黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果研究

黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果研究 分类号: 墨:垒 单位代码: 墨昼 密级: 学 号: 公珏 墨垒垒墨 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗 /口 奶牛乳房炎效果的研究 学位申请人:白丽欣 指导教师:郝满良副教授 学科专业:临床兽医学 学位类别:农学硕士 授予单位:河北农业大学 答辩日期:二。一一年五月十四日究成果。 或撰写过 而使用过 明并表示 定,有权 本人授权 以采用影摘要 本试验采用琼脂平板扩散法打孔法和试管二倍稀释法,用黄连蒲 注射液 对引起奶牛乳房炎的三种主要致病菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌 进行体外抑菌试验,结果发现,黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为 .,对大肠杆菌抑菌圈直径为., 对无乳链球菌抑菌圈直径为 .,说明黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌均有较 好抑菌效果;黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为. /,最小杀菌浓度为. /;对大肠杆菌和无乳链球菌的最小抑 菌浓度和最小杀菌浓度均为. /,说明黄连蒲注射液对金黄 色葡萄球菌低浓度时呈现抑菌、高浓度表现为杀菌作用;而对大肠杆菌和无乳链 球菌抑菌浓度和杀菌浓度相同。为防治奶牛乳房炎有效中药复方的筛选提供了理 论依据。 采用小鼠耳廓肿胀、毛细血管通透性和棉球诱发小鼠肉芽组织增生方法研究 了黄连蒲注射液的抗炎作用;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、小鼠吞噬细 胞碳粒廓清能力、以及胸腺指数、脾脏指数研究了该注射液的免疫作用;采用改 进法,以半数致死量作为评价急性毒性强度的指标,研究了该注 射液的急性毒性,并对该注射液的热源性、刺激性进行了检测。结果表明,黄连 蒲注射液高、中剂量组对小鼠耳廓的肿胀度分别为.、.,与对照组 生理盐水的肿胀度.相比差异极显著.;对毛细血管通透 性的值,高、中、低剂量组分别为.、.、.,与对照组生理盐水 的值.相比差异极显著.;对小鼠肉芽组织增重,高、中、 低剂量组分别为.、.、.,与对照组肉芽组织增重. 相比差异极显著.;高、中、低剂量组对小鼠胸腺指数、脾指数的增加 有极显著性差异.;高、中剂量组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬红细胞能力与 对照组比较具有极显著性差异.;高剂量组对小鼠吞噬细胞碳粒廓清能力 与对照组相比差异极显著.,中剂量、低剂量与对照组相比差异不显著; 急性毒性试验为./。数据表明黄连蒲注射液对急性和慢性炎症 有显著的抗炎作用,能增强机体的免疫功能,且安全可靠。 采用乳头管攻菌法,将金黄色葡萄球菌以/为攻菌剂量致家兔乳 房炎,模型成功后,以黄连蒲注射液高、中、低剂量乳池灌注,对照组用生理盐 水。结果显示,人工感染家兔乳房炎模型后,家兔出现体温升高, 心率和呼吸频 率增加,乳区红肿明显,饮食欲基本废绝,精神沉郁。治疗.天,家兔体温、 心率、呼吸频率逐渐恢复正常;从血常规方面比较,各组红细胞总数、血红蛋白 含量在造模前至造模后天内无显著差异.,用药组白细胞总数、淋巴 细胞数、中性粒细胞数在造模后显著高于造模前水平.,治疗天后恢 复到正常水平.,对照组在造模前后无显著差异.。结果表明, 黄连蒲注射液对家兔临床型乳房炎的治疗效果显著。效研究表明黄连蒲注射液对奶牛乳房炎的治疗效果明显,可以有效地 .自由基清除酶活性,降低、等自由基含量,达到 房炎的目的。 连蒲注射液;抑菌作用;抗炎作用:安全试验;奶牛乳房炎;疗效 : :. :. ,. . . . . . . . . . /,/, . /. . , , . ., ,, . ,. , .,. . , . .,.,.,., . ,, . . . , . ,. , , . . , ,. . , , . . 曲 ,.,. . , , . ? ,. , / ., , , ., , , , . . . . ., . , .. , ,?, ,. : ;? ; ; ;缩写 词表 缩写词 英文全称 中文全称 . 金黄色葡萄球菌 .大肠杆菌 无乳链球菌 . 菌落形成单位最小抑菌浓度 最小杀菌浓度 半数致死量超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 丙二醛一氧化氮 吸光度 目录 ;言??.. .奶牛乳房炎的发病率.奶牛乳房炎的危害 .奶牛乳房炎的类型 ..临床型乳房炎一 ..隐性乳腺炎.. .奶牛乳房炎的发病原冈? ..病原微生物方面的因素?. ..奶牛乳房炎的诱发因素?。 .奶牛乳房炎的发病机理? .奶牛乳房炎的诊断 ..临床型乳房检查..隐性乳房炎的诊断. .奶牛乳房炎的预防 ..加强饲养管理??. ..注意挤奶卫生??. ..开发应用奶牛乳房炎疫. .奶牛乳房炎的治疗??.. ..抗生素治疗.. ..复方中药制剂治疗乳房炎. ..其它方法? .血液指标、?、与..超氧化物歧化酶 ..谷胱甘肽过氧化物酶.??.. ..丙二醛. .. 、、、与疾病的关系?。 .本试验研究的目的和意义?一 材料和方法 .试验材料. ..药物. ..