三种淋球菌培养基分离效果对比分析

=作者简介 >雍刚 ( 1964-) ,男, 四川广元人,副研究员, 本科, 从事性病实 验诊断工作。 论著 三种淋球菌培养基分离效果对比分析 雍 刚, 杨 曦,廖巫山,喻林冲, 麦 涛,王有为 (四川省皮肤病性病研究所中心实验室, 四川 成都 610031) =摘要> 目的 评价新型淋球菌培养基的分离效果。方法 将我院研制的新型淋球菌培养基 (实验组 )与英国的 Oxo id公司生产的 TM培养基 ( TM组 )、国产 MTM培养基 (MTM组 )对 20株淋球菌进行分离培养对比分析。结果 实验 组菌落数最多, 18、24小时与其它两组之间的差异有显著性意义 (P < 01 05), 36、48小时与 TM 组之间的差异有显著性 意义 (P < 01 05); 实验组、TM组和 MTM组内 18小时与 24小时菌落数差异有显著性意义 (P < 01 05)。MTM组 24小时 与 36小时菌落数差异也有显著性意义 (P < 01 05) ); 18小时 TM组菌落较小, 与其它两组比较差异有显著性意义 (P < 0105)。24小时 TM组菌落较小,与 MTM组比较差异有显著性意义 (P < 01 05)。 36小时实验组菌落较小, 与其它两组 比较差异有显著性意义 (P < 01 05)。 48小时实验组菌落较小,与 MTM组比较差异有显著性意义 (P < 0105); 3组菌落 大小均随时间增长而增大, 各时间段间菌落大小的差异有显著性意义 (P < 0105)。结论 新型淋球菌选择培养基分离 淋球菌具有经济、简便、灵敏度高等优点, 是一种较理想的培养基。 =关键词> 新型淋球菌培养基; TM培养基; MTM培养基; 淋球菌 =中图分类号> R44615; R3781 16 =文献标识码> A =文章编号> 1672-6170( 2008) 02-0046-02 Contrastive analysis of isolating effect of three gonococcus culturem edium YONG Gang, YANG X i, LIAO Wu-shan, et al. (Cen tral Labora tory of Dermatogic and VenerealD iseases of S ichuan Prov ince, Chengdu 610072, Ch ina) =Abstrac t> Object ive To determ ine the effect o f iso lating N1 gonococcus by a new sty le se lectivem edium1 M ethods The new sty le m ed ium m ade by our hospita l ( exper im enta l g roup) togethe rw ith Oxo id. s TM se lec tivem edium ( TM group) and dom estic-m adeMTM se lectivem edium (MTM group) we re applied to cultur ing 20 stra ins of N1 gonococcus1 Resu lts The exper- im enta l group wh ich show ed sign ificant d ifference w ith o ther two groups at 18h and 24h, and w ith TM at 36h and 48h(P < 0105) had m ore co lon ies1 Each m edium had sign ifican t d ifference betw een 18h and 24h(P < 01 05) in colony count1 The dom es- tic-m adeMTM a lso had sign ificant difference between 24h and 36h(P < 01 05) in co lony count1 There w as sign ifican t d ifference be tw een TM group and the othe r tw o g roups at 18h and betw een TM and dom estic-m