临床医学论文-放大染色胃镜下氩气刀治疗胃黏膜隆起糜烂的临床研究

临床医学论文-放大染色胃镜下氩气刀治疗胃黏膜隆起糜烂的临床研究 临床医学论文-放大染色胃镜下氩气刀治疗胃黏膜隆起糜烂 的临床研究 【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱法测定奥扎格雷的含量。 采用 Kromasil C18 (4.6mm×150mm, 5μm)色谱柱以0.025mol/L磷酸二氢钾:pH 3.4: -乙腈:85?15:为流动相,流速为1.0ml/min,以左羟丙哌嗪为内标物,检测 波长为274nm。结果 奥扎格雷的回归方程Y=0.0023X+0.0165(r=0.9997),其线 性范围为4.16,416μg/ml,平均回收率为99.97%:RSD值为0.44%:。结论 本 法可用于奥扎格雷的含量测定,操作简便,结果准确。 【关键词】 反相高效液相色谱法;奥扎格雷;含量测定 Abstract: Objective To develop a RP-HPLC procedure in determination the quantity of ozagrel. Methods HPLC was carried out using a Kromasil C18 column (4.6mm×150mm, 5μm) with 0.025mol/L Potassium dihydrogen phosphate(pH3.4)-acetonitrile (85?15) as the mobile phase, the flow rate was 1.0ml/min, the internal standard was levodropropzine. The UV wavelength was 274nm. Results The regression equation was Y=0.0023X+0.0165 (r=0.9997). The linear ranged from 4.16 to 416μg/ml. The mean recovery was 99.97% and RSD was 0.44%. Conclusion The proposed method is simple, selective accurate and precise. Key words: reversed-phase high performance chromatography; ozagrel; quantity determination 奥扎格雷为高效、选择性血栓素合成酶抑制剂,通过抑制血栓烷A2:TXA2:的产生及促进前列环素:PGI2:的生成而改善两者间的平衡失调,具有抗血小板聚集和扩张血管作用。能抑制大脑血管痉挛,增加大脑血流量,改善大脑内微循环障碍和能量代谢异常,从而改善蛛网膜下腔出血术后患者的大脑局部缺血症状和脑血栓:急性期:患者的运动失调。用于治疗急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍。国内有采用高效液相色谱法(HPLC)外标法测定奥扎格雷及其制剂的含量,1,2,,及奥扎格雷中有关物质的报道,3,。笔者采用内标法对该药进行含量测定,现将其测定方法报道如下。 1 材料与方法 1.1 材料 JASCO.LC900 SYSTEM,JASCOPU-980 Intelligent HPLC Pump,JASCO UV-975型紫外检测器;7725手动进样阀,JASCO LIBROR L-200SM十万分之一光学天平:日本 JASCO 公司:;TDX高速离心机;涡旋震荡仪,PHS-3C PH仪;超声震荡仪。奥扎格雷:中国药品生物制品检定所提供批号:100557-200401:,内标左羟丙哌嗪:深圳海王药业有限公司技术中心提供,批号04021011,纯度>99.5%:。注射用奥扎格雷钠为市售:批号:200601323;200607314;200610328:。乙腈、甲醇为色谱纯,水为二次蒸馏水。 1.2 方法与结果 1.2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾-乙腈:85?15:,冰醋酸调至pH 3.38;检测波长:274nm; 柱温为室温;流速:1.0ml/min;进样量:20μl。流动相经0.22μm的微孔滤膜滤过后使用。 1.2.2 对照品溶液 准确称取奥扎格雷对照品,置于10ml量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液,作为对照品溶液。 供试品溶液 取本品,准确称定,置于10ml量瓶中,加甲醇适量溶 1.2.3 解并稀释成每1ml中含1mg的溶液,作为供试品溶液。 1.2.4 内标溶液 准确称取左羟丙哌嗪适量:0.0044g:置于100ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,即得内标液440mg/L。 在上述色谱条件下,通过对奥扎格雷、溶剂及辅料进行HPLC分离检测,结果见图1,3。 1.2.5 线性关系考察 精密称取奥扎格雷对照品适量:0.00416g:,置于10ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即为奥扎格雷贮备液416μg/ml,精密量取1,1.5,2.5,5,7.5ml分别置于10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,与奥扎格雷标准贮备液416μg/ml各进样20μl,依法测定,记录峰面积。以峰面积积分值做为纵坐标:Y:,奥扎格雷浓度做为横坐标:X:,得线性回归方程为:Y=0.0023X+0.0165,r=0.9997。明浓度在4.16,416μg/ml范围内,峰面积与测定浓度成良好线性关系。 1.2.6 精度度试验 取同一样品溶液20μl,重复进样5次,结果样品含量的RSD为0.56%:n=5:。 1.2.7 重复性试验 取同一批号:批号为200607314:样品6份,精密称定,按照含量测定项下的方法,测定奥扎格雷的含量,RSD为0.68%,表明本法重复性较好。 1.2.8 样品溶液稳定性试验 取样品溶液于室温避光放置0,2,4,12,24,48h分别进行测定,峰面积比基本不变,RSD为1.7%。结果表明,样品溶液48h内可保持稳定。 图1 奥扎格雷对照品及内标的HPLC色谱图:略: 1.奥扎格雷 2.左羟丙哌嗪 图2 奥扎格雷及内标的HPLC色谱图:略: 1.奥扎格雷 2.左羟丙哌嗪 图3 空白样品的HPLC色谱图:略: 1.2.9 回收率试验 采用加样回收的方法,取已测定含量的同批样品适量共9份,3份为一组,分别加入奥扎格雷对照品4,5,6mg,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀后按测定项下的方法分别测定含量,减去样品本底,计算回收率,测得3种浓度奥扎格雷的平均回收率:n=3:分别为99.92%,100.17%,99.84%,RSD分别为0.29%,0.45%,0.59%。试验结果见表1。 表1 回收率试验结果:略: 1.2.10 样品含量测定 取3批奥扎格雷,精密称定,置10ml容量瓶中,加甲醇稀至刻度,摇匀。经0.22μm滤膜滤过,精密量取1ml,加内标物100μl,置10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,取20μl进样,内标法以峰面积计算样品中奥扎格雷的含量:n=3:,见表2。 表2 奥扎格雷含量测定结果:略: 2 讨论 2.1 乙腈含量对色谱行为的影响 分别配制乙腈含量为20%,15%,10%的流动相,考察乙腈含量对色谱峰的影响。结果表明,乙腈含量为20%时,主峰与杂质峰的出峰时间相近,杂质峰对主峰影响较大。乙腈含量为10%时,检测灵敏度降低,峰高明显降低。采用乙腈含量为15%的流动相较为适宜。 2.2 用甲醇代替乙腈对色谱行为的影响 鉴于乙腈成本高、毒性大,故在上述研究的基础上,将流动相体系的组成成分进行改变,试验以甲醇代替乙腈的分离效果。结果显示,醇羟基对奥扎格雷有影响,造成峰拖尾严重。 【参考文献】 ,1, 姚秀琼,程华.HPLC测定奥扎格雷及其制剂的含量,J,.广东药学,2005,15(4):13-15. ,2, 李玉兰,黄俊杰.RP-HPLC测定注射用奥扎格雷钠及奥扎格雷钠注射液的含量,J,.中国药师,2002,5(3):165-168. ,3, 戴玉荣,李泳,王东凯,等.高效液相色谱法测定奥扎格雷中有关物 质,J,.中国医院药学杂志,2004,24(12):748-749.