【doc】沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用

【doc】沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用 沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用 ? 50?生理生化中国畜牧兽医2010年第37卷第4期 沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用 王丽思,敖长金,张兴夫 (内蒙古农业大学动物科学学院,呼和浩特010018) 摘要:本试验旨在研究沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用.采用不同浓度的沙葱多糖培养小鼠腹腔巨噬细胞,测 定巨噬细胞的吞噬能力,能量代谢水平,IL-6的含量.结果表明,沙葱多糖能够增强巨噬细胞吞噬能力,提高能量代谢水平, 促进IL-6的分泌.除在沙葱多糖对IL一6分泌影响的试验中,沙葱多糖浓度为400/~g/mL时与空白对照组差异不显着(P> 0.05),其余测定指标中,试验组各个浓度均显着高于空白对照组(P<O.05).由试验结果可知,沙葱多糖对小鼠腹腔巨噬细 胞具有激活作用 关键词:沙葱多糖;巨噬细胞;激活作用 中图分类号:$859文献标识码:A文章编号:1671—7236(2010)04—0050—03 沙葱(AlliumMongolicumRege1)学名蒙古韭, 为百合科葱属多年生草本植物,含丰富的植物蛋白, 膳食纤维和人体所需矿物质,维生素等多种营养成 分.沙葱不仅营养价值高,而且具有一定的药用价 值.沙葱能够降血压,降血脂,具有开胃消食之功 效,食之能治赤白痢,肠炎,腹泻,胸痹诸疾,被誉为 “菜中灵芝”. 多糖是由多个单糖分子缩合,失水而成,是一类 分子结构复杂且庞大的糖类物质,因其具有多种生 物活性而越来越引起人们的关注.张会新等(2009) 收藕日期:2009—12—03 作者简介:王丽思(1984一),女,内蒙古人,硕士生,研究方向:动 物营养与畜产品品质. 通信作者:敖长金,教授,博士生导师.E—mail:changjinao@ya— hoo.corn.cn 基金项目:国家自然基金项目(30760173). 报道,黑木耳多糖可明显提高小鼠脾脏和胸腺指数, 促进脾脏及胸腺的发育,促进巨噬细胞的吞噬活性. 蔡小玲等(2002)的研究结果发现,红菇多糖有显着 降低胆固醇的作用.丁辉景等(2008)研究结果表 明,壳聚糖能提高血清溶菌酶的含量,增强巨噬细胞 的吞噬功能.沙葱多糖是从沙葱中提取的主要生物 活性成分之一,张兴夫(2009)研究结果表明,沙葱多 糖能够提高小鼠机体的免疫能力.为了进一步阐明 其作用,本试验研究了沙葱多糖对小鼠巨噬细胞吞 噬功能,能量代谢水平及分泌IL一6的影响. 1材料与方法 1.1材料沙葱多糖为内蒙古农业大学动物科学 学院营养与免疫研究室分离纯化制得;脂多糖 (LPS),噻唑蓝(MTT),二甲基亚砜(DMSO)为 Sigma公司产品;RPMI1640为Gibco公司产品;胎 牛血清和DPBS为Hyclone公司产品;中性红为天 2.GuangdongVocationalCollegeofScienceandTrade,Guangzhou510640,China; 3.SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China) Abstract:Deoxynivaleno1(DON,vomitoxin)contaminationofgrainsisaverycommonphenomenoninthegloba1.The pigsaremostsusceptibletoDON.Theresearchstudiespharmacokineticofdeoxynivalenolandclinicalnormalindexesofhema— tologyandbiochemistrybyintragastricandintravenous(IV)administrationofpureDON.TheresultsshowedthatHCThad verysignificantdifferencein12,24hcomparedwithpre, administration(P<0.01);HGBandHCTwerelowerthanpre-admin— istration,andhadsignificantdifferencein0.33,1,2hcomparedwithpre-administration(P<0.05);RBCandPLThadnodiffer— encecomparedwithpre-administration(P>O.05).Inintravenousgroup, WBC,RBCandPLThadnodifferencecomparedwith pre-administration(P>O.05);WBC,RBCandPLTwerelowerthanpre— administration,andhadsignificantdifferencein0.17, 0.33hcomparedwithpre-administrationrespectively(P<O.05);HCTand HGBhadverysignificantdifferencecomparedwith pre-administrationatothertimes(P<O.O1).Hematologicindexeshadnod ifferenceeffectsofvomitoxinbydifferentadministra— tionmethodsinpigs(P>0.05). Keywords:hematologicvalues;vomitoxin;pigs 中国畜牧兽医2010年第37卷第4期生理生化?51? 