【doc】运用实时荧光定量PCR技术检测424例患者HPV结果分析

【doc】运用实时荧光定量PCR技术检测424例患者HPV结果 运用实时荧光定量PCR技术检测424例患 者HPV结果分析 第34卷 5262010年第7期 黑龙江医学 HEIL0NGJIANGMEDICALJOURNAL VoL34.No.7 Ju1.2010 运用实时荧光定量PCR技术检测424例患者HPV结果分析 曹海燕,梁红艳,赵彩凤 (哈尔滨医科大学第四临床医学院检验科,黑龙江哈尔滨150001) 摘要:目的探讨采用实时荧光定量PCR反应(qPCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及检测 HPV分型的临床意义.方法用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测424例门诊患者阴道分泌物中HPV6/ 11和HPV8个基因型(HPV16,18,31,33,45,52,56,58型)的病毒拷贝数.结果共检出HPV6/11阳性者 99例,阳性率为23%,其中<20岁年龄组阳性率最高,达到50%;共检出HPV8个基因型阳性者103例,阳 性率为24%,其中>50岁年龄组阳性率最高,达到42%.结论qPCR检测技术具有灵敏度高,特异性强及 操作快捷等特点,可为HPV感染患者的临床治疗及预后观察提供可靠依据,具有较高的临床应用价值. 关键词:荧光定量;乳头状瘤病毒 doi:i0.3969/j.issn.1004—5775.2010.07.020 学科分类代码:320.1160中图分类号:R446文献标识码:B Analysisof424CasesHPVDetectionwithQuantitativeReal——TimePCR CAOHai—yan,LIANGHong—yan,ZHAOCai—feng,eta1. (TheFourthAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity,Harbin150001,CHINA) Abstract:ObjectiveTodetectthehumanpapillomavirus(HPV)genotypingwithquantitativereal—timePCR (qPCR)andtoexploretheclinicalsignificance.MethodsThequantitativereal— timePCR(qPCR)wasusedto detectHPV6/11andHPV8(HPV16,18,31,33,45,52,56,58)DNAin424secretionsamples.Results99 HPV6/11positivesamplesweredetectedwithapositiverateof23%;103HPV8positivesamplesweredetected withapositiverateof24%.ConclusionWithhighsensitivity,rapidityandaccuracy,qPCRissuitableforclini— calapplication.Alsoitcanprovidereliableinformationoftreatmentandprognosisforpatients. Keywords:qPCR;HPV6/11;PapiUomavirus HPV是一类基因组大小约8000bp的DNA病 毒,有多种基因型(也称亚型),已有120多个亚型 被确定,其中约有40种涉及生殖道感染,约20余种 与肿瘤有关.由于HPV体外不易培养,亚型较多, 实除对溶骨性骨转移有效外,还对混合性及成骨性 骨转移有显着的临床疗效. 本研究发现放疗联合应用双膦酸类药物唑莱 膦酸总有效率优于单纯放疗组(P<0.05),联合应 用磷酸盐类止痛起效时间早于单放组,而缓解时间 长于单纯放射治疗,但联合二膦酸类药物组差异性 更大.进一步证实,唑莱膦酸配合放疗对骨转移瘤 有一定的协同作用.唑莱膦酸可在短时间内输注, 患者依从性高,故为癌症骨转移患者提供了一个有 效,安全,方便的辅助治疗,值得临床推广使 用 参考文献: [1]周际昌.实用肿瘤内科学[M].北京:人民 卫生出版社,1997:568,571. [2]殷蔚伯.