NO在家兔乙醇慢性肝损害中作用的研究

NO在家兔乙醇慢性肝损害中作用的研究 NO在家兔乙醇慢性肝损害中作用的研究 陕西医学杂志2006年7月第35卷第7期 NO在家兔乙醇慢性肝损害中作用的研究 山东省滨州职业学院(滨州256624)卢法传刘兆胜舒文环田华 摘要目的:研究一氧化氮在家兔慢性白酒中毒性肝损伤中的作用及用L—NAME 治疗对肝脏的保护作用.方法:制备慢性白酒中毒性肝损伤家兔模型4周组,8周组,12周 组,肝损伤模型随机分为NO合酶(NOS)抑制剂(NG一硝基精氨酸甲酯L—NAME)治疗组 和未治疗组.治疗组用L—NAME1.5(mg?kg)/d灌胃,4周,8周,12周;肝损伤未用L— NAME治疗组用白酒灌胃,10(m1.kg)/d,4周,8周,12周;正常对照组用生理盐水灌胃, 10(m1.kg)/d连续12周.镉还原比色法测定各组血清中NO含量.测定各组血清中丙氨 酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸基转移酶(AST)和血清总胆红素(TBil)水平,同时进行肝组 织学检查.结果:肝损伤组血清NO含量明显高于正常对照组和L—NAME治疗组.AIT和 AST含量亦呈同样改变,有显着性差异.肝组织学检查显示L—NAME治疗组肝组织炎症明 显减轻,肝细胞变性坏死比未治疗组轻微.结论:一氧化氮在家兔慢性白酒中毒性肝损伤中 起重要作用;L—NAME对家兔慢性乙醇中毒性肝损伤具有保护作用. 主题词肝疾病,酒精性/病理生理学一氧化氮/一氧化氮舍酶抑制剂兔 研究证明,在鼠血吸虫诱导的慢性肝损伤中, 抑制NO的产生可明显减轻肝损伤,并抑制其肝 纤维化和脂质过氧化过程.本实验观察了NO在 乙醇诱导的家兔慢性肝损伤过程中的作用及用 LNAME治疗对肝脏的保护作用. 材料和方法 1材料NO'测定试剂盒购自解放军 总医院放免研究所.L—NAME购自美国Sigma公 司;白酒购自北京产56度红星牌二锅头;新西兰 家兔购自本校实验动物中心. 2方法 2.1将56只实验用新西兰雄性家兔,随机 分为A,B,C,D,E,F,G7组,每组8只.体重(2. 080?50)kg,自由进食进水. 2.2将市售北京产56度红星牌二锅头白 酒按10ml/kg体重给家兔灌胃,共A,B,C,D,E, F6组,制造肝损伤模型,A组,B组,C组按 10ml/kg灌胃,每天1次,持续时间分别为4周,8 周,12周;D组,E组,F组用白酒灌胃同时用L— NAME治疗,用量1.5mg/kg,灌胃,用药时间同 未用药组;G为正常对照组.正常对照组用生理盐 水灌胃,1次/d,每次10ml/kg,持续时间为4 周,8周,12周.到期后均采取股动脉血分离血清 后检测NO水平.采血后处死动物取肝脏,检查肝 细胞的变化,主要查肝细胞脂肪变性程度. 2.3血清ALT,AST和TBil,N02-/NO.一 水平的测定:经兔耳缘静脉于灌胃前,后(灌胃4 周,8周,12周时)各抽血2ml.lml放入加有 100g/LEDTA20~I,抑肽酶8335nkat/g的试管 内,3500r/min,15min,分离血浆一4O?保存待 测.lmL放入干燥管,室温1h后离心,取上清液 一 4O?保存待测.用于检测肝功能AIT,AST和 TBI.ALT,AST和TBI检测用自动生化分析仪 测定,均按说明书严格操作,结果用(s?L).表 示.取股动脉血5ml全血内加1OOg/LEDTA 60,M,抑肽酶41675nkat/g,4?3500r/rain离心 lOmin,取上清液血浆分装后一7OC冻存.