丁香酚体外抑菌作用研究

1222008，V01．29，No．09 食品科学 ※基础研究 丁香酚体外抑菌作用研究 吕世明1,2，陈杖榴¨，陈建新1，邱电1，李春梅- (1．华南农业大学兽医学院，广东广州 510642：2．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025) 擅要：应用微量稀释法对丁香酚体外抑菌活性进行了研究。结果表明，丁香酚对12种常见细菌具有较好的抑菌 作用，其中对大肠杆菌ATCC25922(ffJ日控菌)的效果最好，其最低抑菌浓度(Ⅷc)、最低杀菌浓度@毋c)分别为5pg／ml 和l舢g^m；对蜡状芽孢杆菌作用较差，MIC和MBC分别为32虮g／ml和640pg／ml：其余菌株的MIC和MBC分别在 20～80ttg／m1和4肛16叽g／m1之间。而时间．杀菌曲线法实验结果表明，丁香酚抑茵作用特性表现为较强的浓度依赖 性，其良好的抑菌活性可作为潜在的天然食品防腐剂进一步研究和开发。 关键词：丁香酚；MIC；MBC；时间．杀菌曲线 studyonAntibacterialActivityofEugenolinvitro LOShi．ming*a，CHENZhang．1iuI，·，CHENJan．xinl，QiuDianI，LIChun．meiI (1．CollegeofVeterinary，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China； 2．CollegeofAnimalScience，GuizhouUnivesity，Guiyang550025，China) Abstract：Theantibacterialactivitiesofeugenolinvitroto12kindsofbacteriaWCl"etestedbymicro-volumebrothdilution method,respectively．TheresultsshowedthattheeugenolpossessesthehighestantibacterialactivityagainstE．coliATCC259 22(MICis5pg／mlandMBCis10lxg／m1)andthelowestantibacterialBacilluscirculans(Mmis320gg／mlandMBCis640p∥ m1)，andtheMlCsandMBCsofotherbacteriaarcbetween20I．tg／mland8099／mlandbctween4099／mlandl脚gmt,respectively． Thetime-bactericidecurveindicatedthattheantibacterialactivityofeugenolshowss订ongconcentrationdependentandslight timedependent．Theeugenolwithhighantibacterialpropertyisworthytoberesearchedasasortofpotentialnatural preservativesubstance． Keywords：eugenohMIC；MBC；time．bacterioeidecurve 中图分类号：Q946．85 文献标识码：A 文章编号：1002．6630(2008)09．0122-03 目前植物源性食品防腐剂由于其纯天然、毒副作用 小，在国内外受到广泛的关注。丁香在我国的使用已经 有很长的历史。其挥发油主要成分一丁香酚(4．烯丙基．2． 甲氧基苯酚，engen01)具有较强的抑制细菌真菌作用【卜3】， 并且在100℃以内对热稳定，因而可用作食品防腐保 鲜。食品中可能存在的污染菌种类较多，对环境的抵 抗力也不相同，目前尚未见有关丁香酚对多种致病菌的 MIC和MBC测定报道。本实验测定了丁香酚对金色葡 萄球菌、溶血性链球菌、李氏特菌、伤寒杆菌、痢 疾杆菌等12种细菌的体外MIC、MBC及其抑菌特点。 1 与 1．1 材料与试剂 1．1．