犬子宫积液的细菌分离和鉴定_cropped

犬子宫积液的细菌分离和鉴定_cropped 征结合临床症状, 可将子宫积液大致分为二类: 一是 防治本病提供了理论依据。 () 1 实验材料与方法 子宫积水, 子宫壁很薄, 宫腔内液体回声很低 暗区, 除有的病例腹围增大外, 一般无临床症状; 二是子宫 1. 1 试验病料 子宫物来源于东北农业大学动 积脓, 子宫壁较厚, 宫腔内液体部分有一定强度的回 物医院就诊的病犬, 选择临床症状符合子宫积液的病 声, 多数病例有临床症状, 如食欲不佳, 体温升高, 精例。 经过体检、血液学检验和超声波检查确诊后对其 1 神不振, 行为反常等。 犬子宫积液及子宫积脓已成实施卵巢子宫切除术获得子宫及其内容物。共采集 5 为影响犬繁殖能力 只犬的病料。 和引起犬死亡的疾病之一。通过临床疾病诊治的 1. 2 培养基及试剂 分离培养基为普通琼脂培养可以看出, 犬子宫积液发病率逐渐提高, 发病年龄也 基、羊鲜血琼脂培培养基、鲜血2葡萄糖琼脂培养基、 由老犬向青年犬过渡, 对此为防止本病的扩大, 本试 营养肉汤和血清肉汤、麦康凯琼脂培养基; 生化鉴定 验采集临床病犬子宫积液病料, 进行细菌的分离、鉴 培养基及试剂为尿素酶高层斜面、明胶培养基、蔗糖、 定, 确定子宫积液中的病原菌及这些细菌与子宫乳糖、葡萄糖发酵管、葡萄糖蛋白胨水、甲基红试剂、 2试剂、吲哚试剂、过氧化氢试剂、硫化氢试剂和枸 V P 收稿日期: 2006204206 橼酸盐试剂等。 通讯作者: 吕占军 引起胃肠道功能紊乱, 出现呕吐症状。 幼虫在体内移 行, 可以进入肺脏, 使病犬还可现出咳嗽, 脓样鼻分 泌物等呼吸道症状。钩虫的成虫吸附在犬的小肠黏膜 上吸血, 并且能分泌抗凝素, 延长凝血时间, 引起大量 出血, 出现血便, 再加上虫体有变换吸咬部位的习性, 以致伤口不断出血, 造成宿主严重的贫血现象, 黏膜 苍白, 血红蛋白明显偏低。 母犬感染蛔虫或钩虫后, 由于年龄免疫而不表现 症状, 但是存在母犬组织内的虫体可以通过吮乳或胎 盘感染幼犬。幼犬还可以经吞食感染性虫卵和捕食带 有感染性幼虫的啮齿类动物等途径感染蛔虫和钩虫, 另外钩虫也可以通过皮肤感染。 因此要保持犬舍、食 ()图 3 肠道切片被横断的虫体 ×4, . . HE 槽、食物和饮水的清洁卫生, 及时清理粪便, 并对粪便 5 其他病原检查 用犬瘟热及细小病毒抗原试剂盒 实施生物热处理, 保持环境清洁干燥。定期对犬舍等环 检测均为阴性, 由于主诉此犬按期进行了犬六联苗的 境进行火焰消毒, 杀灭环境存在的幼虫。 进行灭鼠, 控 防疫, 所以排除病犬是犬瘟热及细小病毒感染。 (制转运宿主传播蛔虫和钩虫病。对成年犬 包括母犬和 根据临床症状、血常规分析、粪便检查、死后病理 ) 公犬和幼犬采取定期的驱虫措施, 母犬在怀孕后第40学检查和其他病原检查结果, 诊断为蛔虫和钩虫混合 天 和产后 14 天用芬苯哒唑或伊维菌素等药物驱虫, 幼 感染, 造成该犬严重贫血、消瘦并导致死亡。犬出生后 2 周进行驱虫, 2 周后再驱虫, 2 月龄时再次 6 病例分析 犬蛔虫病和钩虫病是较为普遍的犬肠 给药以驱除出生后感染的虫体, 驱虫期间要及时清理 1. 3 试验方法 2试验、吲哚试验、硫化氢试验、明胶液 基红试验、V P 化试验、尿素酶试验、石蕊牛乳试验和枸橼酸盐试验。 1. 3. 1 细菌的分离 由于脓汁的含菌量较多, 采用 2 试验结果分区划线法将病料接种到灭菌羊血营养琼脂培养基 和普通琼脂培养基并于 37?培养24 , 用革兰氏染色 2. 1 分离培养的结果 肉汤均匀浑浊, 有絮状沉淀,h 法涂片镜检, 观察。 同时分别挑取单个菌落接种于麦 液面有菌环。在普通琼脂上培养可见圆形、稍隆起、表 康凯培养基后观察。面光滑、边缘整齐、无色或接近灰白色的菌落。血琼脂 平板上生长形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白1. 3. 2 细菌的纯化 将挑选出来的细菌, 按革兰氏 色菌落, 直径为 2, 3 。 在麦康凯琼脂上形成红色 染色特点和细菌的形态分类, 再次接种于普通鲜血琼 mm 菌落。 脂培养基上培养纯化, 纯培养后镜检无杂菌者保存于 斜面保菌培养基中, 经 37?培养 8, 24 , 再置于 4? 2. 2 生化鉴定的结果 经革兰氏染色可见革兰氏阴h 性的短杆菌, 两端钝圆。散在或成对存在。型溶血, 冰箱保存。 以备生化鉴定。 Χ 1. 3. 3 细菌的生化鉴定 主要的生化试验有革兰氏 无溶血环。 生化鉴定的结果见表 1。染色、溶血试验、各种糖发酵试验、过氧化氢试验、甲 表 1 革兰氏阴性杆菌的鉴定结果 乳糖试验 蔗糖试验 葡萄糖试验 过氧化氢试验 明胶试验 枸橼酸盐试验 吲哚试验 甲基红试验 2试验 硫化氢试验 尿素酶试验 V P + - + + + + - - - - - 2. 3 细菌鉴定结果 经分离培养和生化鉴定, 查细 , 子宫内膜的腺体会产生大量分泌物, 才有利于细 生 菌 鉴定手册第 8 版确认, 分离出的是埃希氏大肠杆 菌的入侵和大量繁殖, 然后细菌才分泌毒素并刺激子 菌。 