动物. ..试验菌种..主要试剂。 ..试验仪器.. ..溶液的配制 .试验方法 ..体外抑菌试验..抗炎试验?.. ..毒性试验? ..安全性检测 ..黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌致家兔乳房炎疗效试验??.. 黄连蒲注射液的临床治疗试验?. ..数据处理? 结果?.. .体外抑菌试验?. ..营养琼脂平极扩散法体外抑菌效果..试管二倍稀释法体外抑菌效果? .抗炎试验. ..黄连蒲注射液对二甲苯所致小鼠耳廓炎症及小鼠毛细血管通透性的影响? ..黄连蒲注射液对小鼠棉球肉芽肿的影响 ..黄连蒲注射液对小鼠免疫器官及巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响..小鼠吞噬细胞碳粒廓清能力.毒性试验?. .安全性试验??.. ..黄连蒲注射液的热源性试验..黄连蒲注射液的刺激性试验.黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌致家兔乳房炎疗效试验?. ..金黄色葡萄球菌致家兔临床型乳房炎模型临床指标观测..黄连蒲注射液对造模乳区的治疗效果? .黄连蒲注射液临床治疗试验结果??.. ..黄连蒲注射液治疗效果? ..黄连蒲注射液对乳房炎奶牛乳清中、、、的影响?一 ..黄连蒲注射液对乳房炎奶牛血清中、.、、的影响?. .讨论??:; .影响中药抑菌效果的因素.抗炎作用 .急性毒性试验?. .安全性试验??. .黄连蒲注射液对金黄色葡萄球菌致家兔乳房炎的疗效试验 .临床治疗试验?. .黄连蒲注射液对奶牛、?、、的影响 .结论参考文献?.. 在读期间发表的学术论文? 作者简历?.. 致谢?..黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 引言 .奶牛乳房炎的发病率 奶牛乳房炎是奶牛乳腺受到物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎性变化,患病奶牛乳汁 中体细胞含量增加,乳腺组织发生病理变化,是奶牛场的常发病之一【?。奶牛乳房炎具有发病范 围广、发病率高等特点。在法国、芬兰、瑞典、丹麦、英国,奶牛乳房炎的发病率分别为%、 .%、.%、%、%。芬兰、挪威、瑞典每年冈乳房炎问题淘汰的奶牛分别一于淘汰奶牛 的%、%、%【】。全世界约有.亿头奶牛,其中约/患有各种类型的 乳房炎【】。我国乳 房炎的发病率高于世界平均水平,包括隐性型乳房炎在内的发病率平均为%【。、一 年中国农业科学院兰州中兽医研究所公布奶牛隐性型乳房炎发病率平均为.%,临床型乳房炎 的发病率平均为.%。李宏胜等【在调查成都、兰州、郑州、济南、哈尔滨、南昌六个城市 时发现,感染各种类型乳房炎的奶牛占奶牛总数的.%,许多研究人员对本地区的奶牛场也 。 进行了调查,结果显示奶牛隐性乳房炎发病率在%~%,,, .奶牛乳房炎的危害 奶牛乳房炎尽管有多年的研究,但是奶牛乳房炎仍然是奶牛群中花费最多的疾病之一,且是 造成早期犊牛发生胃肠道疾病和死亡的原因之一。乳房炎造成的经济损失,国外传统的估计是根 据死亡及末成年奶牛的淘汰、产奶量下降、牛奶品质低劣、牛奶废弃、替代品费用增加、药费开 支、兽医费用和劳动力费用等项的统计。一般认为,在乳房炎引起的经济损失中,由于产奶量降 低引起的损失占%,由于患病而使奶牛提早淘汰的占%,废弃乳汁占%,治疗或兽医费用 占%;在一个牛群中,人多数乳房炎大约%是隐性型,因此,造成经济损失的主要是隐 性乳房炎,其损失占每头泌乳母牛每年总生产能力的%~蝌】。据报道,英国每年因乳房炎 的平均花费每头是英镑,美国每头奶牛每年用于乳房炎的花费为一美元,丹麦由乳 房炎引起的经济损失为每头每年美元,加拿大每头母牛每年冈乳房炎的花费是美 元。我国每年因隐性乳房炎造成的损失约.亿元人民币【 。 奶牛患乳房炎后所产的乳汁中含有大量的炎性因子、致病菌及其产生的毒素【 ,如果饮用了 消毒不严或含有致病菌的牛奶,轻则使人感到身体不适,重者可诱发疾病。而且,现在治疗乳房 炎基本选用抗生素,有些经营者为了追求经济效益,不淘汰治疗期间的患牛乳汁,造成抗生素在 牛奶中残留,引起食用者产生过敏反应,尤其对老年人和婴幼儿危害更大【】。乳中含有丰富的蛋 白质、脂肪和糖类,在患乳房炎期间,致病菌损害乳腺的分泌细胞,引起乳腺组织损伤,使乳汁 中某些成分如乳糖、酪蛋白和乳脂等含量下降;此外,由于乳腺组织的损伤,血液中的物质极易 进入乳中,使乳汁的成分发生改变,如氯化物和血清蛋白等的增 加;并且奶牛在患乳房炎时,奶 中所含的氨基酸,特别是人体必需的颉氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等的含量均 显著降低,虽然不会影响人类的健康,但却冈营养成分的不全而降低牛奶的保健作用。 .奶牛乳房炎的类型 乳房炎分类方法较多,各国分类也不统一,有些是以感染的微生物来分类,有些是以临床症 状来分类。根据奶牛乳房炎发病的临床症状,本病可分为临床型乳房炎 和隐性乳河北农业大学硕士学位 房炎 两类。根据病理变化,可分为浆液性乳房炎、卡他生乳房炎、纤维蛋白 性乳房炎、化脓性乳房炎、出血性乳房炎等。根据病原,可分为链球菌性乳房炎、葡萄球菌性乳 房炎、大肠杆菌性乳房炎、棒状杆菌性乳房炎、真菌性乳房炎等。从中兽医学辨证的角度,可分 为湿热奎盛型乳房炎、气血癖滞型乳房炎和气血两虚型乳房炎等。 ..临床型乳房炎 乳房和乳汁均有肉眼可见的异常,临床表现明显。根据其炎症的性质不同,分为下歹种情 况【】。 ...浆液性乳房炎 浆液及人量白细胞渗到间质组织中,乳房红肿热痛,乳上淋巴结肿大,乳汁稀薄,含絮片。 ...卡他性乳房炎 单纯乳管及乳池卡他时先挤出的奶含絮片,后挤出的奶不见异常,乳区底部有轻度的肿胀, 热痛。如果全乳区的腺胞卡他,则整个患区红肿热痛明显,乳量减少、乳汁水样、含絮片。甚至 有全身症状。 ...纤维蛋白性乳房炎 纤维蛋白沉积于上皮表面或组织内,为重剧急性炎症。患区红肿热痫,乳上淋巴结肿胀,尤 其是患区硬肿明显,触之剧痛。发病后天左右即挤不出乳汁,或只挤出几滴清水。常继发乳腺 坏死或脓性液化,伴有全身症状。本病多由卡他性炎发展而来,往往与脓性子宫炎并发。 ...化脓性乳房炎 化脓性乳房炎可见下面种情况。 急性脓性卡他性炎:由卡他性炎发展而来。除患区炎症反应外,乳量剧减或完全无乳,乳汁 水样含絮片。数日后转为慢性,最后乳区萎缩硬化,乳汁稀薄或淡 黄色粘液样,乳量渐减至无乳。 乳房脓肿:乳房中有多个小米粒大至豆粒大脓肿,个别人的脓肿充塞乳区,有时向皮肤外破 渍,流出黄绿色较臭的脓汁。挤山的乳汁呈粘液脓样,含凝乳快。患区明显肿胀,周同结缔组织 。。 增生。 蜂窝织炎:乳房皮下或乳腺之间结缔组织化脓。一般是与乳房外伤、浆液性炎、乳房脓肿并 发。乳房浮肿及产后生殖器官有炎症时,易继发本病。发生于一侧乳房或一个乳区,乳量剧减, 乳汁含絮片或凝乳快。 ...出血性乳房炎 乳腺深部组织及腺管出血,多为急性,一般是半个乳房或整个乳房发病。患区红肿热痛,皮 肤可见红色斑点,乳量剧减,乳汁呈水样血红色或粉红色,内含絮片或凝乳快或血块。如不是外 伤造成,可能是溶血性人肠杆菌引起。 ..隐性乳腺炎 乳房和乳汁都无肉眼可见的变化,要用特殊的试验才能检出乳汁的变化时称为隐性乳房炎。 也称非临床型或?临床型乳房炎。其检测方法有乳汁中的体细胞 计数法,法、法、过 黄连蒲注射液约理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 氧化氢酶法、苛性钠凝乳检测法、乳汁值检测法,乳汁物理学检测法等等。 .奶牛乳房炎的发病原因 ..病原微生物方面的因素 乳房炎是乳房内的乳腺组织受到损伤产生的一种机体反应,其损伤的原冈有侵入乳房内的病 原微生物、物理性刺激和化学物质等,但绝大多数是由多种卜特定的病原微生物感染引起。引起 奶牛乳房炎的微生物种类很多,如细菌、病毒、真菌、支原体等,人们已从患病奶牛的乳汁中分 离出了多种微生物,比较常见的有多种【 ,以细菌最为多见。其中革兰氏阳性葡萄球菌 和链球菌具有国际广泛性,是引发乳房炎的主要致病菌,少数病原菌如大肠杆菌、化脓棒状杆菌、 蜡样芽孢杆菌、绿脓杆菌等也可引起地方性流行,此外,乳粉孢霉、马红球菌、粪产碱杆菌、克 柔氏念珠菌、粘质沙雷氏菌等病原微生物也可引起奶牛乳房剡。 ...细菌 革兰氏阳性细菌是引起乳房炎的最主要细菌,%~%的病例是由葡萄球菌和链球菌感染 所引起的。其中包括链球菌属,与乳房炎有关的主要是无乳链球菌 、停乳链球菌 、乳房链球菌 、化脓链球菌 和兽疫链球菌 。感染本属菌时,多无临床症状或症状不明显,该菌属是导致隐性乳房炎的主要 致病菌,多呈慢性经过,愈后可导致乳腺萎缩和间质增生。无乳链球菌专门寄生在乳腺中,有高 度传染性,属于传染性致病菌,潜伏期可达数周或数月,不易被发现,可通过挤奶人员的手和消 毒不严的挤奶杯以及牛舍中的蝇类为媒介进行传播,因此可采用乳头消毒及干奶期常规有效的治 疗来消灭无乳链球菌。乳房链球菌、停乳链球菌、化脓链球菌、兽疫链球菌引起的乳房炎,大多 通过乳房或乳头的损伤和挤奶人员的手传播,传染性较小,属于环境性致病菌。链球菌属导致的 乳房炎用抗生素治疗效果比较可靠,国外报道使用羟氨苄青霉素的效果最好【 ,】。葡萄球菌 、表 属,与乳房炎密切相关的主要有金黄色葡萄球菌 皮葡萄球菌 。葡萄球菌广泛地分布丁自然界,空气、饲料、饮水、 地面、物体表面、人及家畜皮肤等处均有葡萄球菌的存在。金黄色葡萄球菌主要在泌乳高峰期感 染奶牛,常为慢性经过,引起乳房的肉芽肿与纤维变性;也可呈最急性型,是由于细菌产生的毒 素所致。葡萄球菌经常存在外界环境中,一般通过挤奶人员的手臂、擦洗乳房用的布和消毒不严 的挤奶杯传播,细菌常寄生在乳头皮肤表面,当括约肌或靠近它的组织有损伤时,由乳头管口侵 入。有时感染后不表现临床症状,使用抗生素治疗效果好,但容易发生二次感染,近年来滥用抗 生素,造成抗药菌株逐渐增多。棒状杆菌属,其中的化脓棒状杆菌 是引起乳房炎的主要细菌,多感染干奶期奶牛和青年奶牛,常通过 乳房外伤造成感染,一般不具有传染性。革兰氏阴性细菌中引起乳房炎有大肠杆菌属 等,尤以大肠杆菌最为重要。 、克雷伯氏菌属和产气杆菌属 这些细菌到处存在,属环境性致病菌,侵入乳房的机会多。在美国对于革兰氏阴性致病杆菌有一 个专门的名词来称呼它们??加州菌群,其中就包括上述几种杆菌。近年 河北农业大学硕学位毕业论文 来,大肠杆菌的检出率渐增加,在佛山地区奶牛临床型乳房炎的病原菌中大肠杆菌占%?,李 宏胜等报道分离出的大肠杆菌占病原菌总数的.%,仅少于链球菌。大肠杆菌来源于牛粪及其 污染的环境,从损伤的生殖道进入血液或淋巴引起感染,多感染舍饲牛,严重的可引起乳房坏疽。 大肠杆菌性乳房炎多见丁高产奶牛及产后泌乳高峰期,临床症状明显,乳房肿胀、.高热,食欲废 绝,并伴有胃肠道症状,乳汁水样黄色,泌乳量急剧卜.降,表现为急性发病,少数动物可死于内 毒素血症,由于铁结合蛋白乳铁蛋白的抗菌活性作用,干奶期乳腺对大肠杆菌感染有抵抗力。绿 脓杆菌性乳房炎一般散发,近年来多有报道【】,病原菌主要存在于水和土壤中,饮水也可感 染,患病乳区肿胀,乳汁水样有凝块,患畜全身症状明显,抗生素治疗效果不佳,最有效的控制 办法是在干奶期进行预防治疗。