hplc法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸的含量

hplc法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸的含量 HPLC法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水 杨酸的含量 【摘要】  目的  建立高效液相色谱法测定复方 氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸含量。方法  色谱柱为 C18～流动相为磷酸盐缓冲液,0.01M,pH3.5,:甲醇,55:45,～ 流速为1.0ml/min～检测波长为278nm～柱温为25?。结果   氯霉素、水杨酸分别在 4.08，40.8μg/ml ,r=0.9989,、7.76，77.6μg/ml,r=0.9990,范围内呈良 好的线性关系～平均回收率分别为100.5%,RSD=0.66%,、 100.1%,RSD=0.52%～n=9,。结论  本方法简便、准确、 快速、重现性好～可用于该制剂的含量测定。     【关键词】  复方氯霉素洗剂, 氯霉素,水杨酸, 高效液相色谱法      Determination of chloramphenicol and salicylic acid in chloramphenicol lotion compound by HPLC     【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for content determination of Chloramphenicol and Salicylic acid in Chloramphenicol lotion Compound.Methods  The separation was performed on C18column.The mobile phase was consisted of KH2PO4buffer (0.01M ,pH3.5): methanol(55:45) with a flow rate at 1.0ml/min and detection wavelength at 278nm.The column temperature was 25?.Results  A good linear range of Chloramphenicol and Salicylic acid respectively in the range from 4.08，40.8μg/ml9r=0.9989))and 7.76，77.6 μg/ml(r=0.9990).The average recoveries were 100.5, (RSD=0.66,)and 100.1, (RSD=0.52,,n=9),respectively.Conclusion  This method was convenient,accurate,rapid and reproducible and suitable for the determination.     【Key words】  chloramphenicol lotion compound;chloramphenicol; salicylic acid;HPLC     复方氯霉素洗剂具有止痒、杀菌、消炎等作用～临床用于治疗脂溢伴毛囊炎型皮炎。据文献报道～该制剂的含量测定多采用紫外分光光度法或中和滴定法,1,。本文采用HPLC法同时测定氯霉素和水杨酸的含量～方法简便、快速、准确、重现性好～可作为该制剂的含量测定。     1  仪器与试剂     高效液相色谱系统～包括P680A低压四元梯度泵、UVD170U检测器、CHROMELEON色谱工作站,德国戴安公司,,氯霉素对照品,北京市燕京制药厂～批号:040612,～水杨酸对照品,南京白敬宇制药有限公司～批号:050319,,甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,复方氯霉素洗剂为本院自制。     2  方法与结果     2.1  色谱条件  流动相:磷酸二氢钾缓冲液,0.01M～pH3.5,:甲醇,55:45,,色谱柱:Symmetry-C18,150mm×3.9mm～5μm,,流速:1.0ml/min,检测波长:278nm,柱温:25?～进样量20μl。色谱详见图1,略,。     2.2  对照品溶液的制备  精密称取100?干燥至恒重的氯霉素和水杨酸对照品适量～用流动相稀释成浓度分别为0.204、0.388mg/ml的贮备液。再精密吸取该溶液1ml置10ml量瓶中～加流动相定容,摇匀～即得对照品溶液。     2.3  供试品溶液的制备  精密量取样品溶液1ml于100ml量瓶中～加入流动相～定容～摇匀～精密吸取该溶液1ml置10ml量瓶中～加流动相定容,摇匀～即得供试品溶液。     2.4  阴性对照溶液的制备  按处方比例,称取除氯霉素和水杨酸外的其余成分 适量制成阴性样品,再按“2.3”项下方法制成阴性对照品溶液。     2.5  标准曲线的绘制  精密量取2.2项下贮备液1、3、5、7、10ml～分别置50ml量瓶中～用流动相稀释至刻度～摇匀～即得系列标准溶液。按上述条件进样测定～以峰面积,A,为纵坐标～进样浓度,C,为横坐标绘制标准曲线～分别得氯霉素、水杨酸回归方程A氯霉素=1.1870+6.8450C,r=0.9989,、A水杨酸=0.09947+3.0291C,r=0.9990,。结果明氯霉素和水杨酸在 4.08，40.8和7.76，77.6μg/ml范围内线性关系良好。     2.6  精密度试验  精取2.2项下贮备液5ml置50ml量瓶中～用流动相稀释至刻度～摇匀～重复进样测定5次～结果氯霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.23%、0.98%。     2.7  重现性试验  取样品共5份～按“2.3”项下制备供试液～依法测定～结果氯 霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.53%、1.76%。     2.8  稳定性试验  取2.3 1项下供试品溶液室温放置0、3、6、9、12h进样测定峰面积～结果氯霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.54%、0.95%。表明溶液在12h内稳定性良好。     2.9  回收率试验  精密量取已知含量的样品1ml～分别准确加入“2.2”项下储备液各5.0ml、6.0ml、7.0ml～并分别置于100ml量瓶中～用流动相稀释至刻度～摇匀。按“2.5”项下方法试验～以回归方程计算各自的回收率～结果详见表1。表1  回收率测定结果     2.10  样品含量测定  取样品3批～按“2.3”项下方法制备成供试品溶液～按上述色谱条件测定～代入标准曲线计算含量～结果见表2。表2  样品含量测定结果     3  讨论     因本制剂中水杨酸含量是氯霉素的2倍～并且在278nm波长附近也有较大的吸收度～故选择氯霉素的最大吸收波长278nm为测定波长,2,。     由于本实验中以甲醇-水二元系统为流动相时水杨酸的吸收峰拖尾较重～后改用,0.01M～pH3.5,磷酸盐缓冲液后～二者的吸收峰均很对称～且空白对测定无干扰。故本文采用以上色谱条件。     本法可同时测定复方氯霉素洗剂中两主药的含量～操作简单、快速～结果准确可靠～可作为该制剂的含量测定方法。     【参考文献】     1  中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂,西药制剂,,第2版.北京:中国医药科技出版社,1995,103.     2  缪春辉,冷爱国,涂飞龙.复方氯霉素醇溶液中3种成分的含量测定.东南国防医药,2003～5(2):102.