硫酸氢氯吡格雷肠溶片的研究

第一部分      立项依据 一  知识产权 通用名 商品名 英文名 剂型 规格 价格 用量 生产商 批准文号 硫酸氢氯吡格雷片 波立维 Clopidogrel HydyogenSulfate Tablets 片剂 75mg/片*7 152元 1片/天 杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司 (法国授权) 国药准字H20056410 硫酸氢氯吡格雷片 泰嘉 ClopidogrelBisulfate Tablets 片剂 25mg/片*10 132元 2片/天 深圳信立泰药业有限公司 国药准字J20080090 二  销售情况：   硫酸氯吡格雷是Sanofi-Avetnis公司开发的新型噻吩吡啶类药物，属抗血小板药物1998 年 6 月在美国首次上市 。2007年，Sanofi-Avetnis公司的Plavix（“波立维”），全球销售额达73亿美元，列单产品销售额第1位。硫酸氯吡格雷2001年进入我国，目前在国内抗血栓畅销药物中，硫酸氢氯吡格雷的市场份额增长迅速，2005年的市场份额达到了24.49％，排名由 2001年的第七位上升至2004年的第一位，目前成为我国抗凝血类药物中市场份额最大的一个产品。2007年按进口额推算，硫酸氯吡格雷的市场总额约为8.66亿元。 第二部分    硫酸氯吡格雷肠溶片的制剂学研究 一  所选剂型：肠溶片     理由：⑴  硫酸氯吡格雷肠溶片是在硫酸氯吡格雷外面包上一层包衣（肠溶衣）使它到达肠道后肠溶衣被破坏，药物再溶解被吸收。由于肠液是碱性的可以中和酸，从而可以避免对胃的损伤。并且酸性药物在碱性环境更易被吸收。           ⑵  有片剂的一般优点：剂量准确，质量稳定，便于识别，服用、携带和运输方便。 二  处方设计与制备 1  处方  片芯处方：           氯吡格雷            75g              主药           淀粉                96g              稀释剂           L-HPC              12g              崩解剂           10%淀粉浆          适量              粘合剂           滑石粉              适量              润滑剂                   包衣液处方：           丙烯酸树脂Ⅱ号      30g              肠溶衣材料           蓖麻油                6g              增塑剂           滑石粉              适量              润滑剂           95%乙醇        加至600ml              溶剂           共制1000片 2  制备方法       素片制备：将氯吡格雷与淀粉混匀，加适量淀粉浆和L-HPC制成软材，用16目筛制粒，置80℃干燥，然后用14目筛整粒，加入滑石粉混匀后，压片，得素片；       片剂包衣：按处方量配置好包衣液后，将片蕊放入包衣锅中，设置仪器参数，使包衣液均匀的喷散到片芯的表面，控制包衣锅的转速进行包衣，待一定时间后将包好衣的片剂取出即得。 三  制备工艺研究     工艺流程: 湿法制粒压素片(片芯) → 喷包衣液→缓慢干燥→ 固化→ 缓慢干燥→ 肠溶包衣片 四 包装材料的选择 铝塑泡罩装，此包装采用聚偏二氯乙烯 (PVDC)或其复合材料制成，对湿气、光线透过率的阻隔性能好。 五 质量研究和稳定性研究 质量研究：性状：本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。 硬度：用孟山都硬度计测定，一片能承受>40N的压力为合格。 脆碎度：用罗氏脆碎仪测，脆碎度＜1%为合格。 溶出度：限度为标示量的75％。 释放度: 限度为标示量的75％。 含量：规格为75mg/片。 稳定性研究 1  对试制样品进行光照、高温、高湿等影响因素实验，结果表明：经光照、高温（60℃）10天后，样品外观变化明显，有关物质增加，含量下降，表明强光照射、高温对本品稳定性有影响。