产气荚膜杆菌感染是由于乳房注入污染了的抗生素制剂所致,发 生急性坏疽性乳房炎,常为爆发性。 ...病毒 病毒一般不直接引起乳房炎,常作为一个诱发细菌感染的因素存在。主要有牛乳头炎疱疹病 毒、牛痘病毒、口蹄疫病毒等,一般是乳头皮肤感染,产生丘疹、疱疹、水泡,从而继发其他细 菌感染导致乳房炎。 ...真菌 真菌中引起乳房炎的有念珠菌属、隐球菌属、毛孢子菌属 和曲霉菌属等,一般呈散发,不具传染性,多发生于用抗生素治 疗之后,或药品和器械被真菌污染。隐球菌属和诺卡氏菌属感染常可引起严重的临床型乳房炎, 患笛发热,乳房肿大,食欲废绝,产奶量下降,预后不良。 ...支原体 支原体广泛地存在于人类、哺乳动物、爬虫动物、鱼类、灵长类和植物中【。支原体没有细 胞壁,最外层为一简单的质膜,拥有微小的基因组,与细菌相比其物质代谢能力比较低,由于 支原体没有与抗生素发生反应的细胞壁相关蛋白,所以对抗生素抵抗性较强【。支原体的基因组 很简单,是较低等的生物,同时也是一种重要的病原微生物,能引起奶牛乳房炎的支原体至少 有种,较常见的是牛支原体。牛支原体具有传染性,通过挤奶、呼吸和配种途径传染,可继 发其他器官组织发病伫,国外报道较多的是加州支原体‘。支原体感染引起的乳房炎,常涉及多 个乳区,起初分泌的乳汁正常,偶有颗粒状或片状的沉淀出现,后期常出现浓稠的、无异味的乳 汁,乳房肿胀、坚硬,几天后乳腺缩小,乳汁分泌迅速减少,乳上淋巴结肿胀,引起发热等全身 症状,常伴有关节炎性跛行。乳汁中支原体随乳汁、唾液或阴道分泌物排出体外,通常可存活 个月甚至更长,具有感染威胁,有的病例还伴有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等细菌感染,通常 不表现明显的全身症状。 ...钩端螺旋体 钩端螺旋体是最近才见报道的乳房炎病原体,七日热钩端螺旋体?群是最重要 的病原,其中最常见的是 ,它与“乳下降综合症”及感染牛群的流产有关, 引起的乳房炎首先出现特征性泌乳减少,乳汁粘稠或发生凝集,在小时内停 止泌乳,患牛体温升高,乳房出现炎性症状。用四环素或链霉素治疗效果较好,且能减少隐性感 染。 综上所述,引起乳房炎的致病微生物复杂多样,且又具有地区差异性,在临床中,往往是两 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 种或两种以上的病原微生物共同作用于机体,呈现混合感染,一般细菌混合感染的比较常见,大 部分是葡萄球菌和链球菌混合感染,我国学者报道的多为无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌混合感染,优势菌冈地区、环境、饲养管理条件、奶牛个体差异 的不同而不同,近年来我国研究人员发现大肠杆菌的发病率有上升的趋势,可能与周围环境因素 有关,如畜舍环境卫生差、粪便污染乳房而引起。杨克礼等还报道了酵母菌感染而引起乳房炎 的病例。除了细菌感染外,也有应用抗生素治疗后造成真菌继发感染的病例。 ..奶牛乳房炎的诱发因素 本病的诱发因素是多方面的,主要包括奶牛遗传、解剖、生理、免疫、环境因素以及季节因 素等等。 ...遗传因素 遗传因素在乳房炎发病上有一定的影响,国外关于乳房炎遗传因素的报道比较多。国外学者 报道,具有较高产奶量的奶牛易患乳房炎,并且具有遗传性‘’,。等【】证明,对高 产奶牛进行育种将导致每头子代母牛患临床乳房炎的儿率增 加%。乳房炎和产奶量高低有着遗 传关系,如果单纯地选择高产奶牛进行繁育很可能导致乳房炎发病率升高。不少患乳房炎的奶牛 都来自一个公牛的后代,有人报道了一头患链球菌性乳房炎的母牛及其头女儿和另一头奶牛及 其头女儿养在一起同样管理,但后者不得病,黑白花牛不同公牛后裔中乳房炎发病率为.%~ .%,从这些证明材料可以看出,遗传冈素在乳房炎疾病的发生上还是占有一定比例的。此外, 乳头管狭窄、乳头管形状异常,乳头形状等均有一定遗传性,而这些冈素恰恰是诱发乳房炎的客 观条件。 有些研究者还证明,血型冈子和乳房炎抵抗力之间存在相关性。还有人提出乳区均匀相称的母牛 对乳房炎有较大的抵抗力。因此,有些国家已经开始试图通过遗传选择来建立所谓清洁牛群或无 本病牛群。 ...乳房形状的影响因素 乳房的形状对奶牛来说很重要,形状良好的乳房可使奶牛具备较高产奶量。相反,乳房形状 不良,则会导致产量不高并且容易发生乳房疾病。经研究发现,乳房位置较深、前乳房附着松弛、 乳房悬垂不良、后乳房附着松弛、乳头位置向外、乳头长的母牛易患乳房炎【 刀。选择乳房位置 较浅,附着较牢固,乳头位置内向的乳房能减少由于选择高产奶牛所引起的乳房炎发病率的增加。 乳房的形状对选择高产奶量的牛有一定的参考依据,它可相对地减少乳房炎的发病率。 ...环境因素 在许多国家,由于气候条件要求一年中至少有部分时间需要对奶牛进行舍内饲养,此时像粪 便、垫草、污水、泥土、运动场及牛舍的结构等环境因素均会影响牛体的清洁,由于动物的活动 受到限制以及环境性病原菌主要是大肠杆菌、乳房链球菌、停乳链球菌和粪链球菌在牛体外 环境的繁殖,从而增加了乳头感染的机会,促使乳房炎的发生。有时气温突然升降,发病率也有 波动。因此,环境的好坏直接关系到乳房炎发病率的高低,一个良好的饲养环境可人人减少乳房 炎尤其是隐性乳房炎的发生,从根本上切断了感染的途径。另外,饲料中蛋白质含量过高,青苜 蓿等豆科植物过多,也会提高发病率。挤奶方式的选择也会影响乳房炎的发病率,挤奶为病原菌 河北农业大学硕士学位毕业论文 通过挤奶机器、挤奶人员的手或布在乳房和奶牛之间的传播提供了机会,机器挤奶牛群的发病率 比人一挤奶高倍。