戊酸雌二醇(补佳乐)在体外受精胚胎移植术中作用的分子机制探讨

戊酸雌二醇(补佳乐)在体外受精胚胎移植术中作用的分子机制探讨 兰州大学 硕士学位论文戊酸雌二醇(补佳乐)在体外受精-胚胎移植术中作用的分子机 制探讨 姓名:李丽斐 申请学位级别:硕士 专业:生殖医学 指导教师:张学红 20060501 关于学位论文使用授权的声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归衾贾荽笱А,救送耆 私饫贾荽笱в泄乇,妗?褂醚 宦畚牡墓娑ǎ 庋 ,,婊蛳蚬 矣泄夭棵呕蚧 顾徒宦畚牡闹街拾婧偷缱影妫 市砺畚谋徊樵暮徒柙模槐救耸谌ɡ贾荽笱Э梢越 狙 宦畚牡娜 炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥 菘饨 屑焖鳎 梢圆捎萌魏胃粗剖侄伪,婧突惚啾狙 宦畚摹,救死胄:蠓?怼?褂醚 宦畚幕蛴敫寐畚闹苯酉喙氐难 趼畚幕虺晒 保 谝皇鹈 ノ蝗匀晃 贾荽笱А?保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名:莲商选导师签名:之茳,【匕日期:堕:垒:,, 兰州大学硕士研究生学位论文 戊酸雌二醇(补佳乐)在体外受精一胚胎移植术 中作用的分子机制探讨 研究生李丽斐 导师张学红 摘 要 随着细胞生物学和分子生物学的发展，调控卵泡液中细胞因子对卵泡发育的作用，改善子宫内膜种植条件，使内膜与胚胎发育同步化成为当前生殖生理学研究 戊酸雌二醇(补佳乐)卜,个周的热点。近年来部分学者尝试给予外源性雌激素… 期，改善卵子成熟度，增加子宫内膜厚度，提高临床妊娠率，但分子作用机制不明确。卵泡的生长发育涉及颗粒细胞的增殖和分化，内在的自分泌,旁分泌生长因子和细胞因子，构成卵泡内环境，介导外部信号与卵泡细胞之间的作用，影响卵细胞的增殖、分裂和生存时间，对卵泡的早期生长发挥重要的调控作用。转化生长因子一,(,,,—,)是近年来发现的一种重要的细胞因子，属于表皮生长因子(,,,)超家族成员，在哺乳类动物组织中合成和释放，促进颗粒细胞增殖，对,,,诱导,,和,的合成起调节作用“。,,。根据患者卵巢基础状态，个体化应用补佳乐，对血清,和,无显著性影响，但是可以调控卵泡液,,,—,水平，提高卵子成熟度，改善子宫内膜种植条件，提高临床妊娠率。目的: 通过测定控制性超排卵周期(,,,)获得的卵泡液中,,,—,、雌二醇(,,)和孕酮 (,)的含量，其与血清性激素、子宫内膜厚度及卵子成熟度、受精率的关系，探讨补佳乐在体外受精胚胎移植(，,,—,,)术中的分子作用机制。方法: ,、随机选择,,,例签署知情同意书实施体外受精一胚胎移植患者。 ,、按照卵巢基础状态评分系统(我中，,,,,,年制定“,)分组，从,, ,开始给予不同剂量补佳乐:,组(,,例)补佳乐口服，,,,,同;,组(,,例)补佳乐口服，,,,,同;,组(,,例)未使用补佳乐。 ,、收集阴道,超引导下穿刺取卵获耿的卵泡液(,,)，置于干燥管中，,,,,,,,,,离心,,,,,后，取上清液保存于,,,微量离心管中， ,,。,冻存待测。 ,、取出卵子培养,,,,，行体外受精(，,,)或单精予卵胞浆内显微注射术(〔,,，)，胚胎培养第三天选择,,,枚优质胚胎移植，黄体支持使用黄体酮注射液，或加用,,,。 ,、采用放射免疫法检测卵泡液,,,—,、,:和,水平，比较三组间含量变化;分析不 兰州大学硕士研究生学位论文同剂量补佳乐对,,,注射日、取卵同及移植,血清性激素的影响;分析胚胎学各项观察指标;分析补佳乐的使用与临床妊娠率的关系。结果: ,、,组问血清,。、,、,，，卵率、受精率和卵裂率无显著性差异(,,,(,,);,,总量、,,天数、获卵率、胚胎种植率、卵泡液,,,—？有统计学差异(,,,(,,);卵泡液,。、,在,、,组间无差异(,,,(,,)、与,组比较有统计学差异(,,,(,,)。 ,、卵泡液,,,—, 与卵泡液,呈负相关，,一,(,,,(,,,(,,)，与移植日子宫内膜厚度:,,,相关，,,,(,,,(,,,(,,)，与卵泡液,:无直线相关性。 ,、使用补佳乐组患者妊娠率(,,(,,,，,,,,,,)与未使用补佳乐组妊娠率(,,(,,,，,,,,)无统计学差异(,,,(,,)，但呈《～萝增加趋势。