抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响 三、讨论: 在细胞分离时, 应尽量使用人 30m in , 洗 同 上。 菌 素 过 氧 化 物 酶 室 温 孵 育 新鲜抗凝血, 整个操作过程动作要轻柔。与磁 71显色 5 - 6, 洗同上, 双蒸水 DA B m in PB S 洗。 81 常规脱水, 透明, 封片。 珠标记的抗体孵育时间和温度可根据细胞数 量的多少适当调整; 孵育过程中, 要不断地轻 21 结果: 免疫组织化学阳性反应 V E GF 轻地摇动, 以使细胞与抗体充分结合; 冲洗细 呈棕褐色, 在正常组和 V C 组大鼠的睾丸和 附睾中均有表达。 免疫组织化学反应具明显 胞时, 离心的速度和时间不宜过快和过长。细 胞过柱前要用 300 目的尼龙网过滤, 以免分 的特异性, 在阴性对照组中, V E GF 反应为阴 性。 离柱被成团细胞阻塞, 影响分离效果。 在精索静脉曲张大鼠睾丸和附睾中表 正常组大鼠睾丸的 V E GF 蛋白定位于 V E GF 间质细胞和支持细胞, 在一定发育阶段生精 达的研究 张秋养 邱曙东 葛玲 西安交 通 大 学 医 学 院 组 织 胚 胎 学 教 研 室 西 安 细胞中也有明显的 V E GF 免疫反应活性, 而 () 且在曲细精管不同区段的生精细胞组合中其 710061 血管内皮生长因子 是新生 V E GF 表达有明显的差异。 血管形成的主要调控者之一。V E GF 不但作 用与内皮细胞, 而且也作用于非内皮细胞, 它 , 我们首次发现在附 在正常大鼠附睾中 睾管的始段、头部、体部和尾部, 以及输精管 可能对男性生殖具有调节作用。 精索静脉曲 () 张 是男性不育的一个主要原因, 的 上皮中, V E GF 阳性的细胞数和活性有明显 V C V C 睾丸流体动力学和血管系统有所改变, 睾丸 的差别。V E GF 主要定位于附睾管上皮主细 ( )胞, 在基细胞和一些大的晕细胞 巨噬细胞 和 附 睾 中 的 表 达 是 否 会 有 改 变, V E GF 中也可见到。 在一些管周的肌样细胞中也有 在精索静脉曲张性不育中是否起作用V E GF 等至今未见报道。 本研究通过免疫组织化学V E GF 阳性反应。 在附睾管固有层内, 毛细 方法对正常大鼠和 大鼠睾 丸 和 附 睾 中V C 血管和小血管的内皮为 V E GF 阴性, 而一些 的定位及变化作了研究。血管的管周肌细胞中为阳性。 V E GF 和方法: 建立青春期大鼠左侧精索 精 索 静 脉 曲 张 大 鼠 的 睾 丸 和 附 睾 中,静脉曲张动物模型, 并进行了验证。 V E GF 的免疫反应活性有明显改变, 曲张时 间不同, 其表现也有差异, 左右侧睾丸和附睾 取曲张组及对照组大鼠双侧睾 丸 和 附 ) ( 睾, 用 ′液固定 244?, 脱水, 石蜡Bo u rn s h r 的 V E GF 免疫反应强弱也不同。 抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响包埋。 切片 5- 6常规脱蜡至水。 分别作, Λm 3 钟翠平 复旦大学医 顾云娣 王燕平H E 染色和免疫组织化学染色。 学院组织胚胎学教研室 中国科学院上海细 免疫组织化学染色: 11 用 1mM ED TA 3() 8. 0煮 沸 切 片 10、室 温 冷 却 20 上海 200032 日的: 观察 pH m inm in 胞生物研究所 以修复抗原。 21 用 3% 室温 10, 封抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的 H 2O 2 m in ( 闭内源性过氧化物酶, 用 0. 017.情况。 方法: 用完全佛氏佐剂免疫 B 10. A 小 M PB S pH ) 4洗 4 次, 10次。 31 正常血清室温封闭ƒm in 鼠, 21 天后解剖, 取出腹部淋巴结, 制成冰冻 20。 41 用 0. 01多克隆兔抗人重组 切片。 ƒh rm g m l 体 抗 体 4?孵 育 24, 阴 性 对 照 采用 原位染色法, 步骤如下:165 V E GF h rTU N EL 切片用不含一抗的 缓冲液孵育, 洗PB S PB S 11 制备冰切片, 过夜; ( ) ) ( 固 定 4 4 次。 