胺 丁 碘化标记 最关键的是氧化反应 , 将碘原子氧化成碘分子西发生标记反应【’� , 然后在酪氨酸残基的苯环或组氨酸残基 的咪哇环上发生共价结合 , 生成带有放射性的化合物 � 这种标记方法简便、易行 , 重复性好和产率稳定 , 可标 记微量蛋白质 � 用氯胺 � 法标记的蛇毒神经毒素是研 究 � 一�� � � 理想的工具叭 ” � 奥� � 。。工�‘云‘侧翔彼刘粗 一 、 实 验 材 料 蛇毒神经毒素从眼镜蛇 �� � 产� � � � � � , � � � 毒千 粉中分离“ ’� � “” ’� 为中国科学院原子能研究 所 产 �品 � 熟胺 � 和偏重亚硫酸钠、 碘化钾为北京化工厂产 品 � 丫一免疫计数器为西安二六二厂产品 � � � �� �� 面管号 图 � 标记毒素与游离放射性 � �� 在 � � � � � �旅 � 一�� 层析往上的分离 ��� ��中召滚 。����江。 �旬欢盆到匆 户 二 、 方 法 和 结 果 � � 蛇毒神经毒素的放射性标记和分离 �� 川 �� · � � � � � �� 蛇毒神经毒素置反应瓶中 , 加 人 � � , ” � 溶液 � � � � , 混合后 , 加人 , �拜��一� � � � � �� 氛胺 � , 氧化反应 � � 比 后立即注入 �� 川 偏重亚硫酸 钠 ��� � � � � �� 终止反应 � 然后向反应体系中加人 � 滴 �� 的 �� 溶液 , 无黄色明反应终止完成 � 为 了将标记毒素与残存的游离 � “‘” �分开 , 将反应液上 � � � � � � � � � 一 � � 层析柱 � � � � � � � �‘� � � 分离 , 上样 前 , 先加 � � �川 � �� �� � � � � 二 �� 使柱先饱和吸附 , 然 后上样品 � 洗脱用 � � � , � � �� � �含 � � � � � � � � � � � � �� 磷酸缓冲液 ,流速为 。 � � � �� � �� , 每管收集�回 , 并用 卜免疫计数器测定 , 见图 � � 从图 � 可以算出标记率为 , �肠 , 比放射性为 � � � ! �� � � �� � � 标记化合物的活性测定 用适当稀释的蛇毒神经毒素标记物与过量的 � � 人‘� � 在 � �℃反应 �� 后 , 上 �� � � � � � � � 一 � , 层析柱 第 �峰为标记毒素 , 第 � 峰为故射性 � �� �� · �� � � � � ‘� � 分离 � 用 � � �� � � � � � � � � , 磷酸 缓冲液洗脱 ,分部收集后 , 在 卜免疫计数仪上检测 � 实验表明 , 标记化合物与提纯的 � 一� ‘� � 有很好的结 合�见图 � � � 根据层析分离的侧定结果 ,标记物的生物 � � � � � � � �、 � , � � 乡� 、� � �� �心 泌 管号 图 � 受体 一标 记毒紊复合物与游离标记毒素在 � � � 卜� �业 � 一 �� 层析柱上的分离 第 � 峰为复合物 , 第 � 峰为游离毒素 �下转封三� � � � �上接第 � � �� 活性达 �� 肠 , 这种标记物是研究 � 一�� 五� 理想的 放 射性配体〔� , , ’� 三 、 讨 论 标记时 , 要求达到高比放射性 , 但又不能因加人过 量的放射源 ,而造成配体活性的损失 , 降低了标记物结 合活性 , 故必须选择最佳条件 � 为此 , 供标记的放射源 的浓度应在 � � � �� � � 以上 , 以便反应总体积要求在 。� � � � 以下 , 关键是氧化剂的量和反应时间要适中 , 才 能得到理想的标记物 � 蛇毒神经毒素是一种小分子量 蛋白质 , 用 � 。‘”� 标记较为理想 � 根据我们多年来的 标记结果表明 , 毒素蛋白与氯胺 � 的用量比为 � �� �� � � � ,标记效果较好 ,标记率可达总放射性的 �� 土 � � 今肠 , 比放射性为 � � � 士 一� � �� � � � � � � , 标记物生物 活性达 �� 士 � � � �� � 当用量比为 � � � 时 , 标记物生物 活性虽有提高 , 但标记率只有 � , � � � , 比放射性为 �� �� � � � � � 氯胺 � 过多会损伤毒素的生物活性 � 参 考 文 献 � � � �� � � � � , � � � � � � � � � � �� � � � � � , � � � � � � � � � , � � � � � � � � � � � � � � � � , � � � � �� � � ��� , � � � � � � � � � � � “� � � �� � � � 仍 , � � ! � �� � � � � � � � � � � � � � � , � � � ��� � � � � �口� 亩口丹 才萝� , � � � � �� � � � � � 陈世铭 , 池木根 � 中国药理学报 , � �� � � ��� � � � � � � 陈世铭 , 池木根 , 杨怡等 � 动物学研究 , ” � � � � �� � �� � 徐浩鹏 , 孙曼界 , 周廷冲 � 军事医学科学院院刊 , �� ��� �� � � � 斗� �本文于 �� � 年� �� 月 � � 日收到, � � � � 年 � 月 � � 日修回� 生物化学与生物物理进展 �� � � � � � � � ! �∀ # ∃ % &��∋ ( ) ∗ + ! �∀ ,∃ )� �# � −, 7互年创+I] (双月刊) s tart P ub lieation 一9 9 1 年 第 一8 卷 第 6 期 (12月出版 ) in 197斗 ( B im o n tb l y ) V o l. 1 8 N o . 6 ; 19 9 1 D e e. 主 办 编 辑 编版主出 印 刷 装 订 总 发 行 处 订 购 处 国外总发行 中国科学院生物物理研究所 北京市朝阳区大屯路 巧 号 邮政编码 : 100 10 1 《生物化学与生物物理进展》 编 委 会 生物物理研究所 林 治 焕 抖 嵘 必 准 私 北京东黄城根北街 16 号 邮政编码 : 100707 中 国 礴 李 陀 印 剧 了 北 京 报 刊 发 行 局 全 .国 各 邮 电 局 中国国际图书贸 易 总 公 司 北京 399 信箱 S p o n s o r e d b y In stitu te o f B iop h y sics , A c a d e m i a S i n i c a 1 5 D a t u n R o a d C h a o y a n g D i s t r i c t B e i i i n g 1 0 0 1 0 1 , C h i n a E d i t e d b y E d i t o r i a l B o a r d o f P r o g r e s ; i n B i o c 人e m istry a 邓d B io P h y s ic s In : T h e In s titu te o f B io P h y sic s E d it o r 一i n 一 C 坛ef L in Z hi huan P u b lishe d b y S cien ee P ress 16 D oaghuangehenggenbeiiie, B e i j i n g 1 0 0 7 0 7 , C h i n a P r i n t e d b y T h e P r i n t i n g H o u 尽e o f A ead em ia S in iea D ist r ib u te d b y B eiiin g P o st o ffie e S u b se r ip tio n s D om e stic L o c al P o st O ffi e e s F o r e ig n D is tr ib u t io n C hin a In te rn atio n al B oo k T rad in g C o rP o ration P . 0 . B O X 399 , B e i i i n g , C h i n a 国内统一刊号: C N I卜21 61 邮发代号: 2一81 ‘ 国外刊号: B M 40 8 定价: 3 .15 元 公 开 发 行