结论: ,、,,同时应用补佳乐对血清,:和,无显著性影响;但卵泡液,,,—,水平升高，卵泡液,值降低，协调卵泡液,:,,比值。 ,、应用补佳乐能够改善卵子成熟度，增加子宫内膜厚度，提高胚胎种植率和，,,临床妊娠率。关键词 戊酸雌二醇补佳乐转化生长因子, 雌激素 孕激素体外受精 兰州大学硕士研究生学位论文 ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, (,,,,,,,,,, ,, ，,,?,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,, 〔,,,,,,;,〕,,,,;,,,,: ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,;,,,, ,,,,,,,,, ,, ，,,,,,(,,,,,,,: ,(,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,;,, ,, ，,,?,, ;,;,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,, ,,, ,(,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,( ,,,,, ,;;,,,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,,,,, ,;,,, ,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,, ,, ,,( ,(,,,,,;,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,;,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,。,( ,(，, ,,,,, ,,;,,, ,,,, ;,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,(,,,, ,,,,?, ,, ，,,，(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, , ,,,, ,,,,, ,,;,,, ,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,, ,,;,,,,,‟,,,,,,,,，,,,,,( ,(，, ,,,,,,, ,,,,,，,,,—,、,, ,,, , ,, ,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,，, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,, ;,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,;，, ,,,,,,,,，,,;,,,,,, ,,,,,,,;, ,,,,(,,,,,,,: ,，,,,嘶, ,,《多,,,,,,,,;,,, ,鼢,,;,, ,,??,;,,,， ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ;,,,,,,, ,,,,(,,,(,,)(,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,, ,, ,,;,,, ,,,,,,,,,，,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,,(,,,(,,)(,,, ,,,,, ,, ,, ,,, , ,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,, ,,,,, , ,,, ,，,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,,, , ,,,, ,, ,,,,,,,( ，, ,,,,,,。