酶催化荧光法测定啤酒中酪氨酸

酶催化荧光法测定啤酒中酪氨酸 ---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 酶催化荧光法测定啤酒中酪氨酸 摘要:本论文研究了牛血红蛋白(Hemoglobin，BHb) 作为过氧化物模拟酶，与L -酪氨酸反应生成产生荧光 二聚体。据此，建立了酶催化荧光法测定L-酪氨酸的 新方法。通过在体系中加入不同浓度的L-酪氨酸产生 不同强度的荧光，可以得到与L-酪氨酸的线性关系。 通过实验发现其线性范围在 4×10-7~2×10-5之间，方法检出限为 1.08×10-9，可用于啤酒中L-酪氨酸的测定,加标 回收率为94.3%~95.4%。该方法简单，快捷。12154 关键词:血红蛋白,酶催化荧光法,L-酪氨酸 In beer by tyrosine Enzyme Catalytic Fluorescence Method Abstract:This paper studies the bovine hemoglobin (Hemoglobin, BHb) as mimetic peroxidase reaction, and L- 1 / 5 tyrosine fluorescence two mer . Accordingly, a new method was established to determine the tyrosine Enzyme Catalytic Fluorescence Method . Fluorescence intensity by adding different concentration in the system of L- tyrosine, can obtain the linear relationship with L- tyrosine . The linear in the range of 4 × 10-7~2 × 10-5 through experiment, the detection limit is 1.08 × 10-9, and the recovery rate is 94.3%~95.4%, this method can be used. The method is simple, fast, and has good selectivity for the other amino acids. Can be used for the determination of tyrosine in beer . Key Words: Bovine hemoglobin,Enzymatic catalytic fluorescence,Tyrosine 目录 摘要1 引言1 1 实验部分3 ---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 1.1 仪器与试剂3 1.2 实验方法3 2 结果与讨论4 2.1 体系的吸收光谱4 2.2 测定条件的优化5 2.3 分析方法特性8 2.4 测定L-酪氨酸时采用不同反应体系的特性比较9 2.5 样品的测定10 苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)和L-酪氨酸(tyrosine， 3 / 5 Tyr)属于芳香族氨基酸，是机体合成各种蛋白质，激素及神经递质的重要前体物质。遗传缺陷、翳肾功能受损、神经免疫调节异常等多种因素可导致Phe和Tyr代谢紊乱，引发多种疾病如L-酪氨酸血症、白发病等。因此，测定机体Tyr浓度对研究相关疾病的病理生理基础和临床诊断、治疗监控均有重要意义。 辣根过氧化物酶,Horse Radish Peroxidase，简称HRP,是一种应用于酶分析中的一种标记酶。它是含有亚铁血红素的天然酶，以Fe+2为活性中心，具有天然的空间结构，高度的生物专一性和生物活性，广泛应用于以H2O2为氢供体的反应[15]。但是，天然酶不仅提取困难、来源短缺、价格昂贵，而且为了保持其生物活性，要求实验条件和操作外界环境均较为苛刻。因此，寻找一种价廉，稳定，易保存，且具有较高催化活性的模拟酶就愈来愈重要。 牛血红蛋白(BHb)[16]具有和天然生物酶辣根过氧化物酶(HRP)相同的铁卟啉辅基和相似的空间结构[17]，因而具备了过氧化物酶的特性，并且具有稳定、价廉的优点[18]。实验发现在碱性介质中，BHb在双氧水的存在下，与L-酪氨酸反应有强烈的荧光增强作用， ---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 荧光强度与L-酪氨酸的浓度有一定的线性关系，线性范围为4×10-7~2×10-5mol/L。用于啤酒中L-酪氨酸的测定，加标回收率在94.3%~95.4%之间。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 FP-750型荧光光谱仪,日本分光公司,,电子分析天平,北京赛多利斯天平有限公司,,pHS-3C型酸度计,上海理达仪器厂, 牛血红蛋白溶液:准确称取0.6780 g牛血红蛋白，用蒸馏水溶解稀释，定容至100 mL，配制成1.0×10-4 mol/L的储备液,工作液:储备液用水稀释为1.0×10-5mol/L，现配现用。 酶催化荧光法测定啤酒中酪氨酸(3): 5 / 5