螺旋藻胶囊中氨基酸和多糖含量测定

螺旋藻胶囊中氨基酸和多糖含量测定 广东微量元素科学 2000 年 GUANGDONG WEILIANG Y 第 UANSU KEXUE 7 卷第 7 期文章编号 : 1006 - 446X 2000 07 - 0066 - 04 螺旋藻胶囊中氨基酸和多糖含量测定 靳争京1 2 刘 力 11 贵州省食品卫生研究所 贵阳 550001 21 贵州省环境卫生监测站 贵阳 550001 要 摘 : 用分光光度法测定了螺旋藻胶囊中总氨基酸和多糖的含量 。结果明本定量方法准确 可靠 可用于控制该产品质量指标 。 关键词 : 螺旋藻胶囊 氨基酸 多糖 分光光度法 中图分类号 : O 657132 文献标识码 : A 螺旋藻 Spiulina platensis 属于蓝藻门颤藻科 含有极丰富的营养成分 蛋白质含量高达 60 以上 由 18 种氨基酸组成 其中 8 种为人体必需氨基酸 还有多糖 、多种微量元素和维生素等 。被联合国教科文组织推荐为明天最理想最完美的食品 。螺旋藻还可作为治疗多种疾病的辅助药物 特别是螺旋藻多糖具有增强机体免疫力 抑制癌细胞增殖 清除体内毒素及提高核内切酶活性 促进 DNA 的修复等作用 1 。本文采用分光光度法测定了螺旋藻胶囊中氨基酸和多糖的含量 仪器 、试剂及供试品111 仪 器 为本品提供了两个营养成分的定量指标 。1 721 B 型分光光度计 上海第三分析仪器厂 CQX - 06 超声波清洗器 上海必能信超声有限公司 。112 试 剂 谷氨酸对照品 中国药品生物制品鉴定所提供 。葡萄糖 A1R 。 2 茚三酮溶液 : 称取茚三酮 A1R 1 g 溶于 35 mL 热水中 冷至室温后加水稀释至 50mL 若有少量不溶过滤使用 。 5 苯酚溶液 2 : 取苯 182 ?馏分 称取此酚 A1R 100 g 加铝片 011 g 与碳酸氢钠 0105 g 蒸馏收集 馏分 10 g 加水 150 g 置棕色瓶中即得 。 磷酸缓冲液 pH 8104 : a1 称取磷酸二氢钾 KH2 PO4 014543 g 加水溶解并定容至 50mL 1/ 15 mol/ L 。b1 称取磷酸氢二钠 Na2 HPO4 519700 g 加水溶解并定容至 250 mL 1/ 15mol/ L 。取 a 液 1215 mL b 液 23715 mL 混匀 即为 pH 8104 的缓冲溶液 。 硫酸 、硝酸 、硝酸银均为分析纯 。氨试液 、氯化铵镁试液和钼酸铵试液均按 1995 年版药典有关项下规定配制 。113 供试品 螺旋藻胶囊 贵州缔谊药业有限公司生产 批号 980402 。 收稿日期 : 2000 - 04 - 23 ?66 ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co. Ltd. All rights reserved. 2000 年 第 广东微量元素科学 7 卷第 7 期 2 氨基酸的含量测定 2 211 标准曲线的制备 精密称取谷氨酸对照品适量 加水溶解并稀释成 100 mg/ L 的溶液 精密吸取对照品液 0 、 1150 、2100 、2150 、3100 、3150 、4100 mL 分别置于 25 mL 量瓶中 分别补加水至 5100 mL 再 分别加入磷酸缓冲液 pH 8104 及 2 茚三酮液各 1100 mL 摇匀 沸水浴中加热 15 min 取 出在冷水浴中迅速冷至室温 加水定容至刻度 以 1 号空白作参比于 570 nm 波长处测定吸收 度 计算出回归方程为 : C g 101127688 359159836 A r 019991 。 μ 212 回收率试验 精密吸取标准液 200 、250 、300 μ 按 211 项下方法测定 计算回收率 结果见表 1 。 g 表1 回收率测定结果 加入量 测得值 测得量 回收率 平均回收率 RSD μg A μg 200 01247 19910 150 99 250 01380 25116 10016 10016 1115 300 01516 30514 10118 213 重现性试验 分别准确称取同一批号样品 5 份 按 215 项下方法操作 测得结果见表 2 。 214 精密度试验 准确称取样品 1 份 按 215 项下方法操作 制成样品供试液 分别吸取供试液各 2100 mL 共 5 份 测得结果见表 3 。 表2 重现性试验结果 表3 精 密度试验结果 测得值 平均值 RSD 测得值 平均值 RSD 样品号 样品号 mg/ 粒 mg/ 粒 mg/ 粒 mg/ 粒 1 10213 1 94160 2 10219 2 96130 3 98190 10117 2136 3 95120 95160 1121 4 10417 4 94170 5 99160 5 97130 215 样品测定 取本品 20 粒 研碎 精密称取约相当于 1 粒的量 置 5 mL 安瓿瓶中 小心加入 6 mol/ L 盐酸 2 mL 使之充分浸润 封口 于 110 ?烘箱中水解 24 h 水解液用 5 mL 水转移至蒸发皿 中 水浴上蒸干 补加 2 mL 水洗涤残渣 继续蒸干 残渣用 30 mL 水转移至 50 mL 量瓶中 超声提取 30 min 加水稀释至刻度 摇匀 滤过 弃去初滤液 精密量取续滤液 3 mL 置另 ?67 ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co. Ltd. All rights reserved. 2000 年 第 广东微量元素科学 7 卷第 7 期 一 50 mL 量瓶中 用水稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 。精密吸取供试品溶液 3100 mL 置 25 mL 量瓶中 照 311 项下自 “补加水至 5100 mL ”起同法操作 。按回归方程求出供试品液 中氨基酸的含量 结果平均值为 : 96110 mg/ 粒 RSD 3 多糖的含量测定 3 4 311 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称1114 n 5 。 取 105 ? 