高湿条件下，样品的外观变化明显，水分增加，有关物质略有增加，含量略有下降，表明高湿对本品的稳定性和质量略有影响。故本品应遮光，密封，在阴凉干燥处保存。 2  三批样品在模拟上市包装下加速试验6个月（40℃、相对湿度75%条件下），样品外观发生变化，有关物质略有增加，含量略有下降，表明样品已部分降解，故本品在密封条件下对湿热较敏感，但皆符合质量标准草案。样品在12个月时有关物质已接近质量标准（草案）上限，含量接近质量标准（草案）下限。 第三部分       硫酸氯吡格雷肠溶片的质量标准 一 名称 通用名：硫酸氯吡格雷肠溶片 拼音名：Liusuan Lubigelei Chang-rong Pian 英文名：Clopidogrel Bisulfate Enteric-coated Tablets 二 性状   本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。 三 鉴别     取本品，除去包衣后，研细，照以下方法试验。 (1)取本品的细粉适量(约相当于氯吡格雷50mg)，加水2ml，振摇溶解，取上清液1～2滴，置盛有硫酸甲醛溶液(取37％～40％甲醛溶液1滴加到硫酸1ml中，摇匀)1ml中，表面即显紫红色。 (2)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰应与对照品主峰的保留时间一致（中国药典2010年版二部附录ⅣC）。 四 检查 1  重量差异 取本品，除去包衣，照以下方法检查 取20片，精密称定每片的片重，求得平均片重，然后以每片片重与平均片重比较， 按《中国药典2010年版》规定，20片中超出重量差异限度的药片不得多于2片，并不得有1片超出限度的1倍。 包衣后的重量差异检查同上。 2  溶出度 取本品2片，照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第三法)，以盐酸溶液(0.9→1000)150ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液20ml，滤过。照分光光度法(中国药典2010年版二部附录Ⅳ A)，在270nm的波长处测定吸收度；另精密称取硫酸氯吡格雷对照品适量，用上述溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，同法测定吸收度，测定结果与0.7664相乘，计算出每片的溶出量。限度为标示量的75％，应符合规定。 3  释放度 取本品1片，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD),采用溶出度测定法第一法装置，以0.1mol/L盐酸溶液750ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经120分钟时，取溶液10ml滤过，作为供试品溶液(1)。然后加入37℃的0.2mol/L磷酸钠溶液250ml，混匀，用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节溶液的pH值为6.8±0.05，继续溶出45分钟，取溶液10ml滤过，作为供试品溶液(2)。取供试品溶液(1)，以0.1mol/L盐酸溶液为空白，在280nm波长处测定吸收度，吸收值不得大于0.25。另取阿司匹林对照品21mg，置100ml量瓶中，加磷酸钠缓冲液(0.05mol/L)（量取0.2mol/L磷酸钠溶液250ml与0.1mol/L盐酸溶液750ml，混合，pH值为6.8±0.05）适量使溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品溶液(2)和对照品溶液，以磷酸钠缓冲液（0.05mol/L）为空白，在270nm波长处测定吸收度，计算出每片的释放量。限度为标示量的75％，应符合规定。 其他 应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版二部附录ⅠA)。 