上清液 用于NO'/NO.'测定,具体操作步骤按试剂盒说 明书进行,结果以/zmol/L表示. 2.4统计学方法:剂量参数以均数? 差士)表示;组间比较采用方差分析;治疗不同 时点的比较采用区组设计的方差分析. 结果 1实验模型组家兔肝脏形态改变肝损伤 模型家兔48只.其形态上均有不同程度的肝,脾 肿大,肝脏质地变硬,边缘变钝,表面不光滑,有大 陕西医学杂志2006年7月第35卷第7期839 小不等的小结节;肝脏呈灰黄色,表面无光泽,部 分家兔有腹水形成.用I一NAME治疗组,肝脏形 态明显减轻;外观肝脏肿大,呈淡红色,表面较光 滑,有少量粟粒样小颗粒,边缘较锐利. 经肝组织切片,HE染色,光镜下可见,肝损 伤治疗组:肝纤维组织增生较轻,肝细胞再生较 多,假小叶稀少,肝脂肪变性细胞数少,肝小叶结 构破坏轻微.未用L—NAME治疗组肝细胞脂肪 变性,坏死明显,特别脂肪变性显着,胶原纤维增 生,有明显的假小叶形成. 2血清ALT,AST和TBn,NO水平肝 损伤组家兔血清中ALT和AST水平显着高于 正常对照组和L—NAME治疗组(P<0.01),TBil 水平无显着差异.NO变化:对照组与未用L, NAME治疗组比较,NO升高显着(P<0.01).对 照组与用L—NAME治疗组比较,NO升高不明显 (P>0.01),见表1,2,3. 袁1白酒灌胃后各组血清中ALT.AST 和TBil水平比较(?5) 注:a/b/cP<0.01,对照组与模型未治疗组比较 袁2白酒灌胃后用L—NAME治疗各纽血清中 ALT,AST和TBil水平比较(?5) 注:8P>0.01,bP>0.01,cP>0.01.与对照组比较 袁3白酒灌胃组及白酒灌胃同时用L—NAME治疗组血中NO水平比较(?5) *P<o.Ol,对照组与未用药组比较;**P>O.05,对照组与用药组比较 3NO的变化本研究用经铜离子活化镉小叶形成等病理改变.用L—NAME治疗者, 肝纤 还原加显色法测定NO'/NO.'(即间接测定 N())L2].NO肝损伤模型未用L—NAME治疗组血 清NO'/NO3.含量明显高于用药组<0.01);模 型组单纯用白酒灌胃,血中NO水平明星高于对 照组(P<0.01);模型组用L—NAME治疗,血中 N()水平与对照组比较差别无意义(P>0.01). 讨论 我们用乙醇诱导家兔慢性肝损伤模型,制备 方法简单,病死率低,模型复制可靠.本实验资料 显示,酒精诱导家兔肝损伤时,肝功能降低,血中 AJT,AST未用药治疗组显着升高,NO也升高 显着.用药组肝功能明显好转,血中ALT,AST 降低,No含量减少.实验组48只家兔未用L— NAME治疗者,经肝组织病理学证实肝脏均有肝 细胞变性,坏死,炎性细胞浸润,纤维组织增生,假 维组织增生较轻,肝细胞再生明显,假小叶较少, 肝脂肪变性较轻,肝小叶结构破坏不明显. No直接测定仍较困难,半衰期仅为数秒,合 成后迅速转变为NO/NO.'.NO产生后,经旁分 泌形式作用于靶细胞.所以目前用NO在体内最 终代谢产物亚硝酸根(NO2)作为一个常用的检测 (NOS)有两种,即构成型酶和 指标.合成NO的酶 诱导型一氧化合成酶(iNOS).构成型酶在生理状 态下以及内毒素(LPS)等升高时被激活,而诱导 合成大量的NO;肝细胞,Kupffer细胞等均含大 量的iNOS.当大量饮酒时,乙醇氧化系统通过微 粒体酶参与乙醇氧化,耗氧量可增加50, 60,肝细胞在代谢白酒时处于高代谢状态,产生 大量的氧自由基,血中过嘌呤氧化酶转化为超氧 化物,导致脂质过氧化.