机器挤奶时,由丁压力的关系可引起乳头粘膜外翻、皮肤皴裂、出血、 糜烂,造成感染条件,压力不稳定更易引起乳房炎,过度挤奶造成乳头外翻,也是增加乳房炎发 病率的一个主要因素,此外人上挤奶技术不熟练、乳汁不能挤尽、挤奶方式不合理等冈素都可提 高乳房炎的发病率。 ...防御机能的影响 乳头导管是微生物入侵的途径,也是抵抗感染的主要屏障。牛乳头导管的度从~ 不等,平均为,导管的高度角质化表面是维持屏障机能的关键,屏障机能既有物理成分, 又有化学成分,在乳头导管角蛋白的内部,有抗菌脂类和蛋白质组成的防护体系。机器挤奶操作 中的某些缺陷能影响乳头导管的防御能力,引起导管内感染,尤其是靠近乳头入口处最易感染金 黄色葡萄球菌或无乳链球菌,这些致病菌破坏机体的自身抵抗能力而导致发病。总之,引起乳房 炎的原因非常复杂,往往是多种冈素联合作用的结果。在实际中面对具体病例,我们应从环境、 微生物和牛自身的角度去分析乳房炎产生的原因,抓住主要矛盾和矛盾的主要方面,为下一步治 疗乳房炎提供依据。 .奶牛乳房炎的发病机理 乳房炎引起的组织学病理变化具体体现在乳腺分泌障碍和乳腺组织病变上,当病原微生物侵 入乳腺上皮细胞或乳房乳头受到损伤时,可以引起乳房组织的抵御性炎性反应。在炎性反应的初 期,受损害乳区血管扩张,血流变慢,血管通透性增加,血管中含有的炎性介质如组织胺、白细 增多引,加剧炎性反应;同时,由 胞二烯、细菌毒素以及血液中的凝同性因子 于渗出物中含有凝固性因子,渗出物很快在乳房组织内凝固,造成泌乳障碍。若感染比较严重, 则可导致泌乳腺泡损坏,而使该乳区失去泌乳功能。如果对乳房的刺激住短时间内停止,则血管 的炎性反应也相应减退,乳房的机能可以完全或部分恢复。微生物在乳腺免疫系统中的致病机制 仍然不太清楚,对上皮细胞的黏附和侵袭力被认为是金黄色葡萄球菌乳房炎的致病机制。不同金 黄色葡萄球菌株之间黏附和侵袭力不同。目前已知金黄色葡萄球菌具有荚膜多糖 ,和纤维结合蛋白. ,,可产生.毒素、. 毒素、肠毒素及其亚单位蛋白。毒素是人和动物多种金葡萄产生的内毒素,对嗜中性白细胞 和巨噬细胞具有细胞毒素能力;具有抗吞噬活性,并阻止中性粒细胞识别金黄色葡萄球菌细 胞壁成分的抗原,传统疫苗效果不佳的可能原因是金黄葡萄菌具有;促进金黄色葡萄球 菌对宿主细胞的黏附,是介导金黄色葡萄球菌到达宿主细胞的毒力因素之一【”。 .奶牛乳房炎的诊断 患有临床型乳房炎的奶牛乳房有红、肿、热、痛等炎性症状,乳汁出现絮状物,乳汁分泌不 畅且明显减少,严重者肿胀疼痛明显,食欲减少,产奶量急剧减少或产奶停止,诊断比较容易。 隐性乳房炎由于不表现任何症状往往难以用肉眼做出诊断,通常依靠实验室方法做出诊断。 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 ..临床型乳房检查 患病乳区出现红、肿、热、痛等炎性症状,乳汁出现絮状物,乳汁分泌不畅且明显减少,严 重者肿胀疼痛明显,食欲减退,产奶量急剧减少或产奶停,乳汁中出现血液、絮状凝块‘。必 要时可进行细菌培养,以便确定选用何种药物治疗效果最佳,做到对症下药。 ..隐性乳房炎的诊断 ...乳汁病原微生物检查 在乳汁中检查出病原微生物可人致诊断为隐性乳房炎,但对于非特异性隐性乳房炎,乳房、 乳汁不但不表现肉眼变化,而且乳汁中也检不出病原菌。且有些病原菌虽然存在于乳房内,但不 一定引起发病。因此,根据乳汁中有无病原菌来诊断并不可靠,只可以根据检出的病原菌的种类、 数量作大致判断【。 ...乳汁细胞计数法 奶牛患乳房炎后,乳汁中体细胞的数目,特别是白细胞的数目显著增加。在乳腺感染细菌后, 细菌的代谢产物诱导大量的多形核白细胞艄腺细胞。同时,损伤脱落的上皮细胞也 进入乳中,致使乳汁中的体细胞增加?】。根据这一原理,计算每毫升乳汁中的体细胞数,这是诊 断隐性乳房炎的基准,也是与其他诊断方法作对照的基准。方法有直接显微镜细胞计数法 、体细胞电子计数法、奶桶奶细胞计数法和牛体细胞计数法 等。 ..化学检测法 化学检测法是间接测定乳汁细胞数和乳汁值的方法。 ..法 加利福尼亚乳房炎检测方法,其英文为 的缩写。该法对乳房炎检 出率很高,可在现场作出诊断,是一种常规诊断方法。其表现为乳汁细胞表面活性物质在碱性药 物的作用下使脂类物质乳化,乳汁产生沉淀或形成凝块。根据沉淀或者凝块的多少,间接判定乳 中细胞数的范围而达到诊断的目的。乳中细胞数越多,产生的沉淀或凝块也越多,但此方法不适 于初乳期和泌乳末期。 由此法衍生的方法有 法和日 法、 本的法。中国农科院兰州兽医研究所、浙江农业大学、北京市奶牛研究所和吉林农业大学等 根据国内药源及..法原理相继研究出几种类似..的试剂,分别简称为、、 和。 ..试验 ..为 的缩写,即溴麝香草酚监试验。乳房炎发生时,乳汁中的 上升,通过测定乳汁值便可以达到判定目的。在检验值的方法中,..试验是操作比较 简单且常用的方法,分为试管法和玻片法。 ...物理学方法 奶牛发生乳房炎时,乳中氯化物含量增加,电导率值上升,可以通过检测乳汁的电导率来监 河北农业人学硕:学位毕业论文 测隐性乳房炎,其依据是通过检查乳汁中离子浓度的变化监测奶牛乳房炎的发生【。该方法迅速、 准确。祁克宗【】等人的研究表明,隐性乳房炎的乳汁的电导率均高于正常值,但不同的个体及不 同的饲养管理状况,乳汁的电导率变化较大,因此判断隐性乳房炎的关键是确定不同牛群正常乳 汁电导率的闽值。从世纪年代开始,人们就开始研究利用隐性乳房炎乳汁的导电性增强的 原理来检测隐性乳房炎。日本首先生产出便携式的袖珍诊断仪。国内己使用的有山西农大. 型乳房炎诊断仪、乳房炎诊断仪【等。 ...其他方法 酶学检测法,研究认为有.乙酞.?.氨基葡萄糖苷酶可检验隐性乳房炎的 存在,这种方法相对快捷,它可以反映乳房炎感染的严重程度和治疗后乳腺的恢复情况。