转化生长因子_对骺软骨细胞增殖周期的作用

转化生长因子_对骺软骨细胞增殖周期的作用 转化生长因子- 对骺软骨细胞增殖周期的作用 Β 王 凡 李爱冬 李瑞祥 羊惠君 周德明 ( )华西医科大学基础医学院 人体解剖学教研室 成都 610041 () 内容摘要 采用鸡胚股骨无血清培养和流式细胞仪, 对经转化生长因子22作用后的骺软骨细胞进行 ΒT GF Β () 检测。结果显示: 24 小时时, 0. 11、0. 33 和 1. 00实验组的细胞增殖指数 均低于对照组, 而 3. 00组则高于对 ng P Ing (() ) 照组 < 0. 001; 48 小时时, 除 0. 11组外, 其余各实验组 均低于对照组 < 0. 001; 96 小时时, 各实验组 P ng P I P P I ()均大于对照组, 其中 0. 33组 最大 < 0. 001。 上述结果表明, 不同剂量和不同作用时间的 2对骺软骨ng P I P T GF Β 细胞增殖周期均有较大的影响, 其总的趋势是, 2抑制细胞的增殖, 然后随着作用时间的延长, 抑制作用转变 T GF Β 为促进细胞增殖作用。 关键词 转化生长因子2细胞周期 骺软骨细胞Β - , Ef f ec t of Tran sf orm in g Growth Fac torΒ on Pro l if era t ion Cyc le of Ep iphy sea l Chon drocy te W a n g F a n L i , , , . , , A id o n g L i R u ix ia n g Ya n g H u iju n Zh o u D em in gD ep a r tm en t of A na tom y S ch ool of B as ic M id ica l S c iences, 610041W CUM S C h engdu () 22A bstrac t In o rde r to inve st iga te th e effec t o f t ran sfo rm ing g row th fac to rΒT GF Βo n cho nd ro cy te p ro life ra2 2, t io n cyc lew e u sed f low cy tom e t ry to a sse ss th e ep ip h y sea l cho nd ro cy te o f em b ryo n ic ch ick fem o ra w h ich w a s cu l2 22. 224, tu red in f reese rum m ed ia and t rea ted w ith T GF ΒT h e re su lt s show ed th a t af te r t rea ted w ith T GF Βfo r h th e () ( ) 0. 11, 0. 33, 1. 00ƒp ro life ra t io n indexe s P Iso f exp e r im en ta l g ro up s ngngngm lw e re low e r th an th e P Is o f th e (), 3. 00ƒ< 0. 001. co n t ro l g ro up sbu t th e P I o f ngm l g ro up w a s h igh e r th an th a t o f th e co n t ro l g ro up P A f te r t rea t2 (ƒ< 48, 0. 11, ed fo r h excep t th e ngm l g ro up th e P Is o f exp e r im en ta l g ro up s w e re low e r th an tho se o f th e co n t ro l P )0. 001. A nd af te r t rea ted fo r 96h , th e P Is o f a ll g ro up s w e re h igh e r th an tho se o f th e co n t ro l; th e P I o f th e 0. ()33ƒ< 0. 001. , ngm l g ro up w a s th e h igh e st P T h e se sugge st th a t af te r t rea ted in va r ied t im e and do sageth e effec t222, , o f T GF Βo n ep ip h y sea l cho nd ro cy te is o bv io u sand T GF Βo n ep ip h y sea l cho nd ro cy te is o bv io u sand T GF Β can , inh ib it cho nd ro cy te p ro life ra t io n f ir stand th en it s effec t o n cho nd ro cy te can t ran sfo rm f rom inh ib it io n in to p ro lif2 .e ra t io n Key words 2C e ll cyce l Ep ip h y sea l cho nd ro cy te T ran sfo rm ing g row th fac to rΒ ( 转化生长因子22 2由第四军医大学西京医院孙玉鹏博士 Βt ran sfo rm in g g row th fac to rT GF Β 6 ) , 2是一个多功能的生长因子, 亦是软骨组织 提供。ΒT GF Β 1. 2 方法 重要的局部生长因子, 它能对软骨细胞增殖活动进 1 用培养基稀释 2, 使其终浓度分别为B GJ T GF Β行双向调节。2对软骨细胞增强的作用不仅 T GF Β 0. 与细胞的来源、实验条件以及是否有其它生长因子 11、0. 33、1. 00和 3. 00ƒƒƒƒ, n gm ln gm ln g m l n gm l 7 存在等有着密切的关系, 亦与细胞分化成熟程度、细 而后分别对无血清网格器官培养的 14 天鸡胚股 胞基质是否存在、该因子的作用时间以及作用剂量 骨进行作用, 并设空白对照组。 收集 2作用 24、48、96 小时组及其对照组 T GF Β等密切相关, 这些因素和条件均能影响 2对软 T GF Β的培养骨, 仔细将骺软骨与骨干分离, 用眼科剪将骺 骨细胞的增殖作用。 因此, 目前在 2的研究报T GF Β 软骨剪碎, 并用 0. 5% 胰蛋白酶在 37?下消化 30 分 2, 3 道中仍存在许多不同甚至相反的认识。 为此, 本钟, 洗涤后离心, 收集细胞, 使细胞浓度在 1 ×PB S 67 研究在以往研究的基础上, 采用 14 天鸡胚股骨器官 10, 1 ×10ƒ。 碘化丙啶染色 30 分钟, 用 m lE lite 4, 5 型流式细胞仪对细胞周期和细胞增殖动力学进 E sp 无血清培养模型, 在排除血清中其它生长因子的 行检测, 激发波长 490, 计数 5 000 个细胞。nm 影响后, 用流式细胞仪观察了 2不同作用时间 T GF Β 测定信号以直方图和点阵式数字表的形式显 和作用剂量时软骨细胞的增殖周期活动。 示, 并将图形和数据输入计算机, 以分析各样品细胞 1 材料与方法 含量的分布频率。 为保证仪器的精度稳定性、DN A 1. 1 材料 ( ) ()所测样品的可比性和可重复性, 每次上机之前均用, 其中 0. 33组 最大 < 0. 001图 1。 照组n g P I P 标准样品校准仪器, 使其变异系数稳定在 3%,随着 2作用时间的延长, 对照组 值逐 T GF ΒP I 5% , 以保证每次实验条件的相对一致性。 最后打印 渐减低, 表明在骨器官培养情况下, 骺软骨细胞增殖 结果。 能力有所下降。相比之下, 0. 11和 0133组随着 n g n g 为精确地表示组织和细胞的增殖活性, 用下式培 养 时 间 的 延 长, 值 随 之 增 加; 而 0. 11和P I n g 计算出 + + 期所占细胞的百分比, 即细 ƒG1 S G2 M ( 0133组的 值出现由高至低再增高的过程