津市博迪化工有限公司产品;IL-6试剂盒为ADL 公司产品.酶标仪(BioTek),二氧化碳培养箱 (Thermo),离心机(Sigma),旋转蒸发仪(上海亚荣 生化仪器厂). 1.2方法 1.2.1小鼠腹腔巨噬细胞的制备连续2d给小 鼠腹腔注射5蛋白胨0.2mL,第3天将小鼠脱臼 处死,放入75乙醇中浸泡1,2min,消毒.在超 净台中,将小鼠暴露腹膜后,用759/6乙醇擦洗腹壁 后,向小鼠腹腔注射4?D-Hank’S液5mL,轻揉 腹部2,3min,从腹腔吸出细胞悬液于离心管中, 1500r/min离心5min,再用冷的D-Hank’s洗涤细 胞2,3次,用含1O胎牛血清的RPMI1640培养 液调整细胞浓度至1×10个/mL.以每孔100L 细胞悬液接种于96孔培养板中,将培养板置于37 ?,5%CO培养箱中孵育4h后,弃去培养基,用 PBS洗涤2次,洗去未贴壁的细胞. 1.2.2试验分组及处理试验分为空白对照组,阳 性对照组和不同剂量的给药组,接种于96孔培养板 中,每组设4个重复孔.每孔培养液总体积100 L,给药组添加沙葱多糖的终浓度分别为50,100, 200,400,800~g/mL,阳性对照组含LPS终浓度为 20~g/mL的RPMI1640培养液.将各试验组均置 于CO.培养箱(5CO.,37?)中孵育至所需的时 间后,根据不同的测定方法进行不同处理,测定各个 指标. 1.2.3沙葱多糖对巨噬细胞吞噬中性红能力的影 响在培养24h后的巨噬细胞中,每孔加入0.1 中性红生理盐水溶液100L,继续培养20min,倾 去上清液,用PBS缓冲液洗3遍,每孔加入细胞溶 解液(冰醋酸:乙醇=1:1)200L,室温下放置 2,3h,待细胞溶解后,在酶标仪上测定540nil3.处 的吸光度.’ 1.2.4巨噬细胞能量代谢水平的测定采用 MTT法.将按上述条件和过程制备的96孔细胞 培养板置37?,5CO.孵箱中继续培养24h,加 入MTT(终浓度为5mg/mL),20L/孔,37?孵 育4h,弃去孔内液体,加入DMSO,100uL/~L,充 分混匀,并置微型振荡器上振荡5min,于酶标仪上 读取波长570nlTl处的吸光值. 1.2.5IL-6的测定方法采用酶联免疫法 (ELISA),具体操作方法按照试剂盒说明书进行. 诱导培养24h,于酶标仪450nm处测定吸光度. 1.2.6统计分析采用SAS9.O统计软件进行方 差分析及多重比较. 2结果与分析 2.1沙葱多糖对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响 由表1可知,沙葱多糖添加浓度为100ug/mL 时,巨噬细胞吞噬中性红的能力最强,并与其他各组 差异显着(P<0.05),表明该浓度为此时最适添加 浓度. 表1沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞 吞噬中性红能力的影响 注:同列数据肩标相同字母表不差异不显着(P>O.05),屑标不 同字母表示差异显着(P<O.05).下同. 2.2巨噬细胞能量代谢水平的测定由表2可知, 沙葱多糖各组的吸光度值显着高于空白组(P< 0.05),说明沙葱多糖能够显着提高巨噬细胞能量代 谢水平,但沙葱多糖各组之间差异不显着(P> 0.05).从数值上来看,在沙葱多糖添加浓度为200 ug/mL时,巨噬细胞的能量代谢水平最高. 表2沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞的 能量代谢水平的影响 2.3IL一6的测定由表3可知,除沙葱多糖400 ~g/mL添加浓度组与空白对照组差异不显着外(P >o.05),其余各试验组IL一6的分泌量均显着高于 空白对照组(P<0.05),说明沙葱多糖能够促进巨 表3沙葱多糖不同试验处理组对巨噬细胞IL-6的影晌 ? 52?生理生化中国畜牧兽医2010年第37卷第4期 噬细胞分泌IL-6,其中添加浓度为100”g/rnL时, IL一6的分泌量最多,表明沙葱多糖的添加浓度此时 以100Fg/mL为宜. 3讨论 巨噬细胞具有抗原提呈,吞噬消化及分泌多种 细胞因子等重要功能,以其在免疫应答和机体防御 机制中的重要作用,而受到人们的广泛重视.未活 化的巨噬细胞的吞噬杀伤作用是有限的,巨噬细胞 被激活后,其吞噬作用会增强.戴玲等(2000)报道, 蜜环菌多糖能在体外显着增强小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬中性红的作用.陈伟等(2005)证实,库拉索芦荟 多糖也能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能 力.本研究结果显示,沙葱多糖作用下的小鼠腹腔 巨噬细胞对中性红的吞噬能力显着高于空白对照组 (P<O.05),说明沙葱多糖具有活化巨噬细胞,增强 其吞噬能力的作用. 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶并沉积在细胞 中,其浓度的高低反映了细胞数量及能量代谢水平. 程安玮等(2007)报道,甘草多糖能激活巨噬细胞,提 高其能量代谢水平.