五 含量测定   照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录Ⅴ D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-三乙胺(680:320:2)[用磷酸溶液(1→5)调节pH值至3.8]为流动相；检测波长为270nm。理论板数按硫酸氢氯吡格雷峰计算应不低于5000，硫酸氢氯吡格雷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 测定法 ： 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氯吡格雷20mg)，置50ml量瓶中，加流动相适量使硫酸氢氯吡格雷溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硫酸氢氯吡格雷对照品适量(约相当于氯吡格雷20mg)，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 六  含量限度   本品含硫酸氯吡格雷按氯吡格雷(C16H16ClNO2S)计算，应为标示量的90.0％～110.0％。 七  其他 类别：预防和治疗因血小板高聚集状态引起的心、脑及其它动脉的循环障碍疾病。 规格：75mg(以C16H16ClNO2S计) 贮藏：遮光，密封，在阴凉干燥处保存。 包装:铝塑泡罩装，10片/板/盒。 有效期：暂定一年。 第四部分    硫酸氯吡格雷肠溶片的临床前药理学研究 一  主要药效学研究 药物、试剂：硫酸氯吡格雷 (简称氯吡格雷，批号为20101110，含量98. 63 %)。临用前以蒸馏水配制成0.06,0. 2 ,0. 6 ,2 ,6mg/ ml 供大鼠灌胃用;盐酸噻氯匹定(简称塞氯匹定, SIGMA 公司, 批号6665A , 含量>99 %) ,临用前以蒸馏水配制6mg/ ml 的药液供大鼠灌胃用;ADP、花生四烯酸( SIGMA 公司) ;胶原:称取大鼠腹部去毛皮肤1g ,加入10ml 生理盐水,于冰水浴中研磨,3000 r/ min 离心10min 后取上清液,此上清液再以8000r/ min 离心10min ,第2 次离心得的上清液制得100mg/ml母液备用。 动物：Wistar 大鼠（天津药物研究院实验动物室提供）（该品种大鼠性格温顺，抗病力强，给药容易，采样量合适方便）。 1 抗血栓形成作用 方法: 雄性 Wistar大鼠，体重(287 ±32) g，按体重随机分为 5 组，每组10只。分别灌服蒸馏水(对照组)氯吡格雷 1，3，10mg/ (kg· d)，噻氯匹定 30mg/ (kg· d) ×3d，给药体积均为 0. 5ml/ 100g，于末次给药后 2h，以 20 %乌拉坦1g/ kg 腹腔麻醉，仰卧位固定，分离颈总动脉，并将BT87 - 2 型实验性体内血栓形成仪的刺激电极和温度探头钩上，刺激时间 4min，刺激强度 2mA，记录动脉血栓形成的时间。 结果：大鼠灌服氯吡格雷1 ,3 ,10 mg/(kg·d)后, 与对照组比较动脉血栓形成时间分别推迟26% ,29%,67%,呈一定的量效关系,表明氯吡格雷能明显延长大鼠实验性动脉血栓形成时间。阳性药物噻氯匹定抗血栓形成作用亦较明显。氯吡格雷10mg/(kg·d) 对血栓形成时间的影响与噻氯匹定30mg/(kg·d)×3 的用相当( P >0.05) ,而前者的剂量明显比后者低,说明氯吡格雷的抗栓效力比噻氯匹定强。 2  抗血小板聚集作用  方法：取上述体内血栓形成后的大鼠，腹主动脉取血, 3.8％枸橼酸钠与全血按1：9混合，1000 r／m 离心 7 mi n制备富血小板血浆( P R P) 3000 r／m离心10min制备贫 血 小板血浆( PPP ),应用 SPA-3型 PPP自动平衡血小板聚集仪，将各诱导剂诱导的血小板聚集百分数佩至6 0％～7 0％。诱导剂ADP 、花生四烯酸,胶原终浓度分别为 4μmol/L，2 mmol／L ，20 mg／ml。 结果：大鼠灌服氯吡格雷 1，3，10mg/ kg 后，对 ADP诱导的血小板聚集抑制百分率分别为 41 %，55 %，60 %；对花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制百分率分别为 38 %，55 %，54 %；对胶原诱导的血小板聚集抑制百分率分别为 42 %，43 %，49 %。