乳汁中 乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶,可以作为诊断隐性乳房 炎和乳 腺损伤的重要指标。 .奶牛乳房炎的预防 ..加强饲养管理 将乳牛按产奶量、泌乳期分群,根据不同的生产阶段供给全价、搭配合理的饲料,应该维持 ...的钙磷比。保证充足的维生素,维生素,维生素,.胡箩卜素及各种微量元素,特 别是,,的供应,预防代谢病引起的乳房炎。能改善奶牛的整体免疫机能从而降低乳 腺炎的发生率【。史清河报道奶牛日粮中单独添加或共同使用.占月萝卜素、维生素、、 、等这些抗氧化性微量养分可增强机体对乳腺炎的抗病力。尽肇避免饲料的突变和过量饲 喂,特别是浓缩料和非蛋白氮的饲喂。保持牛体、圈舍、运动场卫生,及时清除垫料。垫料应干 净、干燥,最好经太阳曝晒后使用。有条件的应交替使用有机垫料和无机垫料无机垫料中大肠 杆菌含量少,定期用生石灰或其它化学消毒剂喷洒消毒内外环境。减少应激因素,保持圈舍温 度适宜,牛群密度合理,通风良好,必要时给予维生素制剂缓减应激。粪便、垫料应在距牛舍 米外堆积发酵,消除环境中能使乳头损伤的因素。购买奶牛时,首先应查阅该牛的档案资料, 然后仔细检查,及时剔除那些已感染的牛只,特别是弧临床感染。应购买犊牛或通过自繁来更新 牛群。淘汰那些反复患乳房炎或患有重度乳房炎的牛只,那些乳头受到损伤难以治愈的奶牛,在 整个泌乳期其乳中体细胞数一直较高的牛只也应该淘汰【。此外,干乳期的饲养管理也是非常重 要的。在泌乳期的最后两周,应迅速减少饮水的量,减少纤维和干草的饲喂以减少奶牛泌乳。进 入干乳期,麻饲喂含有良好的能鼍蛋白的粗饲料,应保证日粮中的矿物质平衡。在产前的.周, 应适量饲喂富含能量的浓缩料。在停乳后天和产后天药浴乳头,可有效防孚房炎的发生 。 ..注意挤奶卫生 清洁的挤奶习惯可以有效的避免病原微生物的传播和扩散,预防乳头和牛只之间的传染。挤 奶前必须用干净的热水彻底清洗乳房,清洗后要擦干。这样可有效预防环境性乳房炎,还可以促 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 进奶牛泌乳。清洗乳房时,每头牛使用各自的毛巾,避免病原体传 染。坚持合理的挤奶制度,挤 奶时应先挤头胎牛,再挤正常牛,然后挤高体细胞数的牛,最后挤被感染的牛。此外,坚持乳头 药浴也是预防乳房炎的有效措施,它可减少接触传染性微生物的感染的可能性‘。 ..开发应用奶牛乳房炎疫苗 免疫接种控制传染病是一种经典的预防手段,利用疫苗防治奶牛乳房炎不仅有助于降低乳腺 感染的严重程度,控制亚临床型乳腺炎,而且没有药物残留,可保证乳品的卫生质量。但是,应 用活的或灭活的菌体苗、分离的肽糖、类毒素、粘附素等制作的传统疫苗,对防治金黄色葡萄球 菌乳腺炎的效果并不理想。关于链球菌疫苗研究得较少,主要为无乳链球菌和乳房链球菌,但效 果均不理想。目前已研制出金黄色葡萄球菌疫苗、. .基冈工程苗以及金黄色葡萄球菌、 无乳链球菌、停乳链球菌的多联苗瞰,但是由于奶牛乳房炎病原体种类繁多,且具有明显的地域 性,使疫苗的推广应用受到很大的限制。 .奶牛乳房炎的治疗 ..抗生素治疗 抗菌药物是防治奶牛乳房炎的一种有效手段,特别是在急性、多 发性和弧急性乳房炎治疗、 控制奶产品质量上或作为综合防治中的一个重要组成部分,具有重要应用价值。对临床型乳房炎 最有效的方法是往乳头里送药,研究表明干奶期注射的效果好于泌乳期。常用药有青霉素、链霉 素、红霉素、卡那霉素、磺胺药物、普鲁鼍因、地塞米松等,对于临床型乳房炎,治疗一开始选 用广谱抗菌药物或通过抗菌药物的联合达到广谱抗菌效果。虽然对革兰氏阴性菌,特别是火肠杆 菌引起的乳房炎感染有较高的治愈率,但有时也选用针对革兰氏刚性菌有效的抗菌药物【。金 黄色葡萄球菌对多种药物特别是青霉素易产生耐药性,加之特殊的致病性和细胞内寄生,常给治 疗带来困难,细菌治愈率不到%。但采用全身给药结合局部乳池灌注可提高对金黄色葡萄球菌 治愈率【 现行治疗措施常采用速效制剂进行短期治疗,强调消除临床感染症状,以期恢复产 奶量。有报道证明青霉素、大环内酯类、喹诺酮类药物对链球菌类敏感;氨基糖苛类及喹诺酮类药 物对金黄色葡萄球菌高度敏感,而青霉素、大环内酯类、四环素类以及其它抗生素药物则相对不 敏感;喹诺酮类、痢特灵等药物对大肠杆菌高度敏感,而青霉素 类、大环内酯类、氨基糖苷类、 四环素类相对不敏感。目前用于防治乳房炎的抗菌药物对金黄色葡萄球菌引起的乳房炎治愈率较 低,另外由于抗生素的大量使用所带来的负面影响日渐突出,金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆 菌等致病菌的耐药性问题越来越严重【,因此,选用新型抗菌药物治疗奶牛乳房炎己是一个重要 的问题,但研制药物的费用与带来的效益比例能否协调,达到人们的预想效果还是一个未知数。 ..复方中药制剂治疗乳房炎 天然药物中,许多中草药及其活性成分具有抗菌、抗炎和免疫调节作用,对奶牛乳房炎的防 治具有潜在的研究和开发价值。据现有的报道来看,枇杷叶煎剂、野菊花注射液、南瓜籽油、毛 河北农业大学硕士学位毕业论文 白杨提取物、蒲公英注射液、天葵子、丹参注射液、臭牡丹、仙人掌、野葡萄根、芦荟等单味中 药对奶牛乳房炎具有较好的防治作用,而六茜素、消炎醒、鱼腥草素等中草药活性成分对奶牛乳 房炎也具有较好的防治效果。显然,中草药及其活性成分作为抗生素替代品在防治奶牛乳房炎上 具有巨大的潜力,但是至今尚无作用机制清楚、成分明确、效果 突出、临床上大量推广使用的研 究报道,故亟需进一步深入研究发掘。 ..其它方法 为了减少或避免抗生素、磺胺类药物和硝基吠喃类药物在乳汁中的残留,有关科技人员开发 了无害于健康的各种疗法,其中激光疗法和超高频电磁波疗法己取得效果。