,，,,,一勘,,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,, , ,, ,,‟,,,,(,,,(,(,(,,)，,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,，,,,(,,,(,,,(,,)，,,, ,,, ,,;,,,,,,,,,, ,,,, ,,( ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,;, ,,,,，,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, , 兰州大学硕士研究生学位论文,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ;,,,,,,,,, ,,, ,, ,,;,,,,,(,,,;,,,,,，,,, ,, ,,,,,,;, ,,,: ，, ,,,，,,, ,,, ,, ,,,,,?,,,?三西。,,,,,, ,;;,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,,,, ,,,,,,(,, ,,,,,,, ,,，,, ;,, ,,,,,,, ,,;,,, ？,,,,,,，,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,;, ,,,,，,,, ,, ,,,,;, ,, ,,,,, ,,,,,,,(,,, ,,,,,:,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,, , 兰十,，,大学硕士研究生学位论文 刖 吾 辅助生殖技术(,,,)是一种对配子、胚胎或者基因物质体内外系统操作而获得新生命的高新技术，是人类生殖自我调控的新的里程碑。,,,,年世界第一例试管婴儿在英国诞生，成为医学和生物学史上„次伟大的革命。近二十年随着，,,—,,及其衍生技术的广泛应用，如何获得高质量、数目恰当的卵子，同时达到胚胎与子宫内膜同步化，获得良好的妊娠结局是目前众多研究者关注的焦点。一、卵泡发育的调控 生殖激素,,,、,,、,,和,是女性最重要的内分泌激素，广泛调节着众多靶组织，如生殖道、乳腺、骨骼及心血管系统的生长，发育和功能，也是调控卵泡发育所必需，与其他细胞因子相互影响，相互促进，系统地发挥作用。 卵泡的生长发育是体细胞和生殖细胞成熟分化的有序过程。一般而言，卵泡发育经历始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡，最终在垂体,,峰的作用下诱导成熟，排卵。下丘脑一垂体一卵巢轴是调控卵泡发育的关键。当始基卵泡进入生长轨道，在下丘脑,,,,多种因子的调控下，垂体前叶分泌促性腺激素,,,和,,，高亲和力结合卵巢表面特异性相关受体，优势卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞以持续的高有丝分裂率促进卵泡生长，合成甾体激素，诱导卵母细胞成熟。传统理论认为，人卵巢内从原始卵泡发育至成熟排卵仅需,,天，整个过程在同一月经周期内完成，近年来的研究揭示，原始卵泡发育通常需要跨越几个周期。在每个周期内，卵巢中有多个不同发育状况的卵泡，但其中只有一个能发育成较大的优势卵泡，绝大多数在发育的 不同阶段逐渐退化闭锁。 自然生理状态下，卵巢分泌的甾体激素进入血液循环或通过卵泡的基底膜进入颗粒细胞，反馈调节卵泡生长。雌激素在卵泡发育和胚胎种植中起重要作用。己经证实,:能够促进细胞分裂增殖，细胞问形成缝隙连接，增加雌激素受体，在多个水平与,,协同作用诱导,,,阳,,，,受体形成，增强芳香化酶活性“】，形成,:峰，通过正反馈使下丘脑,,,,脉冲频率增加，垂体对之高度敏感，分泌大量,,，触发,,峰值，卵泡成熟排卵。近成熟卵泡的卯泡液,:浓度为血循环的,,,,倍。,。研究表明这种自身放火效应在卵泡选择和优势卵泡确立中起主要作用。二、雌激素及其受体 体内雌激素包括雌二:醇、雌酮和雌三醇，其中以雌二醇的生物活性最高。,,的生 兰州大学硕士研究生学位论文物合成是由颗粒细胞和卵泡膜细胞协同完成，需要促性腺激素,,,和,,的参与，根据两细胞两促性腺激素学说，,,能够增强卵泡膜细胞合成雄激素，在,,,诱导的颗粒细胞芳香化酶的作用下，雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和,。