[精要]荆半夏愈伤组织造就 2

[精要]荆半夏愈伤组织造就 2 生物学院实验报告 姓 名:谢应松 学 号:2012307040202 专 业:生物制药技术 课程名称:《植物细胞学》 指导教师: 李先良 成 绩: 实验题目:荆半夏愈伤组织培养 一、实验目的 1、认识和掌握组织培养 2、了解利用组织培养产生的愈伤组织 二、实验原理 组织培养，又称离体培养，是在无菌的条件下将活器官、组织或细胞放置在适宜的培养基内，并放在适宜的环境中，进行培养而重新形成的细胞、组织或个体。不同激素对不同品系荆半夏的诱导作用是不同的。 三、实验器材 实验器材:超净工作台、光照培养箱、刻度烧杯(1000ml)、小烧杯若干、量筒(1000ml、50ml)、容量瓶(500mL 、250mL)、棕色试剂瓶(500mL、100mL)、药勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、电炉、不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、无菌吸水纸、一次性手套、记号笔、标签纸，滴管、电子天平(感量为0.0001g)、一般天平(感量为0.1g)、高压灭菌锅、pH计(pH试纸)，三角烧瓶(100mL)、称量纸、 实验试剂:半夏、NAA、2,4-D，BA， 四、实验步骤验方法和步骤: (1)培养基的配制: (1)MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA; (2)MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA; (3)MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA; (4)MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA; (5)MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA; (6)MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA。 (2)愈伤组织培养 1、准备工作 接种前，用75%酒精棉球或20g/L新洁尔灭擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面适当位置(培养基中的生长物质各浓度见3)，打开超净工作台紫外灯，照射20-30min后关闭，然后打开风机，约10min后，再开日光灯可进行无菌操作。 2、外植体表面消毒 将半夏在自来水下冲洗干净，用小刀切去外围组织，切成小段置于50 mL烧杯中，用75%酒精浸泡30 s后，立即除去乙醇。移入含有1-2滴吐温20的0.1% HgCl2(或10,次氯酸钠)溶液中浸泡5 min，用无 菌水洗3次，无菌纸吸干水分后，置于经灭菌处理过的垫有无菌纸的培养皿中。使用镊子和解剖刀时，应先在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后，再将半夏切成约0.5 mm3的小块。以上操作都要求在酒精灯火焰旁进行。注意外植体切割时，动作要快，否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水，然后将无菌苗置于其中进行切割。操作人员必需严格按无菌操作规则完成这些步骤，否则会造成外植体污染。 3、 接种 将切好的半夏段接种至盛有培养基的果酱瓶中，每瓶接种2,3粒，快速封口，贴上标签，注明姓名、接种日期、培养基名称和培养材料名称。整理、清洁超净工作台台面。 4、培养 光照12h/d,光照度1500~2000LX，温度25?1?。大约15~25d后，果酱瓶中的外植体就可以胀大，形成愈伤组织。经常观察外植体的生长变化或污染情况，并在培养一段时间后统计外植体的污染率以及愈伤组织的诱导率 五、实验现象、结果记录及整理: 在光照培养条件下，有愈伤组织形成， 六、讨论与思考题解答: 在诱导愈伤组织形成实验中，有部分材料污染，但愈伤组织的诱导率较高。总结原因可能有以下几点: 本次实验愈伤组织诱导有小部分被污染，其中污染的可能原因 是:无菌室清洁度不够;接种时半夏组织暴露时间过长。另外，也有 可能是操作者本身没进行消毒，在实验过程中碰触到半夏段。