【细胞培养】细胞同步化

【细胞培养】细胞同步化 问:在培养细胞取材做其他检测时，为了各个培养瓶中的细胞的齐同性，常须通过同步而实现。具体方法不明，好象是用维持培养液(含较低浓度培养血清)，而不是用生长培养液。 答:1.细胞同步化是指为研究细胞周期的不同阶段的生化特征,必须获得细胞周期一致性的细胞.因此,你首先看看是否需要用同步化的细胞 2.细胞同步化分为自然同步化和人工同步化二种方法,前者由于细胞群体受多种 ,对结果有很大影响，所以一般都采取后者. 条件限制 3.常用的人工同步化法分为诱导同步化,选择同步化或两者结合. 1):诱导同步化法: a.胸腺嘧啶阻断技术,先高浓度胸腺嘧啶培养细胞，使细胞不能通过S期,再改变其浓度，解除抑制,所有细胞都开始DNA合成，即获得同步化细胞. b.中期阻断法,常用秋水仙素来抑制微管聚合,将细胞阻断在有丝分裂中期.此法不常用. 2)选择同步化法: a有丝分裂选择法,这种方法主要是根据细胞周期的不同阶段的生理变化设计的方法.主要特点是可以获得一定数量的M期的同步化细胞，不受药物影响,同步化高，但获得细胞数量少，步骤多，且只能是在贴壁细胞中可以用. b 细胞沉降分离法,主要用于悬浮细胞，其理论依据是细胞周期不同阶段的细胞体积不同.因为细胞在某一离心力场中的沉降速度与其半径的平方成正比. 用维持培养液(含较低浓度培养血清)可不是用来获得同步化细胞的哦! 问:用MTT法间接反映细胞增殖活性，是否需要细胞的同步化处理, 答1:如果你做的实验中干预因素是促进细胞生长的，我认为是需要做无血清或0.5%浓度血清(有些细胞无血清生长不好)同步化的;如果你做的实验中 干预因素是抑制细胞生长的，那细胞无血清同步化就可以不是太严格要求。 但是尽可能使每组实验细胞处于G0期，或者在同一生长周期,这对于实验结果的可信度和可重复性是十分有好处的。 作MTT时需要设定对照组，其他各组都分别和对照组比较，所以无需同答2: 步化。 答3 :不需要的，因为已经有对照了。同步化反而加入了一个周期的干扰因素，不能反映生理状况了。 个人觉得不需要同步化，预实验时做过同步化，测出来的OD值都低于0.2，同步化是为了使细胞处于同一周期，而MTT与细胞周期没有关系 问:提取细胞蛋白时候，如果不进行血清饥饿同步化，有什么后果, ,因为可能是由于血清刺激而导致达答:我觉得组间的蛋白表达量将无法比较 量的不同吧