表明氯吡格雷能明显抑制ADP、花生四烯酸及胶原诱导的血小板聚集。阳性药物噻氯匹定对 ADP、花生四烯酸及胶原诱导的血小板集聚抑制作用亦较明显，但其作用没有氯吡格雷强。 3 抗实验性静脉血栓形成作用  方法：健康雄性 Wiｓt a r大鼠 5 0只， 体重( 303±3 7 ) g ， 按体重随机分为 5组，每组 10只，分别灌服蒸馏 水，氯吡格雷0.3,1, 3 mg/kg，噻氯匹定 3 0 mg ／ ( k g ·d ) ×3 d ，给药体积均为 0.5ml/100g于末次给药后2 h戊 巴 比妥 钠40mg／k g腹腔麻醉，仰卧位固定，打开腹腔，分离下腔静脉，结扎左肾静脉分支下方下腔静脉，并同时结扎两侧腰髂静脉及精索静脉，随后缝台腹壁。3 h后，再 次打开腹腔 ．在 下腔静脉结扎处下方1 .5 c m处穿线结扎，取下该段血管，纵向切开．取出血栓，于室温下放置24 h后，称取血栓干重。 结果：大鼠灌服给予氯吡格雷 0. 3，1，3mg/ kg 后，产生剂量相关的抗静脉血栓作用，与对照组比较抑制血栓形成百分数分别为 58 %，64 % ，79 %。表明氯吡格雷对大鼠静脉血栓的形成具有明显的抑制作用。阳性药物噻氯匹定抗静脉血栓作用亦明显，但不如氯吡格雷强。 二  一般药理学研究 1  神经系统 动物：健康Wistar大鼠    合格证号：SCXK2009-2010 （该类大鼠性格温顺，抗病力强，给药容易，采样量合适方便）。 方法：健康Wistar大鼠40只，雌雄各半。分为4组，每组10只，各组雌雄各半。分别灌服蒸馏水，氯吡格雷0.3，1，3mg/kg，给药体积均为0.5ml/100g。使用开阔法装置对大鼠的行为进行观测：（1）3分钟内大鼠行走的格数。一只大鼠四肢走到同一格才算移动了一格。这种行为表示探究行为；（2）站立次数，也表示探究行为；（3）排便次数，表示恐惧情绪。 结果：灌服氯吡格雷的三组大鼠的行走格数、站立次数和排便次数与灌服蒸馏水组的大鼠相比没有显著差异。 2 呼吸系统 动物:  Beagle犬（一种纯种的小猎兔犬，原产英国，具有体型小、毛短、性情温和、抗 病力强、亲人等优点） 方法：Beagle犬8只，随机分成4组，每组2只，雌雄各一只，分别灌服蒸馏水，氯吡 格雷19，38，75mg/kg，将比格犬中度麻醉固定之后，于呼吸运动幅度明显的腹壁部位用皮针引一线，连于事先准备好的“生物信号微机采集系统张力换能器”的杠杆臂上，记录给药前后呼吸运动的曲线。 结果:灌服氯吡格雷的三组犬的呼吸运动曲线与灌服蒸馏水犬的呼吸运动曲线无明显差异。 3 心血管系统 动物: Beagle犬 方法：Beagle犬8只，随机分成4组，每组2只，雌雄各各半，分别灌服蒸馏水，氯 吡格雷19，38，75mg/kg，用动物用血压仪测定给药前后血压，并记录心率，心律的变化。 结果：灌服氯吡格雷的三组犬的血压与灌服蒸馏水的犬的血压，心率无明显 差别。 三  药代动力学研究 多次口服氯吡格雷75mg以后，氯吡格雷吸收迅速。母体化合物的血浆浓度很低，一般在用药2小时后低于定量限（0.00025mg/L）。根据尿液中氯吡格雷代谢物排泄量计算，至少有50％药物被吸收。氯吡格雷主要由肝脏代谢。血中主要代谢产物是羧酸盐衍生物，其对血小板聚集也无影响，占血浆中药物相关化合物的85％。多次口服氯吡格雷75mg以后，血药浓度约在1小时后达峰（约为3mg/l）。氯吡格雷是一种药物前体，通过氧化作用形成2-氧基-氯吡格雷，然后再经过水解形成活性代谢物（一种硫醇衍生物）。氧化作用主要由细胞色素P450同功酶2B6和3A4调节，1A1，1A2和2C19也有一定的调节作用。体外分离这种活性代谢物显示它可迅速不可逆的与血小板受体结合，从而抑制血小板聚集。但在血中未检测到此种代谢物。在氯吡格雷50-150mg范围内，主要代谢物药代动力学为线性增长（血浆浓度与剂量成正比）。 第五部分  硫酸氯吡格雷肠溶片的临床前毒理学研究 一  急性毒性试验 材料：药物：硫酸氯吡格雷肠溶片       动物：昆明种小鼠 ,体质量 18～22g ,雌雄各半 ,由中国医科大学盛京医院动物实验中心提供。(该型小鼠体型小，性格温顺，易于饲养管理，繁殖力强) 方法: 取昆明种小鼠 40 只 ,雌雄各半。随机分为两组:给药组和空白对照组。实验前禁食（不禁水）12 h，用灌胃器吸取液体,15g/kg,1g/ml浓度的药物，空白对照组给予等量的蒸馏水，给药后1h时恢复进食，密切观察4h 。