另外肝乙醇中毒时肝功能 84O 遭到破坏,肠道内菌群易位,内毒素吸收增多;内 毒素刺激血管内皮细胞,Kupffer细胞,使NOS 活性增高,NO产生增多.应用L—NAME可调节 消化道组织中NOS亚型的表达及NO的合成[23. 有研究显示肝损伤患者血中NO一/NO.一显着升 高,且与血中内毒素含量呈正相关,口服肠道非吸 收抗生素可使内毒素及NO一/NO.一水平下降.提 示内毒素可能是激活iNoS途径的原因之一[3]. NO对肝脏既参与各种生理过程,又参与许多病 理过程,NO在不同原因所致的肝损伤中所起的 作用是不同的,在慢性血吸虫性肝损伤和IL一2诱 导的肝损伤中,NO可加重肝损伤.本实验结果与 文献资料相符.L—NAME对肝细胞则可起到保护 作用[3;在急性四氯化碳诱导的鼠急性肝损伤,肝 移植,缺血再灌注肝损伤和胆总管结扎所致淤胆 性肝损伤过程中[4],抑制NO的产生可明显增加 肝内的脂质过氧化并加重肝损伤,我们在乙醇诱 导家兔慢性肝损伤12周,同时应用L—NAME治 疗,发现其血清中NO'含量明显减少,肝功能明 显好转,肝组织炎症反应和脂肪变性减轻,提示 陕西医学杂志2006年7月第3j卷第7期 NOS特异性抑制剂可减少血清中NO活性,在此 类慢性肝损伤中有一定的保护作用,相关机制可 能与上述乙醇引起肝组织代谢增强,耗氧量增加, 自由基产生增多,导致脂质过氧化及内毒素血症, 刺激血管内皮细胞,肝脏的Kupffer细胞,NO产 生增多有关.应用L—NAME治疗家兔肝损伤,其 血清中NO'含量明显减少,肝功能明显好转,肝 组织炎症反应和脂肪变性减轻,似乎也证明了 NO升高也能引起肝损伤.其详细机制有待于进 一 步探讨. 参考文献 1王根生,刘耕陶.一氧化氮在小鼠肝损伤的作用.中华 医学杂志,1996;76(3):203 2李建明,金丽娟,王静珍.一氧化氮在大鼠烧伤后高代 谢伴多器官功能不全中的作用.第一军医大学, 1997;17(2):112 3杨汉,金丽娟,尹小林,等.小鼠肠缺血再灌注时 肝组织一氧化氮的变化.中国病理生理杂志,2001;17 (5):434 4刘克洲.酒精性肝病的发生机制若干进展.中华消化 杂志,2002;22(4):230(收稿:2005—09—07) 缺血性肠炎3O例临床分析 西安黄河医院(西安710043)王志华高宁汉 摘要目的:探讨的临床特点及诊治要点.方法及结论:缺血性肠炎多发生于5O岁 以上的中老年人(21/3o),83.4~A(25/30)伴有心脑血管疾病,糖尿病,肝硬化及腹部手术史 等,临床主要表现为急性剧烈的腹痛(30/30),便血(18/30)(潜血试验1OOoS),腹泻,腹胀 等.结肠镜袁现为粘膜充血,水肿,出血,糜烂及溃疡.B超可见肠壁增厚,彩色多普勒可直接 显示肠系膜血管的情况,血流量.缺血性肠炎诊断方法应根据老年人剧烈腹痛后便血的临床 特征,结合结肠镜,B超,肠系膜血管造影等即可确诊. 主题词肠炎/病因学肠炎/诊断肠炎/治疗缺血性 现将我院1999,2005年收治的3O例缺血性 肠炎的临床资料分析报告如下.. 临床资料 1一般资料本组3O例缺血性肠炎结合 临床症状,结肠镜,病理组织学等而确诊,其中男 *西安铁路中心医院 18例,女12例,年龄为35~84岁.本病多为急性 起病,于起病24h内来院就诊者5例.24h到1周 者14例,7,10d者9例,2例病史达2个月.伴随 冠心病12例,心律失常,高血压病,腹部手术史各 6例,肝硬化5例,TIA发作/脑梗塞3例,糖尿 病,下肢深静脉血栓各1例.误诊为急性胰腺炎5 例,出血性肠炎,自发性腹膜炎各4例,肠梗阻3