肿瘤放射治疗学[M].北京:中国 协和大学出版社,2001:1088,1091. [3]2PendharkerD,GoyalH.Loadingdoseiban— dronateinrapidpainmanagementofmetastaticbone disease(MBD)[J].JClinOncol,2006,24:18—80. (编辑:谢忠艳) (收稿Et期:2010—05—05) 第34卷 2010年第7期 黑龙江医学 HE1LONGJIANGMEDICALJ0URNAL VoI.34.No.7 Ju1.2010527 因此,准确迅速的诊断和分型一直是HPV临床检 测研究的热点.本实验室对428例门诊患者样本 进行了HPV6/11和HPV8个基因型(HPV16,18, 31,33,45,52,56,58型)的DNA定量检测FQ— PCR测定.现报告如下. 1材料与方法 1.1研究对象 428例标本来源于2009—07,2010—05间,在 本院妇科就诊的患者. 仪器与试剂:DA7600型全自动荧光定量PCR 分析仪(达安公司);HPV6,11型和HPV8个基因型 检测试剂盒(中大达安基因有限公司). 1.2取材方法 用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物,在用 无菌拭子伸入宫颈内,停5s后,旋动棉拭子采集宫 颈分泌物,将棉拭子置入无菌管内,加入1.0mL的 生理盐水中,置于4?冰箱保存待检. 1.3FQ—PCR条件 按照说明书从样品中制备DNA模板.将模板 放入PCR反应管内,置人自动荧光PCR扩增仪进 行扩增.反应结束后,由电脑自动分析计算出定量 结果. 1.4判断 HPV值>10为阳性. 2结果 424例门诊患者病损组织或分泌物中,HPV6, 11型阳性者99例,感染率为23%;HPV8个基因 型阳性者103例,感染率为24%.具体结果见表1, 表2. 表1424例门诊患者HPV6/11DNA定量检测结果 表2424例门诊患者HPV8个基因型DNA定量检测结果 3讨论 在当今女性癌瘤中,宫颈癌的发生率仅次于乳 腺癌,位居第二,尤其在发展中国家,病死率持续处 于女性恶性肿瘤死亡的首位.早在1996年,世界 卫生组织(WHO)已将HPV确认为引发宫颈癌的根 本性致病因子j.HPV感染依其致病性不同常将 其分为高危型,低危型两类.高危型HPV感染主 要为HPV16,18型,这包含在我们的8个基因型检 测里面,与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生密切相 关;低危型HPV感染与尖锐湿疣等良性疾病相关, 主要由HPV6/11等感染造成. 近年来,宫颈癌的年轻化趋势非常明显,每年 以2%,3%的速度增长,这与生殖道人乳头瘤病 毒(HPV)感染率升高密切相关J.高天杨等的研 究认为,HPV16感染与宫颈鳞癌年轻化有关j.许 多研究报道认为,宫颈HPV感染有明显的年龄分 布特点,以20,28岁为最高.但本组资料显示, HPV感染率在各年龄段之间差别不大,提示HPV 感染是各年龄段患者共同的致病因素.因宫颈癌 的癌前病变时问可长达10年,因此通过防癌筛查, 及时发现宫颈病变(CIN)并化治疗,是可以阻 断其发展成为宫颈癌的.所以,采取有效的筛查方 法,对CIN进行诊断已引起广泛的重视,是防治其 病变发生的重要手段. 利用qPCR进行HPV感染的临床检测和分型, 具有迅速,便捷,灵敏度高,特异性强等特点.无需 进行PCR产物的后处理,定量范围广,无需做梯度 稀释.可为临床诊断和治疗提供可靠的依据.同 时,qPCR易于进行自动化和高通量检测,具有很高 的临床使用价值. 参考文献: [1]朗景和.子宫颈病变防治的几个问[J]. 世界医学杂志,2004,8(11):l,3. [2]吴霞,黄醒华,张为远.液基细胞学筛查妊 娠期妇女宫颈病变的临床研究[J].中华妇产科杂 志,2006,41(10):689. [3]陆春雪,杜丽敏,张淑兰,等.阴道镜检查 在子宫颈病变诊治中的价值——一附l894例分析 『J].中国内镜杂志,2006,12(5):455. [4]高天杨,王秋艳,齐爽.宫颈癌患者年轻化 与/.-~L头瘤病毒感染增加的关系[J].黑龙江医学, 2008,32(5):170—175. (编辑:谢忠艳) (收稿日期:2010—05—08)