补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究（可编辑）

补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究（可编辑） 补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究 中国危重病急救医学 年 月第 卷第 期 ,, . , .论著补阳还五汤对脓毒症大鼠脾细胞凋亡的实验研究 张畔 郭聪芳 骆宁 王兵 刘剑虹 徐新女 【摘要】 目的 通过观察脓毒症大鼠脾脏 、 淋巴细胞数量、细胞凋亡及 一 、蛋白表达的变化, 探讨补阳还五汤对脓毒症大鼠免疫功能的影响及其作用机制。方法 按随机数字表法将 只雄性 大鼠分为假手术组 只 、模型组 只及补阳还五汤治疗组 只 和防治组 只 。采用盲肠结扎穿孔 术制备脓毒症大鼠模型。治疗组于术后、防治组于术前 灌胃补阳还五汤浓缩液含生药 // ,每日 次。分别于术后 、 、 、 、 处死大鼠,观察各组动物脾脏形态学变化,脾 、 淋巴细胞,凋亡细胞, 一 、 蛋白表达的变化。结果 光镜下观察术后大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴 小结破坏,损伤的严重程度为模型组 治疗组 防治组。与假手术组比较,模型组术后各时间点 淋巴 细胞、淋巴细胞、 一 蛋白表达明显降低,凋亡细胞、 蛋白表达明显增加,均于 达谷值或峰 值均为积分吸光度 值: 淋巴细胞: . 士 . 比 . ? . 淋巴细胞:. ?. 比. 士 . ; 一 蛋白表达: . ? . 比 . ? . ;凋亡细胞:. 土 . 比 . 士 . ;蛋白表达: . 士 . 比. 土. ,均 . ;而淋巴细胞无明显变化。与模型组比 较,补阳还五汤治疗组和防治组各时间点脾脏 淋巴细胞、 淋巴细胞明显升高,凋亡细胞、蛋白表达明显减少,而 淋巴细胞、 一 蛋白表达无明显变化;防治组治疗效果优于治疗组 值: 淋巴细胞: . ? . 比 . ? . ;淋巴细胞: . 士 . 比 . ? . ;凋亡细 胞: . 土 . 比 . 土 . ;蛋白表达: . ? . 比 . ? . ,. 或 尸 .;至 时各指标逐渐接近假手术组水平。细胞凋亡与呈显著正相关 一 ., 一 . ,与 一 呈显著 负相关 一一 ., 一 . 。结论 补阳还五汤通过减少脾脏 淋巴细胞、 淋巴细胞凋亡,从而 改善脓毒症时的免疫抑制;这可能与补阳还五汤减弱对细胞凋亡的促进作用相关。 【关键词】 补阳还五汤;脓毒症;脾脏; 凋亡 补阳还五汤 , ? , , ,? , ? .,, , : , : 泡. , , 一 ; ,补阳还五汤 . : 一, 一, 一 一../ / ,, ,., , , , . , ,, , 一 ., . , , . , 一 ,,: : . 士 . . . ? ; : . 土 . .. 土 . ; 一 : . 土 . .土 ; :. 土 . . . ? . ; :. 土 . ? ,. , . . ,. 一. , : : . 土 . ; : . 士 . . . ? . ; : 土?. ;: . 士 . . . ? . , ?, . . 中国危重病急救医学 年 月第 卷第 期? ? ? ?一 ., 一 . , 一 .? 一 . . , . ;;; 胞, 淋巴细胞及 一 、蛋白表达;应用 脾脏是人体最大的外周免疫器官,是成熟 、 淋巴细胞的定居处和对外源性抗原产生免疫应答的 原位末端缺刻标记法 检测脾脏细胞凋 亡。应用 . 图像分析系统进行图 主要场所,因此,脾细胞凋亡在脓毒症免疫抑制中可 能发挥重要作用。已知脓毒症的发生与机体促炎/抗 像采集及分析,测定积分吸光度 值。 . 统计学处理:使用. 统计软件进行统 炎反应失衡及免疫状态高度相关,这就提示如能合 计学处理。计量资料以均数土差 土 表示,采 理扶正抗邪,达到机体整体水平的“阴平阳谧”,将有 助于调节促炎/抗炎反应平衡,主动提高机体免疫功 用单因素方差分析和 检验;相关性采用直线相关 能。补阳还五汤是益气活血中药的代表方剂,具有扶 分析,. 为差异有统计学意义。 结 果 正固本,恢复机体各脏腑正常生理功能的作用。研究 表明,补阳还五汤在大鼠全脑缺血/再灌注 / 模 .死亡情况:术后 内共有 只动物死 亡,模型组死亡 只.,治疗组死亡 只 型中能够通过增加 ~ 阳性细胞的表达、降低 阳性细胞的表达,起到抑制细胞凋亡、抗脑/ 损 .,防治组死亡 只 。 。 伤的作用 。本研究中拟通过观察补阳还五汤对脓 . 动物脾脏组织结构改变:随术后时间延 毒症大鼠脾淋巴细胞凋亡及其分子机制的影响,为 长,淋巴小结破坏逐渐增加,白髓萎缩,红、白髓分界 中西医结合防治脓毒症提供可靠的依据。 