，作用于靶组织，发挥生物学效应。 ,。的生物学活性主要是通过其特异性雌激素受体(,,)来完成的。近年来，随着分子生物学技术的发展及应用，关于,,的研究日益深入。最新研究发现，除了传统的,, ,以外，还有,, ,亚型，两者在,,,结合片段具有高度的同源性，但在不同组织细胞中表达分布不尽相同，产生不同的生理和病理作用“,。就目前研究所知，,,,与,, ,的生理作用各有侧重，利用基因敲除鼠实验表明，,,。主要在雌性生殖组织细胞的增殖和分化过程中起重要作用，而,, ,在卵泡发育，抑制细胞增殖方面发挥作用”,。研究证实卵母细胞内存在,,的表达，健康卵泡液中特征性的高,。水平可通过,, ,增强,,,的作用,,。 大量证据表明，,,与许多细胞信号转导通路发生相互作用。有学者发现,,一,缺失的,,变异体能够被,:激活，但不被多肽类激素(,,,或，,,—,)激活，提示,,对生长因子通路反应必须通过,,一,。突变实验进一步研究发现，,,区的,,,“,突变为,,,时，,,的,,一,不能被,,,等生长因子激活。体外实验证实，,,,通过与,,,,特异性结合，激活,,,,级联反应，使,,,“,磷酸化，导致,,活化，因此，,,,诱导,,,“,磷酸化以及由此导致的,,一,活化是,,转录激活的原因。与,,,相似，,,,—,、，,,一,等也属于，型酪氨酸激酶受体，已经生长因子是通过诱导,,,,级联反应，从而活化,,。 内源性,。对卵泡发育的调节除了通过,,，孕激素受体(,,)也起着重要作用。动物实验证实，,:能够使,,—,和,,—,的表达量发生变化，诱导大多数靶细胞,, ,,,,和其蛋白产物的表达，而此效应主要通过,, ？促进,,—,的表达增加完成，从而使,,,,,下降，与,,协同调节卵泡的生长发育。,。但是卵泡发育的不同结局提示卵泡生长除了受体作用途径以外，还包括卵巢局部肽类激素、生长因子、甾体激素、细胞因子等的交互，进而形成强大的调节网络发挥作用。 ,,多年前，,,一,,,,,等“”对卵泡发育过程中卵子的作用进行研究，结果表明:卵泡体外去除卵子将导致卵泡过早黄素化，血清,含量增加，进一步证实卵泡微环境细胞因子的存在。卵泡液包含一系列颗粒细胞和卵泡膜细胞分泌的卵巢内物质，增强或减，,日,,对卵泡的调节作用…,。研究发现牛卵泡液中存在,,,束，,激颗粒细胞,。合成的多种特异性抑制剂“…。已经证实，卵泡局部的白分泌,苑置谏 ひ蜃雍拖赴 蜃樱 芄唤榈?兰州大学硕士研究生学位论文外部信号与卵泡细胞之间的作用，形成卵母细胞、颗粒细胞和卵泡膜 细胞之间的应答，从而对卵泡的生长发挥重要的调节作用。最近研究发现，在各种细胞类型中存在直接的非遗传的类固醇影响，目标细胞在类同醇中暴露几分钟，各种信号转导途径就会被快速激活，离子通道打开，某些生化过程发生改变，影响基因的转录及蛋白质的合成。研究表明，卵母细胞质成熟过程中雌激素可能通过改变;,”释放系统，从而获得全能的,,,，信号波动”“。三、子宫内膜容受性与胚胎发育同步化 子宫内膜种植窗口开放的时间通常在排卵后,,,天，此时子宫内膜容受性最高，能够最大程度地容纳胚胎着床。形态学研究表明激素水平的高低、,,,注射日血清,:,,比值影响子宫内膜的发育，,。的缺乏导致内膜成熟延迟，容受性降低，因而合理的,。,,比值对于获得良好的，,,临床结局是必需的。 雌激素和孕激素时间性的相互作用是调节子宫内膜发育的重要因素。卵泡期雌激素促进子宫内膜增殖、生长，排卵后黄体合成的孕激素促进内膜腺体分泌、间质细胞增殖和蜕膜样改变，为胚胎着床做好准备。研究发现，小剂量雌激素能够使宫腔上皮接受和传递胚泡给予内膜的信息，在此基础上，孕激素促使内膜基质细胞发生蜕膜反应，两者在含量和作用时间上的变化，能够改变内膜的敏感性。,,缶床上应用大剂量雌激素促使输卵管峡部收缩，延缓受精卵进入子宫，使其与内膜发育不同步，干扰着床，因此内膜与胚胎发育的同步化是完成着床的关键“…。 应用,,—,,,年,,免疫组织化学方法在动物实验中发现，子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞存在特异性雌激素和孕激素受体。