冰鲜家禽中弯曲菌检验的探讨

Food Science and Technoloaw No．3．20DD 2000年第三期爱磕 一 I r 冰鲜家禽中弯曲茵检验的探讨 许龙岩 (广州出入境检验检疫局食品检验室 摘要：近年来发现弯曲茸与诸多疲病有关．因 此．对食品中弯曲茵的检验越来越受到许 多国家 和部门的重视。在各类食品中，我们认为冰鲜家禽 受弯曲茸污染的可能性较高，并从冰鲜家禽的皮 肤、口腔、腹腔等部位分离出了鲒肠弯曲茵、海鸥 弯曲茵和空晒弯曲茵。采用自动酶联免疫分析仪 (Vidas)和 Api快速筛选和鉴定．着重分析讨论了 检剥过程中遇到的多种问题。 关键词：弯曲茵；检验；冰鲜家禽 0前言 匐i 四日 危 丰j 随着冰鲜家禽在市场上的流通和出口的增加，冰鲜家 禽中弯曲菌的检验越来越受到人们的重视。弯曲菌作为家 畜疾病的病原体陈引起多种动物的腹泻外，还可致不育、败 血症和禽类的传染性肝炎等 。有报道提出空肠弯曲菌引 起人的集体食物中毒 ，幽门弯曲菌和海鸥弯曲菌等也与 人的感染症有关的报道⋯。因此，有些国家把弯曲菌作为食 品卫生法定检测项目．一旦在熟食品中发现弯曲菌为阳性 则作不符合人类使用处理 l，但我国很少关于冰鲜家禽弯 曲苗检验的报道。弯曲菌是形态细长，S形或海鸥状，大小为 1．5～2．00,m×0 2～0．50,m微需氧的革兰 氏阴性菌 】。目 前，我国弯曲菌的检验多是利用Skirrows、Campy B．A．P、 Butzer等培养基进行检验 ，未曾有用荧光酶标免疫分析 仪(Vidas)检验弯曲菌的报道。本文利用自动荧光酶标免疫 分析仪从冰鲜家禽中分离出了空肠弯曲菌、结肠弯嗌菌和 海鸥弯曲菌，并对检验过程中遇到的问题进行了探讨。 1 材料和方法 1．1 材料 1．1 1 冰鲜家禽 珠鲜鸭、冰鲜鹅、冰鲜乳鸽(广州出口 公司产品)。 1．1．2 培养基和试剂 Preton肉汤、Campylosel选择性 平板、5％绵羊血平板、微需氧剂、Vidas弯曲菌试剂盒、 Api弯曲菌试剂条和相关试剂、抑菌剂 (Campylobacter Growth Supplement1、添加剂 (Pleston Campylobaeter Selec— live1、氧化酶纸片 ( 上培养基和试剂均由广州仟江公司 和广州环凯生物制品公司提供)。 1．1．3 仪器 自动荧光酶标免疫分析仪 (Vidas)，由法 国 一生物梅里埃公司生产。 1．1 4 其它 棉拭子、微需氧带、Api Campy编码手册。 1．2 方法 510623】 1．2．1 用无菌消毒棉整涂抹禽体的皮肤、口腔、腹腔等 部位 ，直接把棉整放人 Preton肉汤管中42℃微氧培养 36～48h。 1．2．2 取出部分增菌后的肉汤灭活 15rain，在 Vidas仪 器上快速筛选。 1．2．3 阳性结果的肉汤划线分离到 Campylosel选择性 平板上，42℃微氧培养36～48h。 1．2．4 Cam选择性平板上选择大小 1～2rIin!、圆形、凸起、 有光泽、不透明、边缘整齐或扁平、灰色、半透明、边缘不规 则、沿接种线向外汇流倾向、革兰氏阴性、氧化酶实验阳性 的菌落，纯分离到5％绵羊血平板．37℃微氧培养36～48h。 1．2，5 血平板上选择氧化酶实验阳性、革兰氏阴性、逗 点状、海鸥状、S型的菌落用 Api进行生化实验．查找弯曲 苗编码手册，确认是否弯曲苗。 1．2．6 保存菌种 2 结果(见表 1) 表中数字为选择性平板上形态可疑，外观上相似的菌 落编号，其生化实验均是纯分离到血平板上的菌落进行的。 分离出的弯嗌菌革兰氏染色后在镜下的形态均是逗 点状和海鸥飞翔状，未观察出S形。其中，打★的菌落经 染色后视野下均是海鸥飞翔状，但 Campy Apl结果为阴 性，此菌落有待进一步证实。 本次试验培养时问均是 36～48h，培养24h的平板上 几乎观察不到有菌生长，培养 36h后苗落生长迅速，到 48h左右就能观察到形成了明显的菌落。 表 1 球鲜家禽检验结果 样品 曹暮■号 氧化肆试验 革兰氏采邑艟妆 妆验蛄秉 汪。 毓 桨嚣 明性。襄中 岫舳阳性结果 作者筒介：许龙岩 (1 O一)．男，黑龙江人，广州出入境检验帻 3 苎 苎苎三票师，医学学士t主要从事分于生特学方浩检验食品中 3．1 微生特的研宽 。 。 讨论 弯曲苗是禽类肠道正常寄生菌，因此禽体腹腔中的 维普资讯 http://www.cqvip.com 益 2000年第三期 Food Science and Technology No．3，2000圈 检出率应该高于其他部位，但此次检验中冰鲜鸭 3的皮 肤和冰鲜鸽的 口腔中分离出了胎儿弯曲菌和海鸥弯曲 菌，腹腔中却未检出，这可能是冰鲜家禽被加工工艺流水 线上的某个环节污染所致。