欠清,术后 损伤最明显,以后逐渐缓解。各组损 材料与方法 伤的严重程度为模型组 治疗组 防治组。 . 实验动物及药物:清洁级健康雄性 . 各组动物脾脏 、 淋巴细胞比较 大鼠只,体重 土 ,购自天津市放射医 表 :模型组术后 ~脾脏 淋巴细胞 学研究所实验动物中心,动物合格证号: 津 明显低于假手术组均.,于达低谷。 ? 。补阳还五汤浓缩液依原方组成,换算成 与模型组比较,治疗组术后 、 淋巴 相应生药剂量,温开水冲调成含生药 / 。 细胞差异无统计学意义均.,随给药时间 . 动物分组、制模及给药:大鼠按随机数字 延长, 淋巴细胞逐渐回升,术后 ~ 显 表法分为假手术组只 、模型组只 、补阳还 著升高 均.;但治疗组各时间点 五汤治疗组 只 和防治组 只 。采用盲肠结扎 淋巴细胞仍显著低于假手术组 均.。与 穿扎术 制备脓毒症动物模型,术毕皮下注射 治疗组相似,防治组 淋巴细胞也呈现随 / 生理盐水抗休克;假手术组只开腹、关腹, 给药时间延长而逐渐升高的趋势,且升高更明显 然后经尾静脉注射生理盐水 / ,次。治 也更迅速,术后、已恢复至假手术组水平 疗组术后 即给予补阳还五汤 / 灌 均.。各组脾脏 淋巴细胞在 胃,每日 次;防治组术前 开始给予补阳还五汤 术后均无明显变化,且组间比较差异无统计学意义 均.。/ 灌胃,每日 次;假手术组和模型组术后 均每日给予等量生理盐水灌胃。实验过程中动物处 . 各组动物脾脏 淋巴细胞比较 表 : 置方法符合动物伦理学标准。 模型组术后 淋巴细胞即出现明显减少, . 标本制备及检测:各组分别于术后 、 、 、 达低谷,随后略有回升,但仍在较低水平,与假、 处死 只大鼠。开腹,剥离脾脏,制备切片。 手术组比较差异有统计学意义均.。治疗 采用免疫组化法检测脾脏 、 淋巴细 组术后 、 淋巴细胞与模型组比较差 异无统计学意义 均.,但随给药时间延长 : . / .. .? . . .其含量逐 渐升高,术后 ~ 显著高于模型组 基金项目;天津市医药卫生科研课题 作者单位: 天津市第一中心医院急救医学研究所 均 . ;但各时间点仍显著低于假手术组均 通信作者:张跸,: ..。与治疗组相似,防治组脾脏 淋巴史鱼鱼重 鱼墅 堂 生 旦筮 堂箜 塑 , , ., . 表 补阳还五汤对脓毒症大鼠脾脏、。。 淋巴细胞, 淋巴细胞, 凋亡细胞及、 一 蛋白表达的影响 土 注:与假手术组同期比较, . ,. ;与模型组同期比较, . , . ;与治疗组同期比较, . ,. 细胞也呈现随给药时间延长而逐渐升高的趋势,且 讨 论 各时间点均明显高于模型组和治疗组. 或 随着对脓毒症发病机制研究的进展,人们逐渐 .,术后 、 与假手术组差异逐渐缩 认识到机体并非一直处于促炎状态,早期在炎症因 小均.。 子的刺激下,脾脏淋巴细胞被活化,细胞增殖增加, . 各组动物脾组织细胞凋亡比较 表 :模型 随后机体可能进入了一个免疫抑制阶段。研究表明, 组、治疗组、防治组术后 ~ 凋亡细胞均明显高 免疫功能抑制也是脓毒症的重要特征,因严重的炎 于假手术组均.,均于达高峰,阳性 症反应诱导的免疫细胞大量凋亡、淋巴细 胞增殖减 细胞首先出现在脾小体,随后出现在动脉周围淋巴 低与其免疫功能抑制密切相关 。因此,抑制淋巴 鞘;以后凋亡细胞呈逐渐回落趋势,以防治组回落更 细胞凋亡有助于改善机体免疫功能,进而提高救治 明显、更迅速,治疗组次之。治疗组、防治组术后 ~ 率 。脾脏是人体最大的外周免疫器官,是成熟 凋亡细胞均明显低于模型组 均.; 淋巴细胞和 和 淋巴细胞定居、两组的差距逐渐减小 均.。 并发生特异性免疫应答与对抗的场所。在不同类型 . 各组动物脾组织、 一 蛋白表达表 : 的脓毒症模型实验中可观察到,淋巴细胞对凋亡刺 模型组、治疗组、防治组术后 ~ 蛋白表达 激的敏感性明显增高,因此可以认为脓毒症时脾脏 均明显高于假手术组,达高峰, 一 表达均低 的免疫功能变化具有代表性。王今达在回顾中医药 于假手术组,达低谷 均.;防治组下降 用于危重病急救情况时选定“三证三法” 热毒证与 清热解毒法、血证与活血化瘀法、急性虚证与扶正固 或升高更明显也更为迅速,治疗组次之。术后~ 本法 为研究突破口。活血化瘀法即通络法,可以治疗组、防治组蛋白表达均明显低于模型 畅通络脉气血,减少毒邪的蕴积,改善各脏腑的温煦 组 均.。治疗组、防治组与模型组间 一 濡养。扶正尤其是补气通阳,可使阳气畅达,恢复络 蛋白比较差异均无统计学意义均尸 .。 脉出入自由、充盈满溢的正常状态,有利于抗邪而 . 细胞凋亡与、 一 的相关性分析:细胞凋 出,防止内生毒邪的进一步损害。从传统医学角度 亡与 呈显著正相关 一. , 一. ,与 看,正虚毒损、瘀血阻滞是严重脓毒症的基本病一 呈显著负相关 一一 ., 一 . 。