adeMTM at 24h(P < 01 05) 1 There was a-l so significant d ifference between experim enta l g roup and the othe r two groups at 36h and betw een expe rim en tal g roup andMTM group at 48h P < 0105) 1 The co lony size g rew w ith tim e in each cu lture medium, and therew as s ignificant d ifference betw een any tw o groups(P < 0105)1 Conc lusion The resu lts ind ica te that the new sty le culturem edium has advantages o f economy, convenience and h igh sensitiv ity and is an idea l cu lture med ium fo r iso lating gonococcus1 =K ey words> New sty le gonococcus med ium; TM m ed ium; MTM m ed ium; Gonococcus 淋球菌是人类生殖器、泌尿道化脓性感染的常见病 原体。培养法一直是诊断淋病的金, 但其培养要求 很高, 多依赖进口培养基, 虽然阳性大大提高, 但定货费 时,价格昂贵。我国性病防治中心推荐使用的桂敏和 GC培养基各有利弊, 不适合在基层推广。因此, 国内 外学者对淋球菌培养基做了很多研究, 取得了一定成 果,但并不是十分满意。为适应性病防治的需要, 我院 2006~ 2007年研制新型淋球菌培养基, 使淋球菌的检 测更简便、经济、有效,现报道如下。 1 与方法 111 材料 ¹ TM 培养基: 英国 Ox iod公司产品, 按说 明配制; º 淋球菌 MTM 选择培养基: 深圳黑马生物 技术有限公司产品; » 新型淋球菌培养基: 蛋白胨 115%, 玉米淀粉 011%, K2HPO4 014% , KH2 PO4 011%, N acl 015% ,琼脂 1%溶解于蒸馏水, 121 e 高压灭菌 15 分钟后,冷却至 60 e 左右,无菌操作按比例加入适当的 46 实用医院临床杂志 2008年 3月第 5卷第 2期 营养成分和抑菌剂,充分混匀后倾入一次性平皿。 4 e 冰箱保存备用,接种前于孵箱预热。 112 方法 11211 淋球菌菌株的制备 肉汤保存法 [ 1 ]保存淋球 菌菌株,复苏其中 20株淋球菌, 于库存菌株保存管中直 接挑取冰冻菌液,接种用无抑菌剂的 TM培养基, 35 e CO2孵箱培养 24小时。 11212 菌株接种 分别挑取淋球菌单个菌落于生理盐 水,配成 015麦氏单位浓度 (相当于 115 @ 108 cfu /m l) 菌悬液,依次 10倍稀释至 104倍, 分别吸取 10 LL菌悬 液于 3种培养基, 并用接种环划线使其分布均匀。 35 e CO2孵箱培养。平行测定 20株菌。 11213 分离效果观察 分别在 18、24、36、48小时观察 淋球菌在 3种培养基上的生长情况, 计数培养基上的单 个菌落数,并测量菌落的直径; 113 统计学方法 本实验数据为随机区组设计类型, 采用 SPSS1110统计软件进行方差分析。 2 结果 211 3种淋球菌培养基不同时间菌落数比较 同一组 内不同时间菌落数比较,实验组 F = 9561861, TM组 F = 5611448, MTM组 F = 2471982,均 P < 0105。同一 时间 3组菌落数比较,见 1。 表 1 3种淋球菌培养基不同时间菌落数比较 (个 ) 培养基 18h 24h 36h 48h 实验组 62 ? 3 78 ? 2* 81 ? 3 81 ? 3 TM组 48 ? 4v 64 ? 2* v 75 ? 3o v 75 ? 3v MTM组 54 ? 3v 69 ? 3* v 78 ? 2o 78 ? 2 F 81042 61270 51731 51369 P < 0105 < 0105 < 0105 < 0105 * 与 18 h比较, P < 0105; o 与 24 h比较, P < 0105; v与实验组比 较, P < 0105 212 3种淋球菌培养基不同时间菌落大小比较 同一 组内不同时间菌落大小比较, 实验组 F = 481901, TM 组 F = 392161, MTM组 F = 15115, 均 P < 0105。