近年俄罗斯兽医学者 等以超高频磁场为基础,研制出一种可以在挤奶同时治疗乳房炎的手提式超高频磁场挤奶器,它 可以大大减轻兽医人员的操劳,其对隐性乳房炎的治愈率为%.%,对临床型乳房炎的治愈率 为%【删。防治乳房炎的疫苗尚处在研制阶段。有报道称,使用. 分子工程苗可以刺激 产生抗内毒素的抗体,从而抵御肠杆菌性乳房炎。还有报道称用灭活苗、亚单位笛,以及活 苗用丁乳房炎的免疫【?,活苗的效果优于死苗。 .血液指标、、与 ..超氧化物歧化酶 超氧化物歧化酶是生物抗氧化酶类的重要成员,分为.、和. 类,它能够清除生物氧化过程中产生的超氧阴离子自由基,是生物体有效清除活性氧的重 要酶类之一,被称为生物体抗氧化系统的第一道防线。自年和硒 从牛红细 胞中发现以米,的研究就成为了生物学的前沿课题之一。人们通过对的,“泛深入 的研究,极大地丰富和推动了自由基生物学的飞速发展。作为专一清除。的酶,能够催化 如下反应: 对于.而言,所催化的歧化反应为二级反应,即反应的速度与双底物的乘积成正比。 一般而言能够抑制该酶的活性,一是由于产物抑制,二是由于能够改变酶的构象,影 响酶活力。另外,多余的能够转化为氧自由基,使酶蛋白变性和核酸突变,降低酶的活性。 虽然是自然界唯一清除‘的酶,却也能以为底物,在有氧条件下和无氧条件下分别催 化如下反应: 一 一随后水解成和 ..谷胱甘肽过氧化物酶. 谷胱甘肽过氧化物酶.,于年被从牛红细胞中发现。从人与动物的组织 或细胞中提纯的.,是一种水溶性四聚体蛋白质,四个弧基相同或极为类似。.可使 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 转变为或使许多有机氢过氧化物还原为,但在催化反应中需要作 为氢供体,其反应式如下: ?子 ?计 .在过氧化氢酶含量很少或产量很低的组织中,可代替过氧化氢酶清除。加之 能广泛的清除有机氢过氧化物,故有防止畸变、预防衰老及参与前列腺素合成等重要疾病或生理 作用。无论体内实验还是体外实验,清除脂类过氧化氢物的速度均决定于.的浓度。综上 所述,谷胱甘肽过氧化物酶是清除与许多有机过氧化氢物的重要酶,它作为抗活性氧酶之 一日益受到重视。 ..丙二醛 机体通过酶系统与非酶系统产生的氧自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸,,引发脂质过氧化作用,并冈此形成脂质过氧化物。如:醛基 丙二醛、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基,以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用 不仅把活性氧转化为活性化学剂,即非自由基性的脂类分解产物,而且通过链式或链式支链反应, 放大活性氧的作用。因此,初始的活性氧能导致很多脂类分解产物的形成,这些分解产物中,一 些是无害的,另一些则能引起细胞代谢及功能障碍,甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不 饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤,而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而 的含量可反映体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程度。 .. 、.、、与疾病的关系 与机体的衰老有着密切关系,当机体处于生理状态时,自由基不断产生同时也不断清除, 而当老化细胞内各种抗氧化剂减少,对自由基及过氧化物的清除能力减弱时,脂质过氧化物含量 就会增加。陈瑾对青年、老年两个年龄组中血液,含量进行了测定,随着年龄的增加, 含量减少,含量增加【。对类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、放疗引起的炎症 等抗炎作用非常明显这是因为组织处于炎症时期,由于噬中性白细胞对微生物进行吞噬,由膜联 超氧化物合成酶合成’,而过多的。如不能及时分解,则可渗入细胞周围,破坏正常细胞,引 起局部炎症。最近有人发现,许多型糖尿病并发血管病变患者血浆内的含量低于正常 值。因此,在人医临床上利用的含量、活性变化与癌病变关系作为肿瘤病的前期诊断试剂, 有着深远意义。在对萎缩性胃炎患者的研究中发现,患者胃组织匀浆中含量明显降低。 .也是机体抗氧化酶系之一,测定.可作为判断抗过氧化能力的重要指标, .能清除体内代谢时产生的自由基离子,阻断体内脂质过氧化,并分解过氧化氢,从而不 至于形成对活细胞的有害产物的堆积,因此当机体受到氧化应激时就会发生.的变化。国 外研究发现,在非酒精性脂肪肝中可见超微线粒体受损后引起活性氧的产生,从而导致脂质过氧 化,肝细胞对氧化应激损伤更敏感】,等人研究发现肝脏受到氧化应激损伤后,引起红细 胞中.活性先升高随后小时后下降的过程?】,用四氯二苯并.二恶英河北农业大学硕十学位毕业论文 诱导产生氧化应激损伤反应后,发现脂肪细胞中的.活性无明显降低,而肝组织中 的.明显降低,从而也间接说明了肝组织中的抗氧化酶系统对氧化应激更敏感,故测定肝 组织的.活性更能反应肝组织的状况,并可避免体内脂肪的干扰。糖尿病病人由于抗氧化 系统的失调及饮食的不合理,常伴有维生素或一些微量元素等其他抗氧化剂的缺乏,所以,糖尿 。另外, 病人难免会出现增高的氧化应激状态和抗氧化酶活性的变化,如.、的降低 .的变化与高血压、白血病、鼻咽癌、子宫肿瘤等疾病都有着较密切的关系,从而进一步 地把应用于医学的临床诊断上提供了前提。 