结合上述试验结果,沙葱多糖 能够激活巨噬细胞,使其能量代谢更加活跃. IL-6能够促进B细胞增殖,分化并产生抗体. 许晓燕等(2008)研究发现,黄背木耳多糖能够促进 IL一6的分泌.Tokunaka等(2000)研究报道,念珠 菌葡聚糖促进体外小鼠巨噬细胞IL一6的合成. Sekine等(1995)研究指出,双歧杆菌肽聚糖可激活 小鼠腹腔巨噬细胞,使其IL-1,IL-6,TNF-a的mR— NA表达增强.本试验结果表明,沙葱多糖能促进 IL一6的分泌,这说明沙葱多糖能够调节免疫功能可 能与其影响IL一6的分泌有关. 沙葱多糖能够增强巨噬细胞吞噬中性红的能 力,提高能量代谢水平,促进IL一6的分泌,从试验结 果可看出,试验组均高于空白对照组.综合考虑沙 葱多糖的最适添加浓度为100/~g/mL.综上所述, 沙葱多糖能够激活巨噬细胞,而活化的巨噬细胞可 能在沙葱多糖抗肿瘤,抗病毒等方面起到重要作用. 参考文献 1丁辉景,张力,蒋春茂,等.两种壳聚糖对小鼠增重和免疫机能影 响的试验研究EJ;.中国畜牧兽医,2008,35(11):13,16. 2许晓燕,等.黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用EJ].中国食用 菌,2008,27(3):41,42,49. 3张会新,刘洪雨,刘畅,等.黑木耳多糖对小鼠免疫功能的影响 口].动物医学进展.2009,30(7):23,25. 4张兴夫.沙葱多糖提取工艺及对小鼠免疫机能影响的研究ED3. 呼和浩特:内蒙古农业大学,2009. 5陈伟,林新华,等.库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外激 活作用[J].中国药学杂志,2005,40(1):34~37. 6程安玮,金征宇,万发春.甘草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作 用[J].食品科学,2007,28(12):431,434. 7蔡小玲,章佩芬,何有明,等.黑木耳多糖,红菇多糖的降胆固醇作 用研究[J].深圳中西医结合杂志,2002,12(3):137,139. 8戴玲,王华,沈业寿.蜜环菌多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的 影响EJ].生物学杂志,2000,17(5):20~21. 9SekineK,OhtaJ,OnishiM,eta1.Analysisofantitumorproper— tiesofeffectorcellsstimulatedwithacellwallpreparation (WPG)ofbifidobacteriuminfantis[J].BiolPharmBull,1995,18 (1):148,153. 10TokunakaK,eta1.Immunopharmacologicalandimmunotoxico— logicalactivitiesofawater——solublebeta—-D-glucanCSBGfrom Candidaspp[J].IntImmunopharmacol,2000,22(5):383,394. ActivationofPeritonealMacrophagesbyPolysaccharidesExtracted fromAlliumMongolicumRegelinMice WANGLi—si,AOChang-jin,ZHANGXing—fu (CollegeofAnimalScience,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot010018,China) Abstract:Astudywasconductedtoevaluatetheactivationofperitonealmacrophagesbypolysaccharidesextractedfrom AlliumMongolicumRegelinmice.TheperitonealmacrophageswereculturedatdifferentconcentrationofAlliumMongolicum Regelpolysaccharides,thephagocytosiscapability,energymetabolismlevelandIL一6activitywereassayed.Theresults showedthatAlliumMongolicumRegelpolysaceharidescouldenhancethephagoeytosiscapability,energymetabolismleveland IL-6activity.ExceptthetestofIL一 6activity,400/xg/mLAlliumMongolicumRegelpolysaccharidesandtheblankcontrol groupwerenotsignificant(P>0.05),intheotherindex,thetestgroupsweresignificantlyhigherthantheblankcontrol group(P<O.05).TheperitonealmacrophagescouldbeactivatedbypolysaccharidesextractedfromAlliumMongolicumRegel inmice. Keywords:AlliumMongolicumRegelpo1ysaccharides;macrophage;activation