次日后每日上下午各观察1次，连续观察14d，根据动物急性毒性实验观察项目记录动物的外观,饮食，行为，体质量，大小便，分泌物和有否死亡等情况，测LD50，实验结束后将小鼠处死进行解剖学检查。 结果：给药后小鼠活动减少，1h 后活动恢正常，实验期内无一动物死亡,各给药组动物均未出现动物急性毒性实验观察项目中列举的急性中毒症状和表现,并且毛皮光滑,进食、体质量增长及大小便正常,眼、鼻无异常。分泌物,黏膜无充血、水肿, 呼吸正常,处死动物并对心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠等主要脏器作解剖学检查,结果未发现所检器官有肿胀、囊肿、萎缩、出血、水肿、颜色异常、粘连、硬化等异常改变,与空白对照组比较差异无统计学意义。未测出LD50，说明该药毒性极低。最大耐受量>15g/kg。 二  长期毒性试验 材料：药物：硫酸氯吡格雷肠溶片       动物：采用SPF级 wistar大鼠 ,雌雄各半 ,体重120～150g,由甘肃中医学院医学实验中心提供。SPF级动物合格证号: SCXK 甘 2010 - 0006 - 0000197; SPF级实验设施合格证: SYXK甘 2010 - 006 - 000089。每笼 6只动物 ,给予鼠全价颗粒饲料 ,自由摄食、饮水.（该品种大鼠性格温顺，抗病力强，给药容易，采样量合适方便）。 方法：将硫酸氯吡格雷肠溶片粉以蒸馏水稀释，每日上午以最大浓度 1 g/ml,最大容积 15 ml/kg灌胃给药 1次 ,对照组灌胃等容积的蒸馏水 ,每周称 1次体重并记录摄食量 ,根据体重的变化重新计算给药量。根据急性毒性试验、药效学试验结果 确定硫酸氯吡格雷肠溶片高剂量组 15 g/kg 、中剂量组7.5g/kg，低剂量组3.75g/kg。 观察指标：给药期和停药恢复期 ,观察动物的一般情况：外观，行为活动，体重增长、进食量、血液学指标、血生化指标、脏器系数及病理组织学变化等。     结果：大鼠长期毒性实验以3个剂量 即15,7.5,3.75g/kg,分别为临床拟用剂量的 200,100,50倍。 连续给药 6个月及停药2周后 ,对大鼠一般状况、体质量增长无明显影响;血液学指标及血液生化学指标均在正常范围内 ,对大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、子宫等重要脏器重量 ,脏器系数与对照组比较均无显著差异 ,并对大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、子宫等重要脏器进行组织检查也未见明显病理改变。故本实验结果提示硫酸氯吡格雷肠溶片对大鼠 6个月长期毒性实验 ,未发现明显的毒性反应及延迟性毒性反应。 三  特殊毒性试验 1  致突变  致癌试验 药物：硫酸氯吡格雷肠溶片 动物：（天津市医学实验动物开发中心提供） 昆明种小鼠40只体重18～22g。(该型小鼠体型小，性格温顺，易于饲养管理，繁殖力强) 方法：将40只小鼠在一个笼子里喂养，每只每天灌服氯吡格雷75mg/kg.d 培养细胞染色体畸变检测试验和微核试验。 结果：通过灌胃给药，发现氯吡格雷没有致突变和致癌性。 2  生殖毒性试验 药物：硫酸氯吡格雷肠溶片 动物：（天津市医学实验动物开发中心提供） 昆明种小鼠，雌雄2：1 ,体重20～26g。实验前观察 1周。饲养室温度 22～25 ℃,自然光照 ,自由饲食。(该型小鼠体型小，性格温顺，易于饲养管理，繁殖力强) 方法：雄雌小鼠按 1:2同笼 ,每日早晨对雌鼠进行阴道检查 ,以阴栓阳性之日为妊娠0 d,孕鼠按体重随机分为4组 ,即高，中、低3个给药组 ,给药剂量分别为75,38,19mg/kg/d和阴性对照组。于受孕 6～15 d 每日经口灌胃给药一次 ,给药量为 0. 2 m1/10g , 阴性对照组等体积灌胃给予植物油。于妊娠18d处死孕鼠 ,剖腹取出卵巢和子宫。 观察指标： 1对孕鼠体重增加观察 2对孕鼠生殖能力检查 3胎鼠生长发育和致畸作用的观察 结果：通过灌胃给药，按75,38,19mg/kg/d给药时，在小鼠的妊娠前初期、器官形成期和围产期，药物对孕鼠生殖能力、妊娠、分娩均未见影响。   文档已经阅读完毕，请返回上一页！