生理状念下，雌激素一受体复合物能够诱导,,合成表达，协调改善子宫内膜微环境，为胚胎着床提供物质基础。研究认为，,,;,,,,是子宫容受性的分子标志物，子宫内膜,,和,,的异常表达影响内膜的合成和分泌功能，降低内膜容受性，导致胚胎着床障碍和流产。，,,—,,过程中，应用促排卵药物雌激素水平异常升高，孕激素相对不足，内源性激素比值失衡，,,和,,提前下降，干扰种植窗子宫内膜的形态和功能，影响胚胎着床“…。,,,〔,,,,,,,,等“”研究发现，光镜下正常妇女种植窗期子宫内膜腺体粗大，弯曲，问质细胞增生，核仁明显，螺旋小动脉丰富，腺体和间质发育同步，超排卵治疗后子宫内膜腺体细胞和问质细胞线粒体、内质网和微管系统发育不良，子宫内膜提前成熟，种植窗提前开放和关闭，内膜形态缺陷。 雌孕激素并不是着床过程的终术调节因予，作为上游调节因素，雌孕激素能够通 兰州大学硕士研究生学位论文过周期性调节着床局部下游分子的表达，如白血病抑制因子、集落刺激因子、胰岛素样生长因子等着床所必需的细胞因予，在种植窗开放的时间内，诱导内膜发生一系列生理和生化改变，细胞,,,和,,,合成增加，许多酶系统活性增加，以自分泌或旁分泌方式参与着床前子宫内膜上皮细胞的分化和基质细胞的增殖，促进胚胎生长发育，与整合素等黏附分子平衡调控，相互作用，共同介导胚胎着床过程。雌孕激素比值失衡，影响子宫内膜相关分子的表达，容受性建立缺陷，因而导致着床失败。 补佳乐(戊酸雌二醇片)是临床较为常用的一种外源性雌激素，是人体天然雌激素,, ,,雌二醇的前体，口服吸收迅速，首次通过肝脏的过程中，类固醇酯分解为,:和戊酸，在体内遵循内源性,:的生物转化途径。药物动力学观察，血清平均浓度在,,,,,,,,,,,,,,,之问，停药后,,,天，,。恢复到治疗前水平，用于改善雌激素缺乏等症状。 近年来有学者尝试在,,,治疗中，根据患者卵巢基础状态给予补佳乐卜,个周期，改善卵子成熟度，增加子宫内膜厚度，提高妊娠率，但是临床观察发现这种变化与循环中高水平,。无显著相关性， 应用补佳乐后调控网络细胞因子的表达是否发生改变，作用机制亟待研究。 ,三、,,,,,的研究 ,,,,年，,,,;,和,,,,,,发现肉瘤逆转录病毒转化的小鼠纤维细胞能分泌一种多肽分子，当时称为肉瘤生长因子，因其具有诱导静止性生长的细胞呈非静止性生长，产生可逆性转化表型的特性，故将这些多肽类物质称为“转化生长因子”。,,,,,观察到化学转化的小鼠,,,一,,细胞产生的是两种因子，因而分别命名为,,,—,和,,,一,,，此外，化学致癌剂和癌基因、转化细胞以及人肿瘤细胞系的条件培养基中也分离到相似的多肽。,,,—,与,,,一,无任何结构上的联系，两者具有不同的生理作用。 ,(,,,—,的基因结构 人,,,—,基因位于第,号染色体，含有,个外显子和,个内含子，长约,,,,,,,,，编码,,,—,的,,,,长约,(,,,(,,,。成熟,,,—,是一种,,个氨基酸残基组成的单链多肽类因子，属于表皮生长因子(,,,)家族成员，分子量在,,,,,,之间，是由,,,个氨基酸的跨膜糖蛋白酶裂解形成的成熟细胞因子。 完整的,,, ,包括胞外区、疏水跨膜区和胞内区结构。胞外区山,,个氨基酸的信号肽序列、,,或,,个氨基酸组成的含糖基化位点的前区序列以及,,个氨基酸构成的 兰州大学硕士研究生学位论文,,,样序列三部分组成，,末端信号肽序列与糖基化位点之问有裂解点，即近糖基化位点远端第,,、,,和,,位氨基酸残基。人,,,—,起始于,一末端,,,,,位残基，终止于,,,,,位残基，分子中含有,个半胱氨基酸，形成,个二硫键，是与,,,,结合的主要结构。疏水跨膜区含,,个氨基酸，在疏水区的两侧有成对的碱性氨基酸结构，通常是肽类激素水解的位点。胞内区则由富含,个半胱氨基酸的,,个氨基酸组成，与软脂酸共价结合，吸附在内质网膜上。棕榈酸侧链通过羟胺敏感的疏酯键与第,,,、,,,位半胱氨酸相连，介导胞浆内相关蛋白的相互作用〔,,,,,〕。 成熟的,,,—,在内质网腔面、高尔基体中被加工、处理、糖基化修饰，在类弹性蛋白酶的作用下，从第,,,,,位氨基酸残基或第,,,,,位残基问切断，形成中间型,,,—,，再经蛋白酶水解,,,,,位氨基酸残基间肽键，切除信号肽及位点糖基化，释放出成熟的,,,—,。由于不同分子在膜外结构域的不同位点被酶切以及分子糖基化反应不同，故分子量大小差异较大。