同 一时间 3组菌落大小比较, 见表 2。 表 2 3种淋球菌培养基不同时间菌落大小比较 (mm ) 培养基 18h 24h 36h 48h 实验组 0125? 0111 0153 ? 0115* 1113 ? 0113o 1150? 0117m TM组 0119 ? 0111v 0142 ? 0118* 1135? 0122o v 1170? 0130m MTM 组 0125? 0112 0160 ? 0117* 1152? 0122o v 11 84 ? 0121m v F 111196 131 905 471113 361824 P < 0105 < 0105 < 0105 < 0105 * 与 18 h比较,P < 0105; o 与 24 h比较, P < 0105; m 与 36 h比较, P < 0105; v与实验组比较, P < 0105 3 讨论 诊断淋病目前有多种较先进的方法, 如 ELISA法、 荧光抗体法、基因探针 [ 2]及分子杂交法等 [ 2, 3] , 特异性 较高, 但假阳性高,价格昂贵,不适合基层的推广。培养 法在当今仍是淋病确诊的金标准, 关键是要有一种好 的、合适的培养基。国内曾有数篇关于淋菌培养基研制 报道, 如巧克力色培养基, 其成本低廉,但对淋球菌分离 培养的效果不理想,检出率仅为 50% ~ 60%; LB培养 基和桂敏培养基 [ 4] ,其淋球菌检出率仅 80% ~ 90% ,仍 然存在 10% ~ 20%的漏检。国外有名的培养基也有一 些不尽人意的地方, 新型淋球菌培养基富含丰富氨基酸 及加入了特殊增菌剂,具有吸附部分毒素, 形成有利于 淋球菌的生长的培养环境有关。新型淋球菌选择培养 基不仅能克服以上所述的缺点, 又能保证分离培养效 果,分离淋球菌具有经济、简便、灵敏度高等优点, 是一 种较理想的培养基。 本实验结果表明,新型淋球菌选择培养基的灵敏度 要高于 TM和 MTM选择培养基, 在 18、24小时与其它 两组具有显著性差异。实验结果还显示, 在培养 24 ~ 48小时后,新型淋球菌培养基上淋球菌菌落数仅与 TM 具有显著性差异, 同 MTM 选择培养基无差异; 24小时 前新型淋球菌培养基上淋球菌菌落直径较大, 同 TM培 养基、MTM选择培养基上的淋球菌菌落相比,有显著差 异。24~ 48小时培养时间段内, 新型淋球菌培养基上 淋球菌菌落直径相对较小, 同 TM培养基无显著差异; 同 MTM选择培养基上的淋球菌菌落相比, 仍存在显著 差异。菌落直径的大小,在一定程度上与细菌的生长速 度有一定关系。结合实验结果推测,接种于新型淋球菌 培养基上的淋球菌的生长速度快于另外两种培养基。 由于 MTM选择培养基上的淋球菌生长速度较慢,导致 一些微小淋球菌菌落在增殖 24~ 48小时后,才逐渐形 成肉眼可见的菌落, 表现为 MTM选择培养基上菌落数 有所增加。这也解释了在培养 24 ~ 48小时,新型淋球 菌培养基上淋球菌菌落数同 MTM 选择培养基无差异 的现象。 通过培养法进行淋病诊断时,希望可以在尽可能短 的时间内作出准确的诊断,培养基上淋球菌的增殖速度 至关重要。新型淋球菌培养基接种淋球菌培养 24小 时,其菌落大小为 0153 mm,肉眼完全可以分辨,且其菌 落数在 24~ 48小时均无差异。说明接种于新型淋球菌 培养基上的有活力的淋球菌在培养 24小时后均可以形 成肉眼可见的菌落, 达到诊断目的。 =参考文献 > [ 1] 宋矿余,罗军, 余克花,等 1肉汤保存法用于淋球菌保种的研究及效 果观察 [ J]1江西医学院学报, 2004, 44( 4 ) : 101-1031 [ 2] 丛佩青 1LB培养基分离法检测淋球菌的探讨 [ J]1中华临床医学研 究杂志, 2007, 13( 4) : 5521 [ 3] 任万明,高军 1两种检测淋球菌的方法比较 [ J]1中国现代实用医学 杂志, 2004, 3 ( 5) : 68-691 [ 4] 张宁,邓艳,陆洪光 1LB和桂敏培养基分离培养淋球菌比较研究 [ J] .贵阳医学院学报, 2000, 25 ( 4) : 4111 (收稿日期: 2007-11-13 ) 47 实用医院临床杂志 2008年 3月第 5卷第 2期