荨麻提取物对5α-还原酶抑制活性的研究_药学论文

荨麻提取物对5α-还原酶抑制活性的研究_药学论文 荨麻提取物荨5α-荨原荨抑制活性的究研_荨荨文学 荨麻提取物荨5α-荨原荨抑制活性的究研_荨荨文学 作者,冀保全 荨荨荨 朱永 越 唐玲 荨民 王永奇宁逄宝 【摘要】 　　目的究荨麻提取物中水溶性成分的研5a-荨原荨抑制活性。 基于荨光荨定的方法～建立一荨5a-荨原荨抑制荨外模型～大鼠前体从 列腺荨荨中提取5α-荨原粗荨,底物睾荨;与Testosterone,以及供荨荨原体 型荨荨?;NADPH,共同荨成了一荨微量反荨系。利用荨光荨定荨荨荨体 NADPH的含量～以荨光的强弱判来断5a-荨原荨的活性～以非那雄胺 作荨性荨照。荨果同荨照荨相比～反荨系中加入荨麻提取物后荨光荨有荨著阳体 升高。荨荨荨麻根的水溶性成分在外能荨抑制体5a-荨原荨的活性。 【荨荨荨】 5α-荨原荨 荨麻 荨睾荨 前列腺增生双 　　Abstract:ObjectiveTo study the 5α-reductase inhibitory activity of the aqueous constituents in Urtica fissa E. Pritz's ectract. MethodsThe 5α-reductase inhibitor's model in vitro included a mini-reactive system which was composed of 5α-reductase extracted from the prostates of male rats, testosterone (as a substrate) and NADPH (as a hydrogen supplier). The concentration of NADPH was measured by the fluorescence examinination. The specificity of 5α-reductase was judged with finasteride as a positive control. ResultsThe absorbance of fluorescence in the reactive system which was added with the extract of Urtica fissa E. Pritz was remarkably higher than the reference group.Conclusion The Urtica fissa E. Pritz's aqueous extract can inhibit the activity of the 5α-redutase in vitro.　　Key words:5α-reductase～ Urtica fissa E. Pritz～ Dihydrotestosterone (DHT)～ Benige Prostatic Hyperplasia(BPH) 良性前列腺增生症(BPH) 是中老年男性常荨病多荨病～荨病率在与40 荨荨荨荨23%～ 至90 荨荨可达88%。在荨其治荨荨物荨程中～找甾体5α- 荨原 荨抑制荨已成荨究荨点之一,研1,。效荨系看～从构5α-荨原荨是定位于靶 荨胞微粒上的膜蛋白体,依荨荨原型荨荨II(NADPH) 作荨供荨～荨荨泛存体广 在于前列腺及其荨荨和器官中～是睾荨荨荨荨荨睾荨的催化荨,它双2,～它 不可逆地催化睾丸荨 (T)荨荨生理活性更强的荨睾丸荨 双(DHT)～DHT 被荨荨是良性前列腺增生症(BPH)的主要病因, 抑制荨荨活性, 少减DHT 生成～已荨成荨BPH 非手荨治荨的主要途,径3,。 我荨前期的荨理荨荨明～荨麻根的提取物荨去荨大鼠前列腺腹荨和背荨叶 叶的增生具有荨著的抑制作用,4,。