1 菌种 金色葡萄球菌(Staph，，lococcusaureus)ATCC6538、溶 血性链球菌(Streptococcushaemol-yticus)NICPBP32210、 单核增生李氏特菌(Listeriamonocytogenes)NICPBP54002、 鼠伤寒杆菌(Salmonellatyphimurium)NICPBP50115、志 贺痢疾杆菌(Shigellaedysenteriau)NICPBP51252、铜绿 假单孢杆菌(Pseudomonasaeruginos)ATCC9027等购于广 州微生物研究所；大肠杆菌(E．coli)ATCC25922购于中国 兽药监察所；都柏林沙门氏菌(Salmonelladublin)、猪 霍乱沙门氏菌(Salmonellacholeraesuis)、猪链球菌 (Streptococcussuis)、蜡状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、 大肠杆菌(E．coli)054华南农业大学兽医学院药理教研室。 1．1．2 试剂 收稿日期：2008．06．29 基金项目：广东省重点实验室建设资金资助项目 作者简介：吕世N(1963．)，男，副教授，主要从事兽医药理学及毒理学研究。E-mail：lvlvsm@163．corn 。通讯作者：陈杖榴(1937一)，男，教授，主要从事兽医药理学研究。E．mail：zhlchen@scau．edu．cn 万方数据 ※基础研究 良晶科学 2008，V01．29，No．09123 丁香酚(含量98％，批号200306091)广州中南药 业公司；MH肉汤(批号2004061621)、MH琼脂(批号 2004050331)、脑心浸汤(BHI)(批号2004062371)杭州天 和微生物研究所。 1．2 方法 1．2．1 菌种活化 从相应细菌的斜面培养基上挑起一环细菌，接种于 相应肉汤中，标记，37℃，180r／min，培养12h，计数， 备用。 1．2．2 丁香酚的乳化 精确称取丁香酚，先加入少量无水乙醇，再加入吐 温．20和水(吐温和乙醇含量不超过0．5％)，超声乳化、 定容、再次超声乳化。 ． 1．2．3 MIC的测定 按微量稀释法⋯测定。 1．2．4 MBC的测定 用多点接种器从已观察MIC结果的微孔板上沾取培养 液，接种于无药MH琼脂或脑心浸汤琼脂平板上，37℃ 培养24h(链球菌培养48h)，观察结果。以无细菌生长 的最低浓度为细菌的MBC值。 1．2．5 丁香酚对鼠伤寒杆菌、福氏志贺杆菌的时间．杀 菌曲线测定 参照文献[5】方法。 2 结果与 2．1 丁香酚对12株菌的MIC和MBC值 丁香酚对12种细菌均有较好的作用，其中对质控 菌大肠杆菌ATCC25922的效果最好，MIC、MBC分别 为5pg／ml和10ug／ml；对蜡状芽孢杆菌的作用最弱， MIC、MBC分别为320“g／ml和6401xg／ml：其次是铜绿 假单孢杆菌，MIC和MBC为320p．g／ml：而对多数菌的 MIC则处在20～801xg／ml之间。具体结果如表1所示。 J 表1丁香酚对12种细菌的MIC和MBC值 Tsble1 MICandMBCofeugenolto12kindsofbacteria 细菌 舢Mg／ImlC)mMg／BmCl) 细菌 mMg／ImlC)mMg／BInlC) 2．2 丁香酚的时间．杀菌曲线的测定 丁香酚浓度为0．5MIC时，对鼠伤寒杆菌和福氏志 贺杆菌的抑制作用较弱；浓度为lMIC时细菌生长受到 抑制，细菌的数量随时间的延长出现先缓慢上升，再 缓慢下降而降低，但在以上浓度时，抑菌作用并不随 时间的延长而增强；当浓度超过lMIC，则表现出杀菌 作用；4MIC下在4h内将细菌全部杀灭，因此，丁香 酚体外抑菌作用表现为较强的浓度依赖性和较低的时间 依赖性，结果见表2、3。 表2不同浓度丁香酚对鼠伤寒杆菌生长的影响 Table2 GrowthinhibitionofS．typhimuriumunderdifferent concentrationsofeugenol 表3不同浓度丁香酚对福氏志贺杆菌生长的影响 Table3 GrowthinhibitionofS．dysenteriauunderdifferent concentrationsofeugenol 3 讨论与结论 3．