研究表明佛波酯、天然血清因子、钙离子载体以及低剂量的紫外线照射等外界因素都可以促进这一转换过程，,,,—,自身也可通过正反馈途径增强酶解作用，使成熟型,,,—,释放增加“…。 成熟的,,,—,耐酸、耐热，对胰蛋白酶敏感，在一级结构上与,,,具有,,(,,,,,(,,的同源性，核磁共振显示,,, ,的二级结构肽分子中有许多,片层和,转角，是维持,个二硫键结构的稳定以及与,,,受体结合的分子基础。 ,(,,,—,，在女性生殖系统的分布 已有的资料表明:,,,—,广泛存在于人和啮齿类动物的癌细胞、转化细胞及胚胎和少数『,常组织细胞(上皮细胞、激活的巨噬细胞)，具有较强的促进细胞,,,合成的功能，与肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞增殖、分化和凋亡有关，并在正常组织中起着非常重要的生长调节作用。 体外实验证实:,,,—,通过介导雌激素作用，影响输卵管的形态学和生物学功能，同时以旁分泌的方式对早期胚胎的生长发育和转运起着重要作用。应用免疫组化及放射技术，发现,,,—,定位于人输卵管的上皮细胞，在基质细胞、平滑肌细胞、浆膜组织成纤维细胞以及动脉血管内皮细胞等均呈阳性反应，并且表达呈周期特异性”…，提示,,,—,的表 达受卵巢类固醇激素的调节。此外，输卵管上皮,,,,的表达与特异性的月经周期及,的诱导相关，从而协同完成,,,—,的生物学功能”“。 研究表明，,,,—,在子宫内膜的表达主要分布在内膜腔上皮和腺上皮以及腺周基 兰州大学硕士研究生学位论文质。卵泡早期,,,—, ,,,,平,蛋白在子宫内表达量较低，卵泡晚期和黄体期表达量明显上升，并且随体内雌激素水平的变化而变化”“。,,,,,,等给出生,,天的雌性小鼠按,,,,,,,,注射成熟的,,,—,，于第,,天收集子宫腔内液体，用放免法测定,, ,—,,和,,,—,，结果发现,,,—,在促进雌激素的合成和子宫发育过程中起着重要作用，同时另一实验组给雌性小鼠注射小剂量的抗,,,一?抗体，中和体内有活性的,,, ,，小鼠的子宫发育受到抑制。文献报道:,。和,联合能够诱导子宫内膜细胞增殖，尤其是,。能够促进,,,—,及,,,,的表达，同时诱导,,的表达，调节细胞分化。“。 ,,,—,作为一种着床前表达的胚胎信号，诱发母体蜕膜反应，影响子宫内膜对胚胎着床的接受性，有学者试验宫腔内注射,,,,,,,,,,—,，能够使,,,摘除卵巢以孕酮维持的延缓着床的大鼠发生着床。此外，妊娠期间，胎盘和蜕膜组织中均有,,, ,表达，主要位于蜕膜细胞、腺上皮细胞和绒毛膜滋养层细胞，介导母体血液循环，在整个胚胎发育过程中起着重要的调节作用。 近年来，通过采用免疫组化、原位杂交方法检测发现:在卵泡的生长、退化和闭锁过程中均存在,,,—,的细胞定位及表达。始基卵泡阶段，卵母细胞,,,—,表达 ,表达逐渐减弱，颗粒细胞及卵泡膜细呈强阳性，随着卵泡的发育成熟，,,,— 胞表达阳性并进一步增强，排卵前卵泡细胞表达开始下降，持续至黄体中期”,,“。,,,,, ,试验表明，凋亡卵泡的颗粒细胞中无,,,—,活性的表达，但卵泡膜细胞持续存在。…，提示卵巢局部,,,—,水平异常不利于卵泡『,常发育，能够导致生长或排卵障碍。对,,,,大鼠卵巢超微结构观察表明卵巢合成蛋白质及甾体激素的功能旺盛，推测卵巢,,,—,和,,,,的表达增加，因而,,,—,在,,,,大鼠中的作用可能是增强的”“。目前已经发现在一些多囊卵巢患者，局部,,, ,,,,表达异常。…。 ,(,,,一。细胞增生的作用机制 近年来关于,,,一?在体内促进细胞增殖的作用机制的研究同益深入。江侃等“”通过检测,,,,的表达变化发现:,,,—,能够促进细胞,,,合成，推动细胞由,,,,,期进入,期，从而使细胞增殖，其调节细胞增生的机制可能是通过诱导靶细胞产生早期生长反应蛋白,,，结合;,;,,,,,启动子的顺式调节区，增强;,;,,,,,转录，协同细胞核内与分裂相关的原癌基因(;一,,,，;—,,;)和其它细胞周期素“…，促使靶细胞从,,期进入,期„““，从而刺激细胞增殖。此外，也有文献认为,,,—,是通过某些机制使,,期细胞重返细胞周期，从而促进细胞增殖。”,。因此，大量研究表明，肿瘤形成与,,,—,的不适当或过高表达、 ,, 兰州大学硕士研究生学位论.