干燥至恒重的葡萄糖 100 mg 置 100 mL 容量瓶中 加水溶解并稀释至刻 度 即得浓度为 1 g/ L 的葡萄糖标准液 。精密吸取标准液 0 、10 、20 、40 、60 、80 、100 μ L 分别置于具塞试管中 各加水使体积至 2100 mL 再各加苯酚液 1100 mL 摇匀 迅速加入浓硫 酸 5100 mL 摇匀后置沸水浴加热 20 于 490 nm 波长处测定吸收度 计算回归方程为 : A min 取出冷却至室温 81333 × - 5 61567 × - 3 C r 019996 。 10 10 312 多糖的提取与精制 取供试品 35 g 置于圆底烧瓶内 加乙醇 150 mL 加流 1 h 过滤 滤液浓缩至 75 mL 加乙 醇至含醇量 80 冷藏过夜 过滤 滤渣加水溶解 活性炭脱色 过滤 滤液再加乙醇至含 醇量 80 冷藏过夜 过滤 所得沉淀用乙醚 、丙酮冼涤 得螺旋藻多糖约 1016 g 呈灰白 色。 313 换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的螺旋藻多糖 1010 mg 加水溶解并稀释至 100 mL 量瓶中 取 2100 mL 按 311 项下自 “加水使体积为 2100 mL ”起同法操作 测定吸收度 按下式计算 f W/ CD 式中 W 为多糖的重量 C 为多糖中葡萄糖的浓度 D 为多糖的稀释因素 。结果计算出换算因 子 f 11164 。 314 多糖加样回收率 精密称取供试品约 012 g 四份 其中三份分别加入多糖 1010 mg 各加入 100 mL 80 乙 醇 回流 1 h 趁热过滤 滤渣挥干溶剂后各加水 50 mL 80 ? 水液提取 5 h 过滤 水洗滤渣 三次 活性炭脱色 定容至 100 mL 精密吸取 0150 mL 于具塞试管中 加水至 2100 mL 按 311 项 下 自 “加 水 使 体 积 为 2100 mL ”起 同 法 操 作 计 算 平 均 回 收 率 为 97193 RSD 2146 。 315 样品测定 精密称取供试品约 012 g 置于圆底烧瓶中 加 100 mL 80 乙醇 回流 1 h 趁热过滤 其余操作按 314 项下方法 。按下式计算样品中多糖的含量 多糖的含量 CDf / W × 100 结果平均值为 : 多糖含量 4127 RSD 1144 n 5 。 讨 论 4 本品含有一定量游离氨基酸及大量水解氨基酸 为该品的主要营养成分之一 。故选用总 氨基酸作为定量指标 既可控制该品的质量 又与其用途相符 。 氨基酸含量测定采用茚三酮显色于 570 nm 最大吸收波长处 同时对游离氨基酸及水解氨 基酸进行了测试 结果发现 游离氨基酸相对含量较低 而且供试液颜色较深 在 570 nm 处 ?68 ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co. Ltd. All rights reserved. 2000 年 第 广东微量元素科学 7 卷第 7 期 有较高的背景吸收 影响测得结果的准确性 。而水解后的供试 液几乎无色 无背景吸收干扰 水解后总氨基酸含量较高 测得结果更可靠 。通过 回收率 、稳定性 、精密度的考查 证明该 法准确 、可靠 是一种切实可行的测 定方法 。 参考文献 : 1 李定梅 螺旋藻 ——全球人类最理想的食品 M . 北 京 : 中国农业科技出版社 19971 29. — 2 黄伟坤 赵国君 韦光果等 . 食品 化学分析 M . 上海 : 上海科学技术出版社 1997. 23. 3 陈绥清 张志华 等 . 枸杞子中多糖的含量测定 J . 中草药 1991 22 2 : 671 王 强 4 钱金袱 左绍远 . 螺旋藻营养片中多糖的含量测定 J . 大理医学院学报 1994 3 4 : 7. Determination of Amino Acid and Polysaccharide in Capsule of Spiulins Platensis J IN Zhen - jing1 LIU Li2 11 Guizhou Provincial Instiute of Food Hygiene Guiyang 550001 China 21 Guizhou Provincial Station of Surveillance for environment Hygiene Guiyang 550001 China Abstract : The total amino acid and polysaccharide contained in spiulins platensis were determined by spectrophotometric method. The results show that this quantitative determination method is accurate and re2 liable and can be used as an indicator for spiulins platensis quality control . Key words : capsule of spiulins platensis amino acid polysaccharide spectrophotometric method 铁过多症 反复输血或长期过多采用铁剂治疗 造成机体对铁的 “亲和”能力强 排泄铁的能 力差 将会导致慢性 铁过多症状 主要表现为血色素沉着 皮肤青铜色 、肝和脾 肿大 、肝硬化 、胰腺受损害 导致糖尿病 、性 机能下降 、阳萎 、关节炎 。 工业生产中 开采铁矿的工人可产生铁矽肺 。误服大量亚铁盐 可引起恶心 、胃 肠道出血 、休克等中毒症状 。另外 最近研究表明 体内大量的铁可以降低机体 的免疫功能 引起感染率的 增加 。有人给小鼠每天注射 1,115 mg 铁 这些鼠 被沙门氏菌感染以后 其死亡率明显比未注射铁的鼠增加 。 ?69 ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co. Ltd. All rights reserved.