1 具有抗菌作用的植物药在抗生素发现以前已有了 很长的使用历史，其中的香精油(有气味挥发性的植物 二级代谢产物)的抗微生物特性早在几个世纪以前已为人 们所认识，并被广泛应用于民间医药、食品调味剂和 保藏剂及香精工业。随着人们对药物在食品中残留的危 害有了更深的认识，从植物中寻找毒副作用小、安全、 不易在食品中产生有毒残留的天然保鲜剂，已成为新的 研究热点。丁香酚的资源丰富，生产成本低，并对多 种微生物有较好的抑制作用，因此是一种潜在的、很 有前途的食品添加剂。 3．2 丁香酚对金黄色葡萄球菌等12种细菌具有较好的 抗菌作用，以对大肠杆菌ATCC25922(质控菌)的MIC (5pg／m1)来看，其作用强度与氯霉素(2～81ag／m1)、氨苄 西林(2～81ag／m1)和头孢噻吩(4～16I_tg／m1)相近：而比磺胺 异嗯唑(8～32肛g／m1)好。结果比王浴生【6】报道l：2000～ 8000(约135～542¨g／m1)要好：蜡状芽孢杆菌可形成芽 孢，丁香酚为有机酚类，其杀菌作用可能是作用于细 菌细胞膜上的脂质和蛋白质【7J，使之发生变性而发挥抗 万方数据 1242008,V—oL29,No．09 食品科孛 ※基础研究 菌作用的。因此， 和MBC最高。 丁香酚对芽孢的作用较弱，其MIC 参考文献： 3．3 对福氏志贺杆菌和鼠伤寒杆菌杀菌活性的测定结 果表明，高浓度的丁香酚具有较强的杀菌作用，呈现 较强的浓度依赖性和较弱的时间依赖性，因此，应用 丁香酚作为食品防腐保鲜剂使用时，应注意使用浓度， 只有达到2MIC以上浓度时才能发挥相应作用。此特性 未见相关报道。 尽管丁香酚具有较好的抗菌效果，但其香味可对产 品的口感产生一定的影响，从而限制了其应用的范围， 如何保持其抑菌活性，降低其气味，以扩大其应用还 需作进一步研究。 【l】 周建新，许华，金浩，等．丁香油抑菌效果与抑菌成分的研究【_I】．食 品工业。20000)：24-25． 【2】 张海龙，向东．KHFS-ZN纳米抗菌剂丁香酚粘同粉的抑菌实验研究 【J】．河南医药信息，2002，lo(18)：32-35． 【3】 宋军。李晶，付庆祥．丁香酚酊治疗浅部真菌病疗效观察【J】，中国皮 肤性病学杂志，1999，13(1)：52-55． 【4】 倪语星，洪秀华．细菌耐药性检测与抗感染治疗[嗍．北京：人民军医 出版枕2004：98-103． 嘲 徐叔云，汴如濂．药理实验方法学【M】．北京：人民卫生出版社，2002： 667．670． 【叼 王浴生．中药药理与应用[M】．北京：人民卫生出版社，1998：234-236． 【刀 李巧如，刘宗智，任健康，等．丁香酚提取物抗菌机理的探讨【J】．西 北药学杂志，2001，l“6)：34．37． 万方数据 丁香酚体外抑菌作用研究 作者： 吕世明， 陈杖榴， 陈建新， 邱电， 李春梅， LV Shi-ming， CHEN Zhang-liu， CHEN Jan-xin， Qiu Dian， LI Chun-mei 作者单位： 吕世明,LV Shi-ming(华南农业大学兽医学院,广东,广州,510642;贵州大学动物科学学院,贵 州,贵阳,550025)， 陈杖榴,陈建新,邱电,李春梅,CHEN Zhang-liu,CHEN Jan-xin,Qiu Dian,LI Chun-mei(华南农业大学兽医学院,广东,广州,510642) 刊名： 食品科学 英文刊名： FOOD SCIENCE 年，卷(期)： 2008,29(9) 参考文献(7条) 1.李巧如;刘宗智;任健康 丁香酚提取物抗菌机理的探讨[期刊]-西北药学杂志 2001(06) 2.王浴生 中药药理与应用 1998 3.徐叔云;汴如濂 药理实验方法学 2002 4.倪语星;洪秀华 细菌耐药性检测与抗感染治疗 2004 5.宋军;李晶;付庆祥 丁香酚酊治疗浅部真菌病疗效观察 1999(01) 6.张海龙;向东 KHFS-ZN纳米抗菌剂丁香酚粘固粉的抑菌实验研究 2002(18) 7.周建新;许华;金浩 丁香油抑菌效果与抑菌成分的研究[期刊论文]-食品工业 2000(03) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_spkx200809021.aspx