经分离培养和生化鉴定宫内膜, 5 种病料结果均为埃希 , 促进子宫积液量的增加而引起疾病的进一步 氏大肠杆菌。发展。 3 讨论 3. 3 只分离出大肠杆菌的可能原因 一是子宫的防 大肠杆菌是人和温血 3. 1 细菌的致病性和来源 御机制, 在疾病的初期细菌侵入子宫后, 机体释放各 动物肠道正常菌群, 随粪便排出体外, 也是环境常在 种激素如雌激素, 它可提高白细胞向子宫腔移动的速菌。 试验所分离出的埃希氏大肠杆菌毒力很弱, 是一 率, 增加子宫腔杀菌的能力, 这样某些细菌就可能被 种条件致病菌, 受到某些诱发因素的刺激下, 就可能 子宫的一些防御机制所清除。二是子宫中的无菌环境 导致宿主内环境发生异常, 引起发病。 正常生理情况 可能与抗生素的应用有关, 因为病犬发病后采用过抗 下犬阴道内也存在这些常在菌, 从阴道正常菌群中分生素治疗, 降低了细菌的检出率。 而子宫内膜和子宫 离出大肠杆菌和子宫内分离出的大肠杆菌属同种类 肌层内存在特异性的大肠杆菌受体, 从理论上增加了 型。 在发情前期和发情期细菌通过子宫颈进入子宫, 其在子宫内建群的可能性, 所以最终只有大肠杆菌被 造成污染, 是一种正常现象。 由于发情期时犬的子宫 检出。 颈处于开放状态, 此时阴道的常在菌有很大机会进入3. 4 发病的主要原因 由试验结果看, 5 只病犬的子宫, 如果此时子宫内膜已经处于增生的状态, 则入 病料经分离鉴定均为大肠杆菌, 而大肠杆菌又不能直 侵的细菌很可能会导致子宫内的炎症过程, 促进子宫 接引发子宫积液, 由此看子宫积液的主要发病机制还 积液的发生。应是长期或反复孕酮刺激和雌激素的共同作用的结 2 3. 2 细菌与子宫积液的关系 F e ldm an , D h a li2果。 细菌作用只不过是一种继发因素。 3 4等均用机械划伤的方法成功造成黄体 , w a llC h en 参考文献: 期子宫内膜的局部增生, 将从子宫积液犬的子宫中分 1 论士春, 陈兆英. 130 例犬猫疾病超声诊断分析 [ J . 中国兽医杂 ( ) 志, 1994, 24 10: 39.离出的埃希氏大肠杆菌接种到这些犬的子宫腔内, 结 , . 21: 2 F e ldm an E C N e lso n R W C h ap te r C y st ic endom e t ra l 果有很大比例的犬可以发展为子宫积液。因此他们断 ƒ. :h yp e rp la siap yom e t ra com p lex and infe r t ility infem a le do g sIn 定, 一定存在某些与子宫内膜创伤或刺激有关的因 C an ine and F e line E ndo c r ino lo gy and R ep ro duc t io n [ M . 素, 与细菌共同作用, 产生了引发子宫积液的适宜刺: . ., 1996. 61: 154921557.P h ilade lp h iaW B Saunde r s 3 D h a liw a l G K , E ng land G C , N o ak e s D E. T h e effec t s o f 激。现已证明这种影响因素就是孕酮和雌激素。显然 endom e t r ia l sca r if ica t io n o n u te r ine ste ro id recep to r s bac te r ia l 长期或反复因孕酮和雌激素刺激引起子宫病理性变 [ . f lo ra and h isto lo g ica l st ruc tu re in th e b itch J A n im R ep ro d 化是子宫积液发生的主要机制和初始原因。虽然细菌 ( ) , 2002, 69 324: 2392249.Sc i 尤其大肠杆菌是子宫积液中经常分离到的细菌, 但其, , . 4 C h en Y M W r igh t P J L ee C SA m o de l fo r th e study o f [ . cy st ic endom e t r ia l h yp e rp la sia in b itch s J J R ep ro d F e r t il 不可能是发生子宫积液的初始原因, 因为正常犬子宫 1, 2001, 57: 4072414.Supp 污染时并不会引起该病。而且子宫积液初期子宫内容 , , . J ubb K V Fm k ennedy P C P a lm e r NP a tho lo gy o f D om e st ic 5 物常为无菌状态, 只有子宫内膜被某些因素如孕酮、 [. 40 . , , A n im a l M ded tH a rco u r t B raceJo vano v ich P ub lish e r s In: L o ndo n , 1985. 3: 3702385. 雌激素等预处理后, 造成黄体期子宫内膜的局部增