为了能准确掌握整批产品污 染的程度，又便于监控冰鲜家禽工艺流水线的各个环节， 取样时应用棉拭子涂抹禽体的皮肤、口腔、腹腔各个部 位。分别培养进行检验。 3 2 本次检出的弯曲菌苗落在 CampylOSel平板上的形 态为两种。多数为太小 1—2nml、水滴状、发亮、凸起、边缘 整齐或不整齐、沿接种线向外汇漉倾向的菌落。只有鸭 1—1的菌落较为特殊，其大小3～5nml、浅灰色、扁平、边 缘整齐、无光泽的散在的单个菌落 ，经革兰氏染色后在镜 下的形态与其他阳性菌落没有差别 ；此菌落用肉汤培养 后，分离到血平板上培养就形成与前一种形态相同《大小 1～2mm)的菌落。 如何选择平板上的菌落进行纯分离，是检验过程中致 关重要的一步。表中观察到，同一个禽体的同一个部位取 样，增菌后划线分离到 Campylosel选择性平板上的菌落， 肉眼观察形态相似、氧化酶阳性，但经 Api实验后得出的 并不都是阳性结果。再者，同一个平板上分离出的可疑菌 落。虽氧化酶试验、革兰氏镜检显示为弯曲菌的形态特征， 但在Api上又表现出不同的生化特性(冰鲜鹅)。因此，平 板上必须挑取3 5个可疑菌落纯分离到血平板，再进行 下一步试验，才能准确检出被污染样品中的弯曲菌。 3．3 染色应选择薪鲜菌落，培养时间过长的茵落在镜下呈 球型，而不是海鸥状和逗点状 在进行革兰氏染色时，弯曲菌 着色较浅不容易观察，如果沙黄复染液的复染时间延长到 2rain(正常为lmin)，菌体着色较深，容易观察其形态。 3．4 本次试验阳性菌种均用含 15％甘油的脑浸出渡制 成菌悬液，分装冻存管在 一70q。冰箱中保存。冻存后的菌 种直接铺到血平板后，微氧培养可以形成典型形态，但经 革兰氏染色菌体在镜下呈规整的球型。这些菌落接到肉 汤管中培养，再划线分离血平板微氧培养36～48h，染色 镜检菌体呈海鸱杖或逗点状： 保存 4～6个月后菌种迅速解冻，直接铺到血平板上 37％微氧培养 36～48h，有时菌落呈灰色、隆起、边缘不整 齐、无溶血环、有粘性的水泡状菌落(革兰氏染色未观察到其 形态)。把这些菌落再划线分离到血平板上微氧培养会形成 形态相同的水泡状菌落，此菌落经内汤培养再分离到血平 板上徽氧培养，未观察到有菌落生长。但一起冻存的其他冻 存管直接倒^ Preton肉汤中微氧培养后，划线分离到血平 板微氧培养36～48h就呈现弯曲菌的典型形态。此现象可能 是在低温下或解冻时细胞壁破裂，细胞质渗出，在血平板上 出现上述形态，但其子代可能仍保持亲代遗传性。因此下一 代在血平板上会形成形态相同的水泡状菌落。但在液体培 养基培养时，弯曲菌可能会修复细胞壁。在血平板上呈现弯 曲菌的典型形态，革兰氏染色在镜下也呈海鸥杖或逗点状。 参考文献： [1】时常仁 ．医用微生物学．长春：吉林科学技术出版 社 ．1990．142～143 [2]陆德源 医学微生物学《第~-,gft) 北京：人民卫生出 版 社 ．1993．203—204 【3]孟陪赫 食品卫生检验方法注解 ．北京：人民卫生出 版社 ．1991．196～197 [4】日本食品卫生协会 食品卫生检验手册 ．天津：天津 科技翻译 出版公 司，1993．123～124 [5]橱本升 ．动物微生物学 ．长春：吉林科学技术出版 社 ．1995．543—546 [6】黄伟坤 ．食品检验与分析 北京：轻I业出版社， 1989．788—790 【7】韩文瑜．病原细茵检验技术．长春：吉林科学技术出 版社 ．1992．327～328 [8】娄永新．实用临床细茵学检验进展 ．天津：天津科技 翻译出版公司，1993．149—152 f9]吴信法 ．兽 医细茵学 ．北京：中国农业出版社， 1996．125～127 (上接第56页) 表6 气柱体积表 3 结论 通过分析，各批号活力不同的酵母在 0—20rain时间 内，气柱上潦呈平行趋势，各组差距不明显；后2O～35min 时间段内，高糖活力W600的酵母显示出良好的上涨趋 势，其产品性能依旧良好，气孔均匀致密，不易塌陷，反映 出该酵母本身的莨好性能。 在实际生产中，面包房生产者可按自身生产的需要， 对使用得特别好的酵母留样，冰箱冷藏。根据平常习惯的 糖、盐使用量配成溶液，依照本文使用方法，只要500niL 量筒和天平，与试用的酵母比较，绘制成曲线，就可大致 估计其活力情况；或者面包烘焙出现问题，查找原因时以 此作一基础分析。 参考文献： [1]张守文 ．面包科学与加工工艺．中国轻3-业出版杜， 1996 [21洪积仁 ．烘烤食品工艺学．杭州商学院，1985 [3】薛效览．面包加工及面包添加荆 ．科学技术文献出 版社 ．1998 维普资讯 http://www.cqvip.com