是一种具有不配对电子的自由基,由左旋精氨酸胍基末端的氮原子在一氧化氮合成酶的 催化下发生氧化而形成。除具有传递信息、舒张血管等多种生物学功能外,还与炎症有极为 密切的关系。当机体组织受到各种刺激因素如外来抗原、细菌内毒素、或细胞因子如.,., .等诱导活化时,诱导型可生成大量的有持续活性的,参与免疫系统的非特异 性防御功能,即的细胞毒作用杀伤肿瘤细胞、细菌、真菌和寄生虫等异物并可抑制病毒复制。 在免疫与炎症反应中的细胞毒作用也可损伤正常组织,导致的保护与损伤双重作用。适 量的使子宫内膜血管扩张,血流量加大,更充足的供给组织营养消除致炎物质;而过量 则促发免疫病理过程而具有细胞毒作用,会对组织造成损伤,促进炎症部位血浆渗出、组织水肿 和损伤,使炎症加重。 .本试验研究的目的和意义 奶牛乳腺炎是乳腺受到物理、化学、微生物刺激所产生的一种炎性变化,是奶牛的常见病和 多发病。目前,全世界约有.亿多头奶牛,其中约/患有各种类型的乳腺炎,造成的经济损 失每年达亿美元。在我国奶牛乳腺炎的发病率高于世界平均水平,它给我国带来的经济损失 每年达.亿元。乳腺炎主要由多种非特定的病原微生物引起,有细菌、真菌、病毒及支原体 等。研究表明金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌约占整个奶牛乳腺炎病例的%以上。自 世纪年代抗生素问世以来,乳腺炎的治疗主要依赖于抗生素,但是抗生素疗法已渐渐暴露了 它的弊端。首先是耐药菌株的出现及病原菌群的改变,使抗生素疗效下降。最新研究发现金黄色 葡萄球菌能长期潜存于巨噬细胞和乳腺上皮细胞内,而传统的抗生素通常不能渗透进入细胞或进 入细胞的浓度太低而达不到治疗效果。抗生素疗法的另一个弊端是牛奶中的抗生素残留问题,牛 奶中残留的抗生素会诱发人体发生超敏反应,给人类健康造成极大的威胁。而纯中药制剂,虽然 无残留、毒副作用小,但其抗菌效力远不如抗生素。所以,寻找或发明新的更为理想的药物是当 务之急。 本研究就是为了尽可能地克服抗生素的残留和耐药性、以及纯中药制剂抗菌效力小之不足而 展开的,论文的创造性在于揭示或验证了黄连蒲注射液具有同临床上常用抗生素相当的抗茵作 用,又具有抗生素所没有的非特异性抗炎和免疫调节作用。 黄连蒲注射液药理与毒理学及治疗奶牛乳房炎效果的研究 材料和方法 .试验材料 ..药物 黄连蒲注射液含生药/,为本实验室研制,主要成分为黄连、蒲公英等;复方黄芪 多糖注射液、复方地丁注射液、鱼腥草注射液、复方蒲公英注射液、蒲黄注射液,这种兽药均 购丁保定兽药公司;林可霉素、.胺那霉素,购于保定医药公司。青霉素钾,万单位/瓶, 硫酸链霉素,万单位/瓶,河北远征药业股份有限公司。 ..动物 小鼠:昆明系清洁级健康小鼠,只,雌雄各半,体重:,购于河北医 科大学实验动 物中心。 家兔:产仔日龄,体重 ,临床健康并无乳房炎既往病史,处于泌乳盛期的北 京大耳母兔只;体重.~.,北京大耳兔只,雌雄各半,均购自保定养 兔场。 乳房炎奶牛病例:来源于农大标本嗣和保定西郊奶牛场。 ..试验菌种 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌均为本校预防兽医学实 验室分离鉴定保存的临床分 离株。 ..主要试剂 营养琼脂 北京双旋微生物培养基制品厂,批号: 营养肉汤 北京奥博星生物技术有限责任公司,批号: 柠檬酸 天津市北方天医化学试剂厂,批号: 柠檬酸三钠 天津市化学试剂一厂,批号: 二甲苯 石家庄市试剂厂,批号: 葡萄糖 北京益利精细化学品有限公司,批号: 无水碳酸钠 天津天达净化材料精细化‘厂,批号: 氯化钠 天津市北方天医化学试剂厂,批号: 丙酮 天津市北方天医化学试剂厂,批号: 无水硫酸钠 天津新通精细化工有限公司,批号: 甲醇 天津市北方天医化学试剂厂,批号: 河北农业人学硕学位毕业论文 一次性使用微量采血管 山东奥赛特医疗器械有限公司,批号: 南京建成生物工程研究所,批号: 超氧化物歧化酶试剂盒 谷胱甘肽过氧化物酶.试剂盒南京建成生物程研究所,批号: 南京建成生物上程研究所,批号: 丙二醛试剂盒 一氧化氮试剂盒 南京建成生物工程研究所,批号: ..试验仪器 超净上作台 北京东联哈尔仪器制造有限公司 电热恒温培养箱. 上海精宏实验设备有限公司 电子分析大平 上海精密科学仪器有限公司天平厂 台式低速离心机. 赛特湘仪离心机仪器有限公司 山东新华医疗器械股份有限公司 手提式电热压力蒸气消毒器 光学显微镜 重庆光学仪器厂 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 兽用全自动血液细胞分析仪 尤尼柯上海仪器有限公司 紫外一可见光分光光度计?一 可调微量加量器 大龙医疗设备上海有限公司 体温计 上海医用仪表厂 ..溶液的配制 鸡红细胞悬液的制备无菌操作采鸡颈静脉血 ,置 三角瓶中,加入相当于鸡血体 、氯化钠. ,加 积倍的.’溶液枸橼酸三钠. 、枸橼酸. 、无水葡萄糖. 蒸馏水至,过滤分装,磅高压 、冰箱保存备用混匀,冰箱保存备用。临用前 用生理盐水洗涤次。前次离心速度为 /,离心 ,弃上清液和界面的白细胞层,最后 连续次离心 /,,直至红细胞压积值恒定,用生理盐水配成%~红细胞悬液。 .试验方法 ..体外抑菌试验 ...菌液的制备 将分离鉴定出的病原菌种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接入普通营养肉汤,无乳链球菌菌种接 种入含%绵羊血清的营养肉汤培养基,活化后】。 采用麦氏比浊法,用普通营养肉汤和含%绵羊血清的营养肉汤将细菌悬液稀释至浊度为 /备用。 ...营养