51 用生物素标记羊抗兔 二抗室 21 用 4% 多 聚 甲 醛 , 7. IgG PB SpH 10 分钟, 然后 洗 30 分钟;温孵育 2 小时, 洗同上。 61 用抗生物蛋白链 PB S 111 ( ) 部分远曲小管的上皮细胞内, 肾小球的系膜 31 用 3% 22 甲醇稀释封闭, 室温下 H O 10 分钟, 然后 洗 30 遍;区亦见散在的表达。 在完全或不完全硬化的 PB S ( 41 用 0. 1% - 100 0. 1% 柠 檬 肾小球周围的萎缩肾小管并伴有淋巴细胞浸 T r ito n X ) () 酸钠在冰上 4?作用 2 分钟, 然后 洗润区域可见大量的 的表达。 为 、PB S T GF Βb F GF 2 遍;进一步了解上述细胞因子存在的位点, 我们 51 擦干切片, 每张加 50反应 Λl TU N EL 选用了金标法进行了免疫电镜观察。混合液, 置于湿盒中放于 37?反应 30 分钟, 1、材料和方法然后 洗 3 遍;PB S 111 材料 肾活检组织主要来源于哈尔 61 擦干切片, 每个样品加 50, 置 u l POD 滨医科大学附属第二院肾内科。 选用通过光 于湿盒中放于 37?反应 30 分钟, 然后 PB S 镜、免疫荧光、电镜诊断为 的 20 例环 IgA N 洗 3 遍;氧树脂包埋的组织块。 71 每个样品加 50 - 112 方法 ?免疫组化: 和 100u l DA B 底物混 T GF Βb F GF ( () 抗体均由北京生物制品有限公司提供。 采用 合物 : : = 1: 1: 1; DA B H 2O 2T r is 法, 具体步骤略。 ?免疫胶体金: 羊抗 sA BC 81 室温下孵育 10 分钟, 然后 洗 3PB S 兔 胶体金 3和 5, 由武汉博士德 - IgG nm nm 遍;生物工程有限公司提供。采用间接法, 具体步 91 脱水, 封片, 拍照。骤见 [ 免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的 101 同时, 用不加末端脱氧核糖核酸转 几点体会 ]宋雁南等一文。 移酶作为阴性对照。 2、结果 211 免疫组化检测 在 、T GF Βb GF G I2 结果: 切片中出现核深棕色的为阳性结 中弥漫的分布于肾皮质区的近曲小管 gA N 果, 即凋亡细胞。正常淋巴结中已经存在凋亡 ( 和 部 分 远 曲 小 管 的 上 皮 细 胞 内 70% 和 细胞, 而用抗原免疫后的淋巴结中凋亡细胞 ) 90% , 在肾小球内可见散在的细颗粒分布于 的数量明显增多。 ()系膜区 45% 和 35% 。 结论: 活化激活的淋巴细胞凋亡是调节 免疫反应的一种主要机制。 ( 212 免 疫 胶 体 金 检 测 用金标法检测细胞因子在人 肾组织内 IgA N 金 颗 粒 标 记 ) T GF Β、b F GF 细胞因子主要集中于小管上 的位点及意义 金晓明 钟志玖 赵瑞波 黄淇 宋雁南 张莉 迟月明 洽尔滨医科 皮细胞的胞质, 有的沉积于线粒体内, 或刷状 大学病理学教研室 哈尔滨医科大学电子显 缘其间, 或内质网表面等, 在肾小球的系膜 ( 微 镜 室 哈 尔 滨 150086 肾 病 区、基底膜、内皮细胞及足细胞, 亦可见散在 IgAIgA ) 的或集中的金颗粒。 在肾间质内也表 , , 为世界各地区最常见 b F GF N ep h rop a th yIgA N 的肾小球疾病之一, 其中 13 的病人于 10,ƒ现为散在的金颗粒。 20 年内逐渐进展为慢性肾功能衰竭。目前对3、讨论 ) ( 金标法是 和 年提 1971 F au lk T ay lo r 的研究热点是多肽类细胞因子在肾脏 IgA N 出的, 并首先用于免疫电镜。金标法是利用胶 疾病中的作用。 作者等通过用转化生长因子 体金在碱性环境中带负电的性质, 使其与抗 ( )()、血小板源生长因子 、成纤 T GF ΒPD GF 体相吸引, 从而将抗体标记。金颗粒集中的部 () 维细胞生长因子 对 20 例 的免 b F GF IgA N 位, 既是抗原、抗体反应的部位。通过金标法, 疫 组 化 检 测 发 现, 在 和 T GF Β b F GF IgA N 可以在细胞器的水平上观察到 、T GF Βb F GF 的活动期大量表达于肾皮质区的近曲小管和 112