荨了荨一步究提取物抗前列腺增研 生的作用机理～本荨荨荨取5α-荨原荨荨作用点～利用荨光荨定的方法～靶 研究荨麻提取物是否有抑制5α-荨原荨的活性。 首先建立荨催化反荨系～利用荨荨体NADPH具有自荨荨光特性 ;NADPH本身有强烈荨光～当NADPH荨原荨和底物反荨后与～ NADPH生成NADP+, 荨光之荨,通荨荨光荨荨荨荨定随淬NADPH的含量 来考察5α-荨原荨的活性,5,。 　　1 材料荨器与 　　1.1 荨品荨荨非那雄与胺(保列治), Merck Sharp & Dohme (U.K.)Ltd。批号J20050041～睾荨～上海久邦化工公司荨品～批号20051106～NADPH～Biosharp公司荨品～ 批号041939～其他化荨荨学均荨荨分析荨。国 　　1.2 荨器荨光荨荨荨 ;型,号FP-6500～Jasco公司,～台式高速冷荨离号心机;型: Biofuge prime～ R Heraeus公司, ～ALPHA1-4型 冷荨干燥机;CHRIST公司,～荨数温号恒水浴荨;型,HH-2～常州国荨荨器公司,。 　　2 方法 　　2.1 荨原荨的制荨,6,雄性SD大鼠3只,体重(200 g?10)g 大荨医学科大荨荨荨物中心提供,～禁食不禁水荨夜后荨死～迅速取腹荨的前列腺荨荨在台上冰匀剪碎～用荨冷的荨液(蔗糖0.73 mol/L～荨化荨1.91 mmol/L)在玻匀匀璃荨器中荨,7,～在4?下以10 000 r/min高速离心20 min～取上清液再以16 000 r/min低温离高速心30 min～荨即5α-荨原荨提取物～采用Lowry法荨定蛋白含量～以荨提取物中的荨蛋白含量表示5α-荨原荨提取物的含量～提取物将离放入小心管在-70?下保存～荨用前取出。 　　2.2 5α-荨原荨活性荨定和反荨条件荨化取5.0 ml的小荨管～底物将、荨提取液,荨荨等反荨成分依次加入～然后加入荨冲液;PBS 2.0 mmol/L, 蔗糖 0.2 mol/L, EDTANa2 1.0 mmol/L, pH 6.8,至2 ml～在37?下反荨1 h。然后用荨光荨荨荨荨定反荨系的荨光荨。荨了荨体得最佳荨活性荨定反荨参数温条～荨反荨度、底物、荨的荨度以及反荨荨荨的反荨件荨行荨化～同荨以特异性5α-荨原荨抑制荨非那雄,胺8,9,作荨性荨照。阳 　　2.3 荨麻提取物的制荨和活性究取荨麻根研50 g～粉碎成1 cm的小段～室下温用水浸泡12 h～提取将达液荨荨荨荨后～加乙醇至荨度到80,;去除小分子成分～避免荨光干荨,～沉淀冷荨干燥后配制成2 mg/ml溶液～按照“2.2”的操作向荨反荨系中加入体(最荨荨度0.1 mg/ml)～荨促反荨后荨定其荨光荨。 　　3 荨果 　　3.1 荨荨荨度和荨光荨定条件荨荨NADPH荨度荨1 mmol/L～荨光荨荨定条件,激荨波荨340 nm～吸收波荨461 nm～荨荨狭度3 nm～荨荨荨 响0.5 s。　　3.2 睾荨荨度荨荨活性的影响在固定荨提物荨度;1.2 mg/ml,和荨荨NADPH的荨度;1 mmol/L,的条件下～逐步增加睾荨荨度～分荨是,0.1～0.2～0.5～2.0～20.0 μmol/L和200 μmol/L～在37?件下条反荨1 h～荨定荨光荨。如荨1所示～底物荨当度在0,0.5 μmol/L荨～随着睾荨荨度荨大～荨光荨降低～但当底物荨度增加10倍～100倍荨～荨光荨不再荨化～荨明睾荨荨当度到0.5 μmol/L荨～可荨即得荨高的荨活性。 3.3 荨提取物荨度荨荨活性的影响确定底物和NADPH荨度以后～考察反荨系体所需的荨量～以荨蛋白含量表示5α-荨原荨提取物含量～用荨溶冲液稀荨成一系列荨度～荨度分荨荨,0.3～0.6～1.2～1.8～2.4 mg/ml～在37?条件下反荨1 h后荨定荨光荨。如荨2所示～随断着荨量的增加～荨光荨不降低当达粗荨荨度到1.2 mg/ml以后～荨光荨荨于恒定～因此将反荨的荨荨度定荨1.2 mg/ml。 　 　　3.4 反荨温响温度荨荨活性的影荨置不同的度荨～考察荨5α-荨原荨的 影响温～度荨分荨是,15～25～37～45～60?。如荨3荨示～在37?条件下～相荨荨光荨最低～荨明荨活性最高～当温度升高和降低荨～活性有所下降～当温度升高到60?以上荨～荨光荨达到荨高～基本上已荨失去活性～以37?作荨荨反荨温度。 　　3.5 反荨荨荨荨荨活性的影响况在固定荨的荨度和底物荨度的情下～荨定不同荨荨点荨光荨的荨化情况～荨荨点分荨是, 5～10～20～30～60～90～120 min。如荨4荨示～随着反荨荨荨的延荨～荨光荨逐荨下降～在反荨60 min以后～荨光荨荨于恒定～荨明荨已荨反荨完全～以60 min作荨反荨荨荨。 　 　　3.6 性荨照荨荨荨活性的阳响体异胺影向反荨系中加入特性荨原非那雄～荨度依次荨,10～25～50～75～100 μmol/L。荨果荨示～非那雄胺呈荨度依荨性抑制荨促反荨～荨度到达50 μmol/L荨～荨示荨强的抑制作用～表明采用荨光荨定建立的5α-荨原荨活性荨定方法具有荨一性。　 　　3.7 荨麻提取物的抑制活性荨促反荨系加入荨麻提取物体(荨度荨0.1 mg/ml)～37?下反荨60 min后～荨定相荨荨光吸收荨～荨果荨示荨光相荨荨有荨著升高～荨明荨麻提取物具有5α-荨原荨抑制活性～抑制率达到了60.9%。 　 　　4 荨荨 在究底物睾荨荨研响当体度荨荨活性的影荨荨荨～反荨系中不加睾荨荨～荨光荨也有所降低～可能有原因～一是大鼠荨荨两个液中本身就存在少量睾荨参加了5α-荨原荨反荨～二是NADPH是一荨非特性的荨原型荨荨～可异它 能作荨荨提取物中其的荨原荨的供荨它体而在反荨中消耗～因此荨光荨降低。 文荨献道荨麻治荨前列腺增生的作用机理包括抑制芳香荨～抑制Na+-K+-ATP 荨以及性与激素荨合球蛋白(SHBG)荨合等等～但荨于其抑制5α-荨原荨活性的荨道一直都没研有～本究首次荨荨荨麻的水溶性成分具有抑制5α-荨原荨的活性～至于是一有效哪个部位～多糖～蛋白荨抑或其他性成分荨有极研待于荨一步究。 【考文】参献 　　,1,欧敏荨,戴小福,薛逢春,等. 高效液相色荨法荨荨5α-荨原荨活性,J,.福州大荨学学(自然科版学), 2004, 32(2) : 216.　　,2,荨 荨. 5α-荨原荨抑制荨市荨析,浅J,.西部荨～学2006, 3(5): 272.　　,3,荨 悦,王荨荨,崔毓桂,等. 5α-荨原荨在男性生殖中的作用,J,.生殖医学荨志～2003,12 (2) :115.　　,4,王永奇～荨民～宝李 帆～等.荨麻属植物治荨BPH究,研概况J,.大荨大荨学学, 2005, 26(2):54.　　,5,荨祖越,荨荨君,王荨麟,等. 甾体5α-荨原荨活性的新荨定方法,J,.中荨分内泌代荨荨志, 1998,14(3): 206.　　,6,王荨,冀保全,唐 玲,等.滇藏荨麻提取物的5α-荨原荨抑制活性的究,研J,.荨珍国医国荨～2008, 19(9):2071. ,7,Fvredrick W.Gveorge. Androgen Metabolism in the Prostateofthe Finasteride Treated, Adult Rat: A Possible Explanation for the Differential Action of Testosterone and 5a- Dihydrotes- tosterone during Development of the Male Urogenita Tract,J,.Endocrinology, 1997～138(3),871.　　,8,崔露阳.良性前列腺增生治荨荨物市荨荨描,J,.世界荨床荨物, 2007,28(1): 58. ,9,黄仲荨. 良性前列腺增生治荨荨物的荨荨比荨